类风湿关节炎患者关节滑膜液淋巴细胞CD25、HLA-DR的表达特征分析

河南省焦作市第二人民医院（454000）杨金玲

类风湿关节炎是一类以炎性滑膜炎为主的系统性疾病，具体病因还在研究中，目前未有较明确说法[1]。类风湿关节炎主要表现为手、足小关节的对称性、多关节、侵袭性关节炎症，普遍伴关节外器官受累以及血清类风湿因子阳性，如严重者可致使关节出现畸形或功能丧失[2]。基于相关研究表明，自身免疫性疾病的产生不光和免疫系统接触隐蔽抗原有关，免疫功能紊乱也是形成此项疾病的关键[3]。本文采用流式细胞仪对类风湿关节炎患者关节滑膜液淋巴细胞CD25、HLA-DR的表达特征进行分析，从而对类风湿关节炎发病机制行进一步认识，为类风湿关节炎临床治疗的开展提供一定依据，现行研究如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取我院收治的31例类风湿关节炎患者患者作为本次研究对象，所选31例患者均符合类风湿关节炎诊断标准。观察组关节滑膜液取自我院骨科，行膝关节置换或滑膜切除。其中女性23例，男性8例，年龄在29～56岁，平均年龄（38.41±6.34）岁。对照组27例，所选人群关节滑膜液取自由于外伤行截肢的正常人，其中女性18例，男性9例，年龄在23～50岁，平均年龄（36.22±6.41）岁。对照组与观察组两组患者资料比较差异无统计学意义(P＞0.05)。

附表 滑膜液淋巴细胞CD25、HLA-DR表达对比

1.2 方法 关节滑膜液淋巴细胞分离。选用20IU/ml肝素抗凝为关节滑膜液，3000r/min×10min离心，弃上清，在沉淀物中加入PBS重悬，制备淋巴细胞1500r/min×15min，选用淋巴细胞分离液（Ficoll）分离，将细胞的浓度调至1×106/ml，应用流式细胞仪检测，6h内结束。

免疫荧光染色。在FALCON试管（出品公司：美国BD）内添加20μl异硫氰基荧光素（FITC）标记的抗CD19单抗、藻红蛋白（PE）标记的抗HLA-DR单抗或抗CD25单抗、叶绿素蛋白（PerCP）标记的抗CD3单抗与三色同型对照免疫球蛋白，将其分别与100μl 1×106/ml细胞数的关节滑膜液行充分混匀，置于室温暗处行15min反应，后加入0.5ml PBS，充分混匀，24h内上流式细胞仪行严密分析。

流式细胞分析。采用FACS Calibur流式细胞仪，开机后以CaliBRITE 3荧光微球与FACS Comp自动软件对仪器灵敏度进行检查，对实验的获取条件行自动设定，其中包括荧光补偿以及光电倍增管（PMT）电压等，接着以CellQuest软件用样本对实验获取条件行进一步优化，并对各组样本管进行检测，获取104个细胞，最后对各类CD分子在淋巴细胞中免疫荧光阳性细胞的百分率行CellQuest软件分析。

1.3 观察指标 观察患者滑膜液淋巴细胞CD25、HLA-DR表达，其中包括T淋巴细胞（CD3+CD25+、CD3+HLA-DR+）与B淋巴细胞（CD19+CD25+、CD19+HLA-DR+）。

1.4 统计学分析 建立Excel数据库对数据资料进行分析，分析软件工具SPSS20.0，计量资料采用均数方差表示且用t检验，计数资料采用百分率表示且用X2检验，有统计学意义（P＜0.05）。

2 结果

对观察组与对照组两组人群实行滑膜液淋巴细胞CD25、HLA-DR表达对比，具体分析见附表。两组人群关节滑膜液表达CD25的B淋巴细胞与表达HLA-DR的T淋巴细胞、B淋巴细胞相比较，差异有统计学意义(P＜0.05)。

3 讨论

类风湿关节炎是一类关节疾病，其具有慢性、反复发作等特点，目前发病机制不明确。从目前研究来看，普遍认为类风湿关节炎的多发性关节炎是由于类风湿因子所引发[4]。通过研究表明，类风湿关节炎和免疫功能紊乱有一定 联系，在类风湿关节炎关节内与全身免疫反应过程中有许多复杂因子的参与[5]。CD25、HLA-DR细胞活化标志，在本实验中，类风湿关节炎患者关节滑膜液表达CD25的B淋巴细胞与表达HLA-DR的T淋巴细胞和B淋巴细胞与对照组相比，出现明显增多现象，差异有统计学意义(P＜0.05)。其结果表明类风湿关节炎患者在关节滑膜液中发生活化T淋巴细胞、B淋巴细胞明显增多特征。而免疫活性细胞的增多则表明了患者全身或局部免疫功能亢进。相关学者认为，活化T淋巴细胞在类风湿关节炎致病机制中有着重要作用，类风湿关节炎自身免疫反应的激发与延续是活化T淋巴细胞对树突状细胞、其他抗原细胞递呈抗原多肽的自身反应造成[6]。B淋巴细胞会被激活动T淋巴细胞促使产生免疫球蛋白，依据接触依赖性，非依赖性机制对单核细胞行侧记，促使细胞因子的分泌，这在诱导关节炎症状中有着巨大的作用[7]。活化的B淋巴细胞可产生自身抗体，同时又具备抗原递呈功能，其在抗原浓度较低的二次免疫反应阶段特别重要。淋巴细胞被激活普遍是由于协同刺激分子和与之相应配体的存在，其重要途径为CD28和CD80/CD86分子之间的相互作用，有相关文献报道，CD28和CD80/CD86分子不只是淋巴细胞活化的重要协同刺激信号，其在淋巴细胞亚群分化例里也有着十分重要的作用[8]。体内的细胞因子也能够对亚群活化以及淋巴细胞行调节，研究表明，类风湿关节炎发病机制中，抗炎性的白细胞介素4（IL-4）对辅助性T淋巴细胞亚群的激活可以起到有效作用。所以在治疗类风湿关节炎中，对细胞信号传递行改变，对促炎性细胞因子与抗炎性细胞因子的分泌维系平衡，阻断淋巴细胞过度激活等，可以作为治疗新思路。

综上所述，在类风湿关节炎患者关节滑膜液淋巴细胞CD25、HLA-DR的表达特征分析中可以发现，关节滑膜液淋巴细胞CD25、HLA-DR的表达特征为增高，免疫机能亢进，同时基于研究与相关资料查询表明，关节滑膜液淋巴细胞CD25、HLADR在类风湿关节炎患者发病机制中有重要作用。