阴道念珠菌几种常用检验方法

【中图分类号】R197      【文献标识码】A      【文章编号】1004-7484（2019）03-0072-01

念珠菌阴道炎是常见的阴道内感染炎症，患者多以排尿不适、外阴或阴道烧灼感、疼痛、奇痒难忍等症状，病菌侵袭尿道时还可导致尿频、尿急、尿痛，患者阴道分泌物虽然无异味，但外阴充血红肿，搔抓过度可导致外阴皮肤破溃，白带为凝乳或豆渣样，显微镜下可观察到白带存在芽孢或菌丝。

阴道念珠菌的发病原因为：女性生殖系统特殊的生理结构决定了这一部位多事地带的性质，阴道结构中阴道口与外界相通，周围邻近外阴区，外阴区容易被尿液、腺体分泌物、肛门排泄物污染。阴道平时又有经血和白带流出，且阴道口温暖潮湿的环境为真菌感染提供了条件。大部分阴道真菌为白色假丝酵母菌，放线菌和阴道纤毛菌则十分罕见，能导致阴道感染炎症的病菌85%为白色念珠菌，这种细菌多分布在正常人的消化道、阴道、皮肤和口腔中，因此阴道念珠菌感染多为内源性条件致病菌感染，虽然大部分时间白色念珠菌在阴道中并不会产生危害，但在阴道微生态系统平衡被破坏后则容易感染阴道念珠菌病。目前诊断阴道念珠菌感染时多依靠患者典型体征和真菌检验，以确定真菌作为诊断依据。

1 标本采集

采集阴道分泌物标本前24小时禁止阴道灌洗、局部用药、盆浴、房事，以免生理变化对检验结果的准确性造成影响，操作时所用的棉拭子、消毒刮板、吸管不能粘有任何润滑剂和化学试剂，并保持干燥清洁;使用窥阴器前可使用少量生理盐水对表面进行湿润，根据检验目的选择合适的标本取材部位，例如阴道深处、宫颈管口、阴道后穹窿等部位多使用棉拭子取材，操作前先以盐水浸湿，随后制备生理盐水涂片进行阴道分泌物检验，将其涂制成薄片后以95%乙醇固定，采取革蘭染色、巴氏染色、姬姆萨染色检验可筛查出病原微生物。

2 浓集法检验

将标本放置在清洁的干燥试管内，加入氢氧化钠溶液1mL后混匀，水浴3～5min，温度为37%，随后取出标本以1500转/min的速度离心5min，将浓集的沉淀物取出制作成涂片，显微镜下观察，可对不同种类的真菌进行观察，并能提高阴道念珠菌的检出率。

3 湿片检验

与生理盐水悬滴法滴虫检查方法相同，若有必要，可在涂片上滴1滴氢氧化钾溶液，混匀后加上盖玻片，低倍镜下通常可观察到假丝酵母菌的假菌丝和卵圆形孢子，随后以高倍显微镜再次确认，高倍镜视野下通常可观察到无色透明、卵圆形的单个或成群的分枝状、链条状、芽生孢子，此时即为检出真菌。若将阴道分泌物取出并对其进行革兰染色，随后镜下观察，则能观察到呈分支状或链条状的假菌丝以及卵圆形的革兰阳性孢子，形态同样为分枝状或链条状。

4 培养鉴定

培养法是鉴定真菌的常用检验方法，将阴道分泌物接种到真菌培养基上，根据分离培养的形态特征以及菌落涂片镜检观察到的芽生孢子和假菌丝进行判断。（1）将温度设置为25～37℃，接种到沙氏培养基中，菌落都能生长成高出培养基表面、闪光、质地软而平滑、奶油色的酵母样菌落，而陈旧的菌落则出现皱褶，颜色逐渐变深且质地变硬，培养基中央有气泡出现，气泡中不存在菌丝但营养菌丝丰富，镜下观察可发现大量的芽生孢子和假菌丝;（2）而接种到葡萄糖蛋白胨液体培养基中在37℃环境下持续培养48小时，可发现白色念珠菌管底生长，且无菌膜。将0.005%浓度的氯化三苯基四氮唑加入到葡萄糖蛋白胨琼脂后，白色念珠菌会变为淡红色或无色变，而其他酵母菌或念珠菌则会出现红色，热带念珠菌色变最为明显，呈深红色甚至紫色;（3）接种到玉米吐温-80琼脂培养基中在25℃的条件下培育24小时，可发现白色念珠菌顶端后厚壁孢子形成，且存在大量树枝状菌丝：（4）在0.5mL～1.0mL正常人血清中接种纯培养的念珠菌，37℃环境下培育30分钟～3小时，可观察到念珠菌有芽管产生，且芽管长于细胞3倍以上，末端宽度仅为细胞的一半。

阴道念珠菌检查能为女性泌尿生殖系统疾病提供重要依据，浓集法检验、湿片检验和培养鉴定是常用的三种阴道分泌物念珠菌检验方法，检验时首先要注意标本采集和制备质量，做好取材统一、检验及时，灵活选择检验方法，提高检出率和准确度。

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作者简介：

王春容，检验科，主管技师，毕业于川北医学院，大学本科学历，擅长临床基础检验，致力于检验医学相关科普