UPLC-MS/MS测定复方甘草片中甘草酸含量

汤丽昌

摘 要：目的：建立超高效液相色谱-串联质谱联用技术测定复方甘草片中甘草酸。方法：采用Agilent EclipsePlus-C18色谱柱（2.1 mm×50 mm，1.8 μm），以0.1%甲酸乙腈-0.1%甲酸水（70∶30，V/V）为流动相进行洗脱，流速为0.2 mL·min-1，柱温30 ℃，在三重四级杆检测器中采用正离子多反应监测模式（MRM）进行检测。结果：甘草酸在0.313 2～6.264 0 μg·mL-1（r=0.999 9）呈良好线性关系，甘草酸加样回收率为98.6%，RSD=1.07%。结论：该方法灵敏度高、抗干扰性强且准确性好，可适用于复方甘草片中甘草酸的含量测定。

关键词：复方甘草片;UPLC-MS/MS;甘草酸

Abstract：Objective： To establish a method for quantitative determination of glycyrrhizic acid in liquorice tablets by UPLC-MS/MS. Method： The Agilent EclipsePlus-C18 chromatographic column （2.1 mm×50 mm， 1.8 μm） was used. The 0.1% formic acid acetonitrile solution-0.1% formic acid （70∶30， V/V） was used. The flow rate was 0.2 mL·min-1. Column temperature was kept at 30 ℃. The detection was performed on a triple quadruple mass spectrometry detector using multiple reaction monitoring （MRM） model for positive ions. Results： The linear range of glycyrrhizic acid oride was 0.313 2～6.264 0 μg·mL-1 （r=0.999 9）， the average recovery was 98.6 % and relative standard deviation was 1.07 %（n=6）. Conclusion： The method is sensitive， specific and accureate and can be used for the determination of glycyrrhizic acid in compound licorice tablets.

Key words：Compound liquorice tablets; UPLC-MS/MS; Glycyrrhizic acid

中图分类号：R927.2

复方甘草片为常用复方制剂，其成分有甘草浸膏粉、阿片粉、樟脑、八角茴香油和苯甲酸钠等，是镇咳祛痰类非处方药品[1]。复方甘草片的主要成分为甘草酸，目前主要采用HPLC-UV测定复方甘草片中甘草酸的含量，而复方制剂成分复杂，其有效成分的测定容易受到干扰，甘草酸峰与其他成分峰难以分离，重复性差，达不到分析要求[2-5]。UPLC-MS/MS具有很好的选择性和灵敏度，特别适用于复杂样品的分析，因此本文建立了UPLC-MS/MS法测定复方甘草片中甘草酸的含量，该方法快速、简单、抗干扰性强，能有效地用于复方甘草片中甘草酸的质量控制。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

（1）仪器。高效液相色谱仪（型号：1290，美国安捷伦公司）;三重串联四级杆质谱仪（型号：G6460，美国安捷伦公司）;S1-T256涡旋混合器;超声波清洗机（型号：CPX5800H-C，美国必能信上海科导仪器有限公司）;万分之一电子天平（型号：XA205DU，上海梅特勒-托利多仪器有限公司）。

（2）试剂。甘草酸对照品（批号：G-004-170414，供实验室药品检验用，成都瑞芬思生物科技有限公司）;3批复方甘草片（批号分别为181219、190202、190303）均为市售品;甲醇、甲酸（色谱纯，Thermo）;超纯水由Milipore制备。

1.2 實验方法

1.2.1 色谱条件

Agilent EclipsePlus-C18色谱柱（2.1 mm×50 mm，1.8 μm）;流动相：0.1甲酸乙腈-0.1%甲酸水（70∶30，V/V），流速为0.2 mL·min-1;柱温：30 ℃;进样量：5 μL。

1.2.2 质谱条件

采用电喷雾负电离源模式（Electronic spray ion，ESI）;扫描方式为多反应监测（Multiple reaction monitoring，MRM）;雾化气压力：30 psi;干燥气温度：300 ℃;干燥气流速：8 L·min-1;毛细管电压：4 000 V;碎裂电压：165 V;定量离子碰撞能：45 eV，定性离子碰撞能：50 eV。

1.2.3 溶液的配制

（1）对照品溶液的制备。精密称取甘草酸对照品15.67 mg于50 mL容量瓶，加甲醇，摇匀，作为对照品储备溶液，精密吸取10 mL储备液，置于100 mL容量瓶中，加甲醇，摇匀，即得每1 mL含有甘草酸31.32 μg的标准溶液，备用。

（2）样品溶液的制备。取批次为190202的复方甘草片20片，称重，研细，称取相当于1片的量置于100 mL量瓶中，加甲醇-水（1∶1）适量，超声提取处理（300 W，250 kHz）30 min，取出，冷却，用甲醇-水（1∶1）稀释至刻度，摇匀，过滤，精密量取滤液1mL置于100mL容量瓶中，用甲醇-水（1∶1）稀释至刻度，摇匀后用0.22μm微孔滤膜过滤，滤液即为供试品溶液，备用。