贵州某大型三甲医院丙型肝炎患者病毒基因分型的临床研究

熊庭婷 罗新华 邵和军

(贵州省人民医院感染科，贵州 贵阳 550002)

丙型肝炎病毒(HCV)感染后慢性化率为55%～85%，慢性丙型肝炎是肝硬化、肝癌的常见病因之一，每年因HCV感染导致的死亡病例约35万。HCV 基因易变异，目前可至少分为6个基因型及多个亚型[1]。既往的研究证实，HCV不同基因型的流行率与感染途径密切相关，HCV基因型为干扰素的治疗应答的独立预测因素，而近年来直接抗病毒药物(DAA)也被证实其抗丙肝病毒疗效也具有一定程度的基因型特异性[2]。因此了解HCV基因亚型的地区分布特点对疾病的防治具有重要的临床意义。我们对近年来于贵州省人民医院就诊的丙肝患者感染的HCV 进行了基因分型和比较分析，现报告如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 收集2015年11月至2018年6月期间，于贵州省人民医院感染性疾病科门诊或病房住院确诊为慢性丙型肝炎的患者，共有359例。其中，男187例，女172例，平均年龄(42.05±11.32)岁。诊断标准符合中华医学会肝病学分会和感染病学分会《丙型肝炎防治指南(2015年更新版)》。

1.2方法 患者血样采用德国Qiagen公司提供的核酸(RNA)提取试剂盒(QIAamp Viral RNA Mini Kit)提取纯化的HCV RNA，再使用定量PCR法，采用泰普生物科学(中国)有限公司提供的丙型肝炎病毒基因分型检测试剂盒(PCR-荧光探针法)进行检测。将病例血清与裂解液预混，震荡并孵育。加入异丙醇后，转移至 DNA/RNA Column中。洗涤两次后洗脱，制成RNA提取产物。分别取各亚型HCV RT-PCR反应液和酶系，混匀，各管分别按40 μL /管分装到PCR反应管中。再往各亚型HCV RT-PCR反应液中分别加入25 μL矿物油、HCV RNA的提取产物10 μL。混匀，放入荧光PCR仪，按试剂盒提供的程序条件进行扩增。对照试剂盒说明书进行结果判读。

1.3统计学方法 采用SSPS 22.0软件进行数据分析，计数资料组间比较采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1HCV基因型结果检测 结果显示，共发现7种HCV基因亚型，其中1a型2例(0.56%)，1b型139例(38.72%)，2a型17例(4.74%)，3a型60例(16.71%)，3b型69例(19.22%)，6a型66例(18.38%)，6n型1例(1.67%)。

2.2不同性别组患者HCV基因型的分布 359例患者基因型在男女性患者中的分布见表1，男性和女性患者HCV基因型分布比较，差异无统计学意义(χ2=4.906，P=0.556)。

表1 不同性别组患者HCV基因型的分布[n(%)]

2.3不同年龄组患者HCV基因型的分布 HCV基因型在不同年龄段患者中的分布见表2，不同年龄段患者中HCV各基因型分布比较，差异有统计学意义(χ2=13.590，P=0.126<0.05)。在20岁以下年龄组中，仅检出2名1b型感染者，20～39岁年龄组中，HCV感染主要型别为依次1b(27.3%)、3b(26.7%)、6a(23.3%)、3a(18.7%)型，随年龄段的增长，1b型感染者比例逐渐升高，而3a、3b、6a型感染者比例逐渐下降。

表2 不同年龄组患者中HCV基因型的分布[n(%)]

3 讨 论

HCV基因型分布模式与患者感染途径及地理区域相关[3]，近年来的研究显示，随着时间推移，各地区HCV基因型分布模式也有所变化。统计研究提示中国大陆地区在大约2000年前后出现较明显的HCV基因分布型的改变，中国大陆地区HCV基因型既往以1型、2型病毒株分布为主，鲜有3型及6型病毒株出现，而在大约2000年之后出现2型病毒株流行率逐渐下降，同时3型及6型病毒株流行率逐渐升高。

本研究结果显示，贵州部分地区2015～2018年359例HCV患者基因型分布情况为：1a型0.56%，1b型38.72%，2a型4.74%，3a型16.71%，3b型19.22%，6a型18.38%，6n型1.67%，与杨兴林等[4]报道的贵州地区2011年～2013年198例HCV患者基因型分布数据情况类似(1a型4%，1b型35.9%，2a型4.6%，3a型14.7%，3b型23.7%，6a型18.7%，6 d型0.5%)，提示近年来HCV 1b、3a、3b和6a型仍然是贵州地区HCV感染的主要基因型，4种基因型占HCV总感染人群的93%。但相比丁静娟等报道的[5]贵州地区1996～1998年98例HCV患者基因型分布(1型74.5%，3a型1%，3b型4.1%，6a型10.2%)已有较大的变化，基因1型感染率明显下降，基因3型和6型感染率大幅升高。

HCV基因型的分布在我国具有区域差异，东北地区、北方地区、中原地区以1型及2型分布为主，而南方边境省份，近年以3、6型分布较为突出[6-7]。本次研究提示，近年贵州地区丙肝基因型分布中主要类型1b型(38.7%)，尤其在40岁以上HCV患者中1b型为主要感染基因型，3型和6型的感染率仅次于1b型(分别为35.9%、20.1 %)。我国自1993年开始对献血者进行HCV-Ab严格筛查，使得通过血液途径传播HCV的可能性大大减少，或许可以解释1b型在本研究中40岁以下年轻患者中比例明显降低的原因。国内研究提示接壤东南亚地区的云南地区HCV感染者中基因3型和6型病毒株分布较为突出，并随静脉吸毒人群在周边地区传播[7]，而文献[4]中提示贵州地区通过吸毒途径感染HCV患者中基因3型和6型病毒株分布也比较突出，本次研究提示贵州地区21～39岁HCV患者中的主要感染型为3型及6型，这种表现可能与年轻患者中静脉吸毒人群比例增多相关，有待进一步流行病学调查。

HCV基因分型对于丙型肝炎疾病转归和疗效预测均具有重要意义，本研究提示目前贵州地区至少存在7种基因亚型丙肝病毒感染，包括1a型、1b型、2a型、3a型、3b型、6a型、6n型，其中6n型为贵州地区首次报道，提示贵州地区HCV感染毒株存在多样性，但由于样本来源的地域性差异及检测方法的局限性，尚不能排除贵州地区还存在其他基因型及混合基因型感染的可能，有待进一步扩大样本来源进行研究。