不同炮制方法对中药黄芪中糖类和氨基酸类成分含量的影响

江国荣 禤雪梅 刘肖林 蒙凤贞 广东省佛山市第一人民医院(中山大学附属佛山医院)药剂科 528000

《中国药典》收载的是豆科植物蒙古黄芪Astragalus membranaceus(Fisch)Bge.var.mogholicus(Bge)Hsiao或者膜荚黄芪Astragalus membranaceus(Fisch)Bge.的干燥根[1]。中药黄芪性微温，味甘，具有补气升阳、固表止汗、利水消肿、生津养血、敛疮生肌的作用，是临床上的常用药材，其中黄酮类、糖类、皂苷类以及氨基酸类是药材中的有效成分，可以发挥多种药效。中药黄芪的炮制在宋代就已经出现，到了明代炮制方法多样化[2]，炮制的目的在于提高药材的药效、降低毒性以对临床用药的安全有效性提供保障，炮制方法的不同对效成分含量的影响差异性大[3-4]。本文通过酒制、炒制、盐制三种炮制方式，分析与生品比较中药黄芪中糖类和氨基酸成分的变化情况。

1 仪器与试药

1.1 试验仪器 美国Wasters公司生产的PiCo-Tag氨基酸分析系统(含有PiCo-Tag氨基酸分析柱)，美国梅特勒公司生产的电子分析天平(精密度0.001g)，紫外分光光度仪器(上海天呈医流科技股份有限公司，型号：721-110)。

1.2 试验药材 中药黄芪为本市中药材公司购买并经专业人员鉴定为黄芪真品，甲醇、乙腈均为色谱纯，水为三蒸水，醋酸、醋酸钠、浓硫酸为分析纯，葡萄糖对照品(生产批号为20141212)，5%苯酚试剂(生产批号：201410710)。

2 方法与结果

2.1 炮制方法

2.1.1 酒黄芪：称取中药黄芪300g加入60ml的米酒进行搅拌，使得米酒与药材浸润充分后，静置60min后炒干，备用。

2.1.2 炒黄芪：取同一批次的黄芪药材300g，精密称定后文火直接将黄芪药材进行翻炒，至颜色为棕黄色后停止，取出晾干后备用[5-6]。

2.1.3 盐黄芪：称取同一批次黄芪药材300g，加入6g盐水进行搅拌，直至盐水充分进入药材，文火进行微炒，值颜色变为棕黄色后取出，晾干，备用。

2.1.4 生黄芪：取同一批次黄芪药材300g净制后，用温水(30～40℃)浸泡6min后取出，温麻布覆盖在药材上润透软化2h后，切制成椭圆形片，置于60℃恒温干燥箱中干燥，取出晾干后备用。

2.2 样品溶液制备方法

2.2.1 糖类成分的提取：(1)水溶性糖类提取:称取100g生黄芪和100g黄芪炮制品制成粗粉置于具有塞子的三角瓶中，加入30ml的85%乙醇溶液混合后55℃恒温水浴锅上加热60min，过滤后滤液加热。吸取2.0ml溶液于25ml容量中，加水至刻度，摇匀后备用。(2)多糖提取:采用水回流提取方法，将中药黄芪不同炮制品制成粗粉，精密称定，10倍量的水第1次回流60min，离心过滤药液，回收药渣再次采用8倍水回流45min，将2次滤液合并后浓缩，醇沉后除去杂质。

2.2.2 氨基酸成分的提取：将各炮制品样品粉碎，过60目筛，干燥至恒重，称取10mg后精密称定，分别放置于安瓿底部，加入6.0mol/L盐酸溶液1ml，后进行充氮反应，在喷灯火焰上进行封口，置于110℃烘箱中进行水解，24h后取出放冷至室温，将溶液取出后水洗进行定容至10ml容量瓶中，摇匀静置后滤过，备用。

2.3 氨基酸含量测定

2.3.1 氨基酸色谱条件：采用PiCo-Tag氨基酸分析柱，流动相醋酸—醋酸钠缓冲溶液(pH 6.4)∶乙腈=60∶40，检测波长为254nm，柱温38℃，进样量为5.0μl。

2.3.2 线性关系：取2.2.2项下溶液稀释成6.25、12.5、25.0、50.0nmol/ml，按照2.3.1项下色谱条件，柱前衍生法5.0μl进样检测，以横坐标氨基酸峰面积，纵坐标氨基酸浓度来进行线性回归，结果表明氨基酸在一定的检测浓度范围内与峰面积积分值有好的线性关系。

