不同处理方法对滇重楼种子萌发及成苗的影响

(1.云南省丽江市林业科学研究所，云南 丽江 674100；2.玉龙县宏光生物种植有限公司，云南 玉龙 674119)

滇重楼(Parispolyphyllavar.yunnanensis(Franch.)Hand.-Mazz.)是延龄草科(Trilliaceae)重楼属(Paris)单子叶多年生草本植物[1]。是“云南白药”、“宫血宁”等众多中成药的主要原料，为《中华人民共和国药典》收录[2]。近年来，随着重楼需求量的增加，加上野生资源的枯竭，价格一路飙升，供需矛盾日益突出，众多企业及药农开始大范围的栽培重楼。目前滇重楼的繁殖方法有种子繁殖、切块繁殖等，由于组织培养尚在试验阶段，繁殖方式大都采用种子繁殖。而滇重楼种子具有休眠特性，且包含胚形态休眠和生理休眠2个过程，在自然条件下，需要两冬一夏才能萌发，15个月的出苗率仅为46．2%[3]，众多的种子在休眠期逐渐丧失了活力。而影响滇重楼种子萌发的因素众多，其中陈伟等研究认为，果实成熟时胚发育不完整是滇重楼种子休眠的一个重要因素[4]；王艳芳等研究认为，低温、种皮对萌发也有一定的抑制作用[5]；已有研究证实了滇重楼种胚发育不完全，种子中的内源激素存在萌发抑制物质是种子休眠的主要原因[6]；顾国栋等研究认为，重楼新鲜外种皮中存在抑制种子萌根和萌芽的物质，且对单子叶植物种子萌发的抑制作用极明显[7]。由于种子休眠时间长、萌发缓慢且生长周期长等众多问题，导致滇重楼苗价格居高不下，制约了滇重楼的人工栽培。近年来对滇重楼的种子萌发研究较多，主要有层积处理或变温处理对内源激素的影响及促进种子萌发[8-11]；用GA3、NAA、IAA、PEG等外源试剂处理种子[12-13]；进行种子无菌萌发及组织培养[14-15]等。本试验立足于前人对滇重楼及其他重楼属植物研究的基础上，结合实际育苗经验，探讨如何开展低成本、可操作性强、易推广的促进种子萌发及育苗的方法，旨在通过简单方法提高重楼种子的萌发效率，为今后重楼种子萌发的研究提出一些建议。

1 试验地概况

试验地位于鲁甸乡鲁甸村委会甸东，是著名的“云药之乡”，位于玉龙县西北部，海拔2 732 m，年平均气温11 ℃，霜期180 d左右，年均降雨量900～1 100 mm。农业生产以栽培滇重楼、木香、秦艽、桔梗、附子等中药材为主。

2 材料及方法

2.1 试验材料

试验所用滇重楼种子采自云南省玉龙县鲁甸乡，海拔2 760 m的玉龙县宏光生物种植有限公司基地，成熟的滇重楼种子，经本人鉴定为滇重楼种子。鲁甸是云药之乡，为滇重楼的主产区。去除假种皮后种子平均千粒质量为35.36 g，搓洗假种皮后为白色。

表1 不同处理的种子萌发率和成苗率

表2 不同处理对种子萌发及成苗的影响

注：表中数据为平均值±标准差；同一列中不同小写字母表示差异显著(p<0.05)，不同大写字母表示差异极显著(p<0.01)。

2.2 试验方法

将采集的新鲜种子，搓洗掉假种皮(对照的除外)，共设6个处理，1个对照，3个重复，每个重复1 000粒。分别为处理A:去除假种皮的新鲜种子直接沙藏；处理B：置于温度0 ℃的冷库中，30 d后取出沙藏；处理C：置于温度0 ℃的冷库中，30 d后取出，用100 mg·L-1GA3溶液浸泡24 h后捞出进行沙藏；处理D：处理方法同C，但GA3溶液的浓度为300 mg·L-1；处理E:处理方法同C，但GA3溶液的浓度为500 mg·L-1；处理F：处理方法同C，但GA3溶液的浓度为700 mg·L-1；ck：不做任何处理，种子成熟后直接带假种皮沙藏。种子沙藏用湿砂层积法，用金沙江沿岸的细沙作为沙藏基质，容器用透气性好的烧制花盆，砂和种子按3∶1的比例进行沙藏，水分保持在40%左右，即手拧能成团，松开即散。顶部用塑料膜覆盖，以利于保温及防止雨水滴入，每隔30 d翻动查看1次，观察种子萌发及发芽情况，如水分过干，则适量喷水，选择在阴凉处常温沙藏。

3 结果与分析

沙藏30 d后开始翻动，观察种子萌发情况，从90 d开始，逐渐有部分种子萌发，挑出萌发种子并统计萌发率，未萌发种子继续沙藏，而已萌发的种子分别在苗床上进行播种,210 d后，无论种子萌发与否均统一分床播种，最后570 d后(即种子采收后第3年5月底)统计出苗率。统计出层积90，120，150，180，210 d不同处理的种子萌发率和570 d后的出苗率(见表1)，并绘制“不同处理在不同时间段的萌发率”(见图1)。并对不同处理210 d时的萌发率及570 d时的成苗率用SPSS 20软件进行方差分析(分析-比较均值-单因素ANOVA),并用Levene检验方差齐性，并用LSD比较，结果见表2。

