细胞块切片免疫组化染色在胸腔积液病理诊断中的应用价值△

张云霞 吴红芳

(1.河南省南阳医专第一附属医院病理科 南阳 473000；2.河南省南阳医学高等专科学病理教研室 南阳 473000)

胸腔积液作为检验标本，在细胞病理学临床诊断方面能被高效检测出病理相关信息等，同时能鉴别出相关疾病的病变类型和病变程度等评估疾病的重要信息[1]。但是由于浆膜腔原发性间皮瘤细胞与转移性癌细胞的细胞形态极为相似，临床上过去采用的细胞涂片的处理方式结合免疫检查的方法很难将这两类病变细胞准确区别出来。近年研究发现，采用细胞块切片结合免疫组化染色的检查方法，能有效区别不同来源和不同程度病变的病变细胞。为探讨这一新的病理检查方式应用在胸腔积液标本检查的临床效果，本研究收集相应的胸腔积液标本作如下研究。

1 对象与方法

1.1对象

选取在2016年4月～2017年5月我院收治的胸腔积液病例共76例，对每份标本进行两种方式处理：细胞块切片处理和常规细胞涂片处理。研究对象76例中，男37例，女39例，年龄20～74岁，平均年龄(49.4±12.8)岁。在得到患者签署的知情同意书后开始研究。

1.2方法

(1)每个胸腔积液标本分别取10ml,等量分装在4个离心管中，确定离心半径为50cm，以3000r/min的转速离心10min，分离出部分沉渣处理成简单的细胞涂片；用10%福尔马林中性固定液固定试镜纸包裹剩下的离心沉渣，处理成细胞蜡块后制成厚度约3μm的细胞块切片；(2)对所有处理后的标本进行HE染色和免疫组化染色，观察染色结果中标本呈现出的细胞形态、细胞黏附性以及细胞核不典型性，判断细胞病变的良性、恶性和不肯定分类；(3)确定待研究的抗原蛋白为： MOC-31(上皮细胞表面糖蛋白)、BerEP4(肿瘤糖蛋白)、CEA(癌胚抗原)、WT-1(Wilm's 肿瘤基因-1)、CD51(整合素蛋白 αV)、Calretinin(钙结合蛋白)、CK5/6(细胞角蛋白5/6)、Desmin(足细胞结蛋白)、TTF-1(甲状腺转录因子-1)和CK7(细胞角蛋白 7)，并观察这些蛋白的阳性表达情况。

1.3判断

每张切片随机选取5个不重复视野来观察细胞阳性染色情况，将其中阳性细胞构成比≥10%的情况，记为蛋白表达阳性。 观察两种标本处理方法的检出情况及构成比，并对各选定的抗原蛋白阳性表达情况进行比较分析。

1.4统计分析

用SPSS19.0专业统计软件对所有评分结果进行分析，判断两组的病理检测结果是否具有差异及差异的有效性。

2 结果

2.1病理诊断结果对比

常规细胞涂片组和细胞块切片组的阳性检出率[24(31.58%) VS 26(34.21%)]差异明显，其中，常规细胞涂片组的不能确定诊断结果的占比偏高[26(34.21%) VS 0%](χ2=33.66，P<0.05)。

2.2抗原蛋白阳性表达情况对比

原发性间皮瘤WT-1、CK5/6、Desmin、Calretinin阳性表达率较高，而CK7、TTF-1、MOC-31、CEA 、BerEP4、CD51阳性表达率均较低；转移性癌检查中，两组蛋白阳性表达率的规律与前者刚好相反，见表1。

3 讨论

免疫组化染色法是运用已标记的特异性抗体以检测细胞中的未知抗原，且利用酶形成的着色反应来反映其活性、位置以及分布情况[1]。该诊断方法的操作简单，阳性物质定位精确，特异性较强，且细胞块的运用有效解决了常规细菌涂片方法的的单一性问题，可完整保存细胞标本，连续切片性质明显，有助于对细胞标本进行多项检查。细胞块切片处理法结合结合免疫组化法检查诊断胸腔积液标本时，由于处理过程中的石蜡包埋、切片等操作，相对于常规细胞涂片处理操作，提高了病理检查结果的准确度[2]。更重要的是，细胞块制作简单，易于储存，检测过程中可有效避免交叉反应，敏感性与特异性均较高，可在各大基层医院中开展。本研究显示，细胞块切片结合免疫组化法能有效诊断出疾病的表达率：常规细胞涂片组的检出率为65.79%，细胞块切片组检出率为100%；并且在间皮肿瘤标本中，CK7、TTF-1、MOC-31、CEA、CD51、BerEP4蛋白的阳性表达率均较低，而WT-1、CK5/6、Calretinin、Desmin 蛋白的表达率较高，在转移性癌变标本中，目标抗原阳性表达规律相反。细胞块切片处理结合免疫组化法病理检查能有效区分癌变疾病的原发性或转移性来源，具有重要的疾病辅助诊治意义[3]。综上所述，在胸腔积液病理诊断中，细胞块切片结合免疫组化法能准确、高效检测出是否发生癌变疾病及癌变的来源。

表1 两组标本检测的抗原蛋白表达情况对比统计

抗原蛋白良性恶性不确定涂片(26)细胞块(50)转移性癌恶性间皮瘤涂片(18)细胞块(25)涂片(6)细胞块(1)涂片(26)细胞块(0)WT-122503231210Desmin20482151240CK5/621491141150Calretinin25500051250MOC-310217110030CK77114243030TTF-10116240000CD510315230000CEA7318220020BerEP40217230000