HPLC 法同时测定3 种材质药用塑料瓶中5 种抗氧剂含量

饶艳春 熊 炜 朱碧君

江西省药品检验检测研究院江西省药品与医疗器械质量工程技术研究中心，江西南昌 330029

药用塑料瓶是由塑料吹塑加工成型而成，常用的材料有聚丙烯（PP）、聚乙烯（PE）、聚酯（PET）等，因具有无毒、耐腐蚀、强度高及质轻携带方便等优点，现已广泛用于固体制剂和液体制剂的包装[1-3]。在塑料的生产过程中，为使其在储存、使用过程中更加稳定，不因光、氧等因素的影响而导致材料老化、性质改变等问题，通常需加入多种助剂，如抗氧剂、抑酸剂、润滑剂等，这些添加剂在适当的条件下可以从塑料中迁移出来，影响药物的稳定性，进入人体易引发安全性风险[4-6]。“药品包装材料与药物相容性试验指导原则”规定塑料包装材料应重点考察添加剂、加工时分解产物对药物的影响[7]。本研究参考相关文献[8-15]，建立了高效液相色谱法同时测定PP、PE、PET 为原料制成的药用塑料瓶中5 种抗氧剂含量的方法。

1 仪器与试药

1.1 仪器

1260 高效液相色谱仪（美国Agilent）；MS105 电子天平（瑞士梅特勒公司0.01 mg）；BAS224S 电子天平（德国赛多利斯0.1 mg）；Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；Micropure uv/uf 超纯水仪（美国赛默飞世尔）。

1.2 试药

抗氧剂1010、168、1076、330，批号：MKBC8710、MKAA3717、MKBB8963、05928TI，含量：98%、98%、99%、99%，均由SIGMA-ALDRICH 提供；抗氧剂BHT（批号：LB68565，含量99.9%），由SUPELCO 提供；甲醇为色谱纯，由SIGMA-ALDRICH 提供；水为超纯水。22 批样品由13 个厂家提供，见表1。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相：甲醇（A）∶水（B），梯度洗脱（0～7 min，90%A；7～8 min，90%A→100%A；8～43 min，100% A；43～44 min，100% A →90% A；44～55 min，90%A），检测波长278 nm，流速1.0 mL/min，柱温30℃，进样量10 μL。

表1 样品信息

2.2 对照液制备

2.2.1 对照储备液 精密称取抗氧剂BHT、330、1010、1076、168 各0.05 g，分别置于100 mL 容量瓶中，加稀释液（甲苯∶甲醇=2∶3）至刻度。

2.2.2 混合对照液 精密吸取上述对照储备液各5 mL置50 mL 量瓶中，加稀释液至刻度，再依次稀释成5、10、20、30、40、50 mg/L。

2.3 供试品溶液

精密称取剪碎样品2 g，置具塞锥形瓶中，加稀释液20 mL，称定重量，加热回流3 h，放冷，用稀释液补足减少的重量，用0.25 μm 微孔滤膜过滤。

2.4 空白溶液

不加样品，按照“供试品溶液”制备方法进行操作。

2.5 系统适用性试验

取空白溶液、混合对照液、供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件测定，结果显示，5 种抗氧剂理论塔板数均＞20 000，各成分峰分离良好，分离度均＞5.0。见图1。

2.6 线性关系考察

取“2.2.2”项下混合对照液，按“2.1”项下色谱条件测定，以峰面积Y 为纵坐标，质量浓度X（mg/L）为横坐标进行线性回归，结果见表2。

2.7 检测限与定量限

取混合对照液逐步稀释后，按“2.1”项下色谱条件测定，以信噪比3∶1、10∶1 时的进样量为检测限、定量限。见表3。

2.8 精密度试验

精密吸取“2.2.2”项下浓度为50 mg/L 混合对照液，按“2.1”项下色谱条件，进样6 次，结果抗氧剂BHT、1010、330、1076、168 峰面积的RSD 分别为0.21%、0.10%、0.23%、0.09%、0.11%（n ＝6），说明方法精密度良好。

2.9 重复性与稳定性试验

精密称取3 种材质的样品（批号：170501、161003、16011901），各6 份，分别加入对照液适量，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件测定，计算含量（n=6），取重复性试验样品液分别于0、2、4、8、12、24 h 进样10 μL，记录峰面积，结果显示方法的重复性良好，供试品溶液在24 h 内稳定。见表4。

图1 空白溶液、混合对照品和供试品溶液高效液相色谱图

表2 回归方程、相关系数和线性范围

表3 检测限与定量限结果（ng）

2.10 样品含量测定

取“2.3”项下制备的供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件测定（n=2），结果显示，抗氧剂BHT 均未检出，口服液体药用聚酯瓶、聚酯药用滴眼剂瓶未检出抗氧剂，其余结果见表5。

表4 重复性与稳定性试验的结果（RSD，%，n=6）

表5 样品含量测定结果（μg/g）

2.11 加样回收率试验

精密称取3 种材质已知含量的样品（批号：170501、161003、16011901，分别为样品1、2、3，样品3 中未检出抗氧剂）适量，各9 份，按样品含量的80%、100%、120%分别加入对照液适量。按“2.3”项下方法制备回收率溶液，按“2.1”项下色谱条件测定。样品1、2 加样回收率结果见表6。

3 讨论

通过比较丙酮、环己烷、异丙醇、甲苯∶甲醇等溶剂对抗氧剂的提取情况，结合提取溶剂与流动相互溶情况，确定以甲苯∶甲醇（2∶3）作为提取溶剂，预实验选择超声和加热回流两种提取方法进行比较，回流提取效果更好，同时比较回流时间对抗氧剂提取量的影响，结果加热回流3 h 基本提取完全[16-20]。

分别以甲醇∶水、乙腈∶四氢呋喃∶水、乙腈∶甲醇为流动相，不同流速、不同梯度洗脱程序考察抗氧剂的分离效果，采用甲醇∶水为流动相梯度洗脱，各成分色谱峰分离效果最佳。

表6 加样回收率试验结果（n=9）

由于样品中未检出抗氧剂或检出部分抗氧剂，所以样品加入对照液进行重复性和稳定性试验。国内外标准及相关资料，对抗氧剂限度均有规定，如食品药品监督管理局要求食品中抗氧剂总量不得超过0.02%，《欧洲药典》规定非肠道制剂及眼科制剂用容器PE、PP等材料中抗氧剂添加不能超过3 种，单个抗氧剂及抗氧剂总量均不得超过0.3%。GB9685-2016 规定抗氧剂BHT 在PE、PP 中不得超过0.5%，PET 中不得超过0.13%，抗氧剂1010、330、1076 在PE、PP、PET 中均不得超过0.5%，抗氧剂168 在PE 中不得超过0.2%，PP 中不得超过0.25%[21-23]。本次试验每批样品中检出的抗氧剂不超过3 种，总量≤0.047%，小于《欧洲药典》和GB9685-2016 规定的限值，该方法可用于3 种材质药用塑料瓶中5 种抗氧剂的测定，可为药用塑料瓶质量研究及药物相容性试验提供参考。