图3 不同处理对种子萌发率及成苗率的影响

3.1 不同时间段不同处理的萌发率

通过统计不同时间段重楼种子的萌发率可知：不同处理各个时间段的萌发率各不相同(图1)。90 d时，除处理E的萌发率(6.17%)稍高以外，其余均相差不大；到120 d时，萌发率最高的是处理F(15.6%)，其次是处理E(8.87%)，其余相差不大；到150 d时，萌发率最高为处理E(33.37%)，其次为处理F(22.03%)、D(19.23%)、C(18.63%)，其余均在较低水平；180 d时，萌发率最高的为处理D(25.63%)，其次为处理C(22.5%)，B(12.1%)、ck(11%)、A(10.8%)处于中间水平，最低是处理E(7.77%)、F(2.43%)；到210 d时，依次为处理A(24.03%)、ck(23.87%)、B(23.37%)、C(16.33%)、D(14.47%)、E(4.37%)、F(3.57%)。

图1 不同时间段不同处理的萌发率

3.2 不同处理在不同时间段的萌发率

由图2可看出，不同处理在各时间段的萌发情况，处理A、B、ck主要在210 d时集中萌发；处理C、D主要在150～210 d这个时间段萌发；处理E在150 d时集中萌发；处理F在120～150 d时间段萌发。

3.3 不同处理对种子萌发率的影响

方差分析结果表明，萌发率及成苗率值分别为0.137、0.396(p>0.05)，说明方差是齐性的，可以进行方差分析，检验统计量萌发率和成苗率F值为23.617、53.255，显著性0.000<0.001，有统计学意义，认为不同处理对重楼种子萌发率及成苗率的影响是显著的，进一步进行LSD比较。结果为处理A与B、F、ck萌发率差异不显著，与处理C、D、E差异极显著；处理B与C、D、E差异极显著，与F、ck差异不显著；处理C与F、ck差异极显著，与处理D、E差异显著；处理D与E、F、ck差异显著；处理E与F、ck差异极显著；处理F与ck差异不显著。其中萌发率最高的是处理D，相对萌发率是142%，其次是处理C(137%)、E(126%)，ck(118%)、B(110%)、A(106%)、F(100%)。

图2 不同处理在不同时间段的萌发率

3.4 不同处理对种子成苗率的影响

通过分析可知，处理A成苗率与处理C、D、F差异极显著，与处理B、E、ck差异不显著；处理B与C、D、E、F差异极显著，与ck差异不显著；处理C与处理E、F、ck差异极显著，与处理D差异显著，与处理D差异不显著；处理D与处理E、F、ck差异不显著；处理E与ck差异显著，与处理F差异不显著；处理F与ck差异极显著。成苗率最高的是处理D，相对成苗率为158%，其次依次为处理C(149%)、B(122%)、A(120%)、ck、E(109%)、F(100%)。

4 结 论

通过不同处理方法对重楼种子的萌发时间、萌发率及成苗率的对比试验，研究发现，处理A和ck对萌发时间影响不大，说明假种皮对种子的萌发时间影响不大，处理B萌发时间较A、ck稍提前，说明低温冷藏对促进种子提早萌发有一定的作用，处理A、B、C、D随着GA3溶液处理浓度的增加，萌发时间先提前，后抑制的作用，特别是处理E即在GA3溶液的浓度为500 mg·L-1时萌发时间最佳，说明一定浓度的GA3能够促进滇重楼种子的提前萌发，但浓度过高则会抑制种子的提早萌发；处理A与B、ck的萌发率、成苗率差异不显著，说明假种皮及低温对滇重楼种子的整体萌发率影响不大，处理B到处理F滇重楼种子的萌发率及成苗率呈先升后降的抛物线分布，说明一定浓度的GA3能提高滇重楼种子的萌发率及成苗率，当GA3浓度达到300 mg·L-1时萌发率(相对萌发率为142%)及成苗率(相对成苗率为158%)达到峰值，但当GA3浓度达到700 mg·L-1时，萌发率及成苗率达到谷底，说明过高浓度GA3会降低滇重楼种子的萌发率，影响成苗率。

5 讨 论

本试验中，滇重楼种子的假种皮与其萌发时间、萌发率、成苗率无明显影响；低温冷藏能促进种子的提前萌发；不同浓度的GA3处理对种子的萌发时间有先提前后抑制的作用，当GA3浓度为500 mg·L-1时萌发时间提前最为明显；不同浓度的GA3处理同样对种子的萌发率及成苗率有先升后降的作用，当GA3浓度为300 mg·L-1时萌发率及成苗率最高，相对萌发率及相对成苗率达142%及158%，当GA3浓度达700 mg·L-1时，萌发率及成苗率最低，甚至低于处理A、B、ck，说明过高浓度的GA3溶液对种子起了毒害作用。