一种低污染的荷花组培快繁技术研究

钟培星 王亮生 邓必平 宋祥兰 朱江华

摘   要：对一种低污染的荷花组培快繁技术进行了研究，阐述了外植体、萌发、增殖等技术要点，供参考。

关键词：低污染;荷花组培;快繁技术;研究

文章编号： 1005-2690（2019）16-0023-01       中图分类号： S682.2       文獻标志码： B

荷花（Nelumbo nucifera Gaertner）为莲科（Nelumbonaceae）莲属（Nelumbo）的宿根水生花卉，原产于温带和亚洲热带地区，遍及世界各地，其东至日本、朝鲜半岛，西起亚洲西部的里海，南至澳大利亚北部，北迄俄罗斯。主要生长在中国、日本、泰国、印度、斯里兰卡、印度尼西亚、菲律宾一带。中国是荷花的世界分布中心，分布范围也极广，南起北纬 18.2°的海南岛三亚，北至北纬48.2°的黑龙江抚远县，东临东经121.7°的台湾，西达东经85.8°的新疆天山北麓。垂直分布可达秦岭、神农架，在海拔2 780 m的云南宁蒗县水兴镇附近亦有栽培[1-2]。

荷花是中国传统名花和重要的药食同源经济作物。我国荷花品种资源丰富，传统的繁殖及保存方法主要采用分藕、缸栽或池植。目前，在我国荷花仍在采用传统的繁殖方法，即分藕繁殖和大面积缸栽或池栽[3]。荷花品种多是自然杂交种或人工杂交种，其优良性状不能够通过这些繁殖方式很好地传承下去。由于荷花的分藕繁殖系数较低（一般为1∶10），这个问题已成为制约荷花产业发展的主要障碍之一。此外，有些品种因长势较弱，品种保存比较困难，为解决此问题，荷花组织培养是一个很好的突破口。

1   技术

关于莲属植物的离体培养研究，何碧珠、刘玫、毛瑞丽等人各自分别对荷花的茎尖进行了离体组织培养研究[4-6]，但茎尖组织培养污染大，消毒等操作繁杂，郑丽利用胚开展了培养研究[7]。为了充分利用优良品种资源，为商品化生产提供大量的优良种苗，同时又能为珍贵品种的保存开辟新途径，在尝试了多种荷花组培繁育技术后，发现了一种低污染的快繁方法，现将其技术要点概述如下。

1.1   外植体

将青绿子时期（如图1左上所示）的莲子清洗干净后，用75%酒精浸润40 s，无菌水漂洗后放入2%的NaClO溶液中消毒10～15 min，再用无菌水漂洗5～6次，清除残留的NaClO。用无菌滤纸吸干外植体表面的水分，将外壳（外种皮）剥除，并用镊子去除内种皮膜待用。

1.2   萌发

将种子接种于萌发培养基上，萌发培养基组成为MS+6-BA 0.5 mg/L+2，4-D 0.2 mg/L+3%蔗糖+0.65%琼脂。培养温度为25 ℃，光照为16 h/d，光照强度为2 000 lx。6 d左右种子萌动发芽，胚芽增大突破子叶的束缚，之后生长加快，特别是胚轴迅速伸长，然后长出叶柄，顶端卷曲的小叶逐渐伸展开成小钱叶（如图1右上所示）。

1.3   增殖

将萌发培养20 d左右的小苗去除子叶后，转接到增殖培养基上扩大培养，增殖培养基采用固液混合培养基，固体培养基和液体培养基的成分为MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.25 mg/L +3%蔗糖。二者之间不同的是，固体培养基中加入0.65%的琼脂起凝固作用。培养一段时间后，可见其增殖生长出很多小苗（如图1左下所示）。

1.4   生根

将经过增殖培养的丛生苗切分开，保留2～3个蘖为1株，将其接种到生根培养基中诱导根的生长。生根培养基由固液培养基组成，成分为MS+6-BA 0.1 mg/L+NAA 1 mg/L +3%蔗糖。同样，固体培养基中加入0.65%的琼脂。7 d左右小苗陆续长出红色须根（如图1右下所示）。再经10 d以上的培养可形成大量根系，可用于下一步炼苗驯化。

1.5   炼苗

将已生根的植株组培瓶瓶盖去掉，盖上扎有小洞的保鲜膜，先将其在培养室里炼苗3 d，然后去掉封口膜再炼苗2 d。随后取出植株，洗净根上附带的培养基，移植到配制好的基质中，基质配方为糖泥∶草炭∶蛭石=2∶1∶1，先加水搅拌成泥浆状，静置2～3 d后遮阴，套塑料薄膜保持空气湿度85%左右，置于室温 20～25 ℃环境中，炼苗期间经常添水以保持盆内有1 cm左右高的水面，成活后随着苗的长高可增加水位。通过几批炼苗发现，虽然少部分苗的下部老叶有枯萎现象，但成活率可达80%以上。

2   讨论

试验发现，黄子时期的莲子胚还没有发育完好，黑褐子时期果壳（外种皮）太硬不容易剥除，而青绿子时期的莲子种胚发育成熟，容易去除果壳，萌发率高且生长整齐，故选用青绿子时期的莲子作为外植体。由于有外壳的保护，使用NaClO消毒25 min对里面的胚也没有伤害，所以，消毒后的外植体染菌率几乎为零，这是荷花组培选用青绿莲子比荷花茎尖更加方便有利的原因。而且，消毒用的NaClO毒性比HgCl2低很多，因后者属于危险化学品而受管制，在很多正规的实验室已经禁止使用。接种时把内种皮那层膜剥除，可以减轻其对胚芽的束缚，更容易萌发生长。萌发培养和生根培养采用固液培养基，能很好地模拟荷花的水生环境，下层固体培养基除了提供养分外，还起到了固定植株的作用，上层液体培养基模拟水生环境增加培养瓶内的湿度，与纯固体培养基相比，叶柄和叶片更不容易干枯褐化，生长得更好。

参考文献：

[ 1 ] 张行言，王其超.荷花（中国名花丛书）[M].上海：上海科学技术出版社，1998.

[ 2 ] 王其超，张行言.中国荷花品种图志[M].北京：林业出版社，2005.

[ 3 ] 李志炎，林正秋.中国荷文化[M].杭州：浙江人民出版社，1995.

[ 4 ] 何必珠，曾明星，赵时端，等.建莲茎尖离体培养研究初报[J].福建农林大学学报：自然科学版，2002，31（1）：59-61.

[ 5 ] 刘玫，孙崇皮.几种珍贵荷花品种组织培养技术研究[J].浙江农业科学，2002（3）：108-111.

[ 6 ] 毛瑞丽.碗莲茎尖组织培养技术研究[D].郑州：河南农业大学，2008.

[ 7 ] 郑丽.荷花胚培养与切花保鲜技术研究[D].武汉：华中农业大学，2010.

（收稿日期：2019-09-05）