2.3.3 精密度试验：混合溶液按照2.3.1项下的色谱条件，柱前衍生法进样5次，记录各种氨基酸峰面积和保留时间，其RSD值分别在0.25%～1.35%和0.45%～2.12%，表明精密度较好。

2.3.4 重复性试验：吸取制备的氨基酸溶液平行制备5份样品溶液，按照2.3.1项下的色谱条件，柱前衍生法进样5.0μl。记录各种氨基酸峰面积和保留时间，其RSD值分别为0.14%～2.00%和0.40%～2.23%，表明重复性较好。

2.3.5 稳定性试验：吸取各个炮制品溶液在1、2、4、6、8h按照2.3.1项下色谱条件进样，记录各种氨基酸的峰面积，计算峰面积的RSD值在0.41%～2.13%，表明炮制品溶液中氨基酸在8h内含量较为稳定。

2.3.6 样品含量测定：对2.2.2项下的溶液按照2.3.1的色谱条件进行测定，以柱前衍生法进行测定，不同炮制品中氨基酸的含量结果见表1。

表1 黄芪不同炮制品中氨基酸含量(%)

注：*表示必需氨基酸，“-”表示未检测出。

2.4 糖类成分含量测定

2.4.1 糖类成分测定条件[7]： 硫酸—苯酚法测定糖类成分的含量，检测波长为492nm。分别吸取上述2.2.1项下的水溶性糖和多糖0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6、1.8、2.0ml，分别加入质量分数为5%苯酚溶液1.0ml后，加入5.0ml的浓硫酸溶液，振摇5min后置于沸水浴中加热20min，取出置于冷水浴中进行冷却，紫外分光光度仪器中在490nm处进行吸光度值的测定，以三蒸水作为空白项。以含量为横坐标，吸光度值为纵坐标，水溶性糖回归方程：A=48.010C-0.421(r=0.999 7)，多糖回归方程：A=35.497C-1.124(r=0.999 8)。

2.4.2 稳定性试验：样品溶液在显色后分别于0.5、1.0、2.0、3.0h放置后测定起吸收值，结果显示在2.0h后样品溶液的吸光度值无明显的变化。

2.4.3 精密度试验：精密吸取2.2.1项下的溶液，按照标准曲线制备的方法进行操作，连续重复5次测定，测得的水溶性糖和多糖的RSD值分别为1.23%、1.38%，表明测定方法的精密度较高。

2.4.4 回收率试验：取已测定含量的样品溶液5份，每份各精密加入对照溶液，按照样品溶液的制备项下进行处理并进行含量测定，测得的平均回收率水溶性糖为99.89%，多糖为100.23%，RSD值分别为1.24%、1.12%。

2.4.5 样品含量测定：将已经制备的样品溶液按照标准曲线项下的测定方法进行测定，根据标准曲线测定水溶性糖和多糖的含量，结果见表2。

表2 黄芪不同炮制品中糖类成分的含量测定(mg/g)

3 讨论

中药黄芪为临床上重要的补气药材，主要用于气虚乏力、食少便溏、中气下陷、久泻脱肛以及慢性肾炎蛋白尿、血虚萎黄等证[8]。祖国传统的炮制理论认为，生黄芪主要偏于对固表止汗有效果，炒黄芪则多用于益气健脾、气虚乏力、食少便溏之证。中药材的化学成分比较复杂，中药材在使用过程中也应根据患者不同的疾病病情，采取针对性的治疗措施，不同的炮制方法在同一种药材中所制成的炮制品，其效用同样也会存在一定的差异性[9]。在本次实验研究中，对于不同的炮制品黄芪，糖类成分以及氨基酸成分的含量不同，这可能是不同的炮制品药效发挥不同的治疗效果的主要原因[10]。中药黄芪经不同炮制后总氨基酸的含量生黄芪的含量最高，其次为炒黄芪、酒黄芪，盐黄芪中的总氨基酸的含量最低。各个不同的炮制品均含有的氨基酸数量超过14种，其中7种人体必需氨基酸各个炮制品中均有。必需氨基酸中生黄芪制品含量最高，炒黄芪中含量最低。各个炮制品中所含有的氨基酸则主要是以天冬氨酸、谷氨酸以及脯氨酸为主。本实验结果也同时显示，不同炮制方法对黄芪糖类成分影响较大，水溶性糖的含量在生黄芪中最高，炒黄芪中含量最低，多糖成分在酒黄芪中最高，生黄芪中含量则最低。

总之，中药黄芪中有效成分变化直接造成了黄芪不同的临床功效，炮制可以显著改变中药黄芪的化学成分含量，影响中药黄芪的药效。因此，应该根据临床上治疗的需要，科学地选择不同的黄芪炮制方法以达到有效的治疗目的。