枸橼酸坦度螺酮对高血压大鼠BP、ET-1、NO水平及昼夜节律的影响

近年来人们生活节奏不断加快，精神压力越来越大，而精神压力引起血压、心率、心排血量、脏器血流量等循环要素发生变化，对高血压发病、经过、预后产生极大影响。因此，对高血压病人进行精神护理的重要性日益升高，如何合理使用抗焦虑抑郁药，对高血压治疗非常重要。坦度螺酮是在抗焦虑作用基础上兼具抗抑郁作用的5羟色胺激动剂，属于高血压的治疗药物。血管内皮系统在调节血压与维持血压昼夜节律方面具有重要作用，其中一氧化氮(NO)和内皮素1(ET-1)是具有代表性的一对血管活性物质[1-2]。高血压病可损伤机体内皮细胞，导致NO、ET-1合成释放失衡[3]。本研究探讨枸橼酸坦度螺酮不同昼夜时间给药对高血压大鼠血压(BP)、血浆NO和ET-1的影响。

1 材料与方法

1.1 实验仪器 戴尔实验用计算机，MS2000生物信号记录分析系统(广东龙飞达技术有限公司)、721分光光度计。

1.2 实验试剂 枸橼酸坦度螺酮片(大日本住友制药株式会社茨木工厂生产，生产批号021116)，硝基-L-精氨酸甲酯(NG -nitro-L-arginine-methlester，L-NAME，美国Sigma公司生产)，ET-1和NO试剂盒(北京东亚生物技术研究所)。

1.3 实验动物 同龄健康雄性SPF级大鼠90只，体重150～175 g(北京实验动物中心提供)。

1.4 实验方法 大鼠在实验动物房后明/暗各12 h下适应2周，将L-NAME溶于水中灌胃，每次10 mL，连续灌胃5周后，参照Sigmon方法[4]复制高血压模型，将大鼠分为高血压对照组和坦度螺酮组，各45只。将各组大鼠按照随机分配原则，分为峰值前给药组(血压峰值前2 h给药)、中值前给药组(血压中值前2 h给药)、谷值前给药组(血压谷值前2 h给药)，每组15只。高血压对照组大鼠给予饮用水灌胃，坦度螺酮组大鼠给予枸橼酸坦度螺酮(研末后溶于饮用水)灌胃给药，连续饲养4周。

1.5 观察指标

1.5.1 血压测定 给药前和给药后分别测定各组大鼠尾动脉血压，采用尾动脉介入法：2.4%水合氯醛(240 mg/kg)麻醉，大鼠背部向上固定，消毒尾部，直至尾动脉显现后，将仪器穿刺针缓慢插入尾动脉，将有肝素生理盐水的导管经传感器并与计算机连接，造模成功后将大鼠固定于特质笼子，进食和饮水正常进行，大鼠清醒后MS2000多媒体生物信号记录分析仪器连续监测24 h，采用自身对照法观察血压变化。

1.5.2 血浆ET和NO检测 血压测定完成后，10%水

合氯醛(0.33 mL/100 g)腹腔麻醉，开胸暴露心脏，取心室内血液，测定ET-1、NO。取血时间08：00～09:00，1.0 mL血液中加入7.5%乙二胺四乙酸(EDTA)二钠15 μL和抑肽酶20 μL[5]，以3 000 r/min离心3 min，分离血浆，置于-20 ℃冰箱保存，严格按照试剂盒检测ET-1和NO。

2 结 果

2.1 正常大鼠尾动脉压昼夜节律 采用MS2000多媒体生物信号记录分析仪器连续监测24 h后，应用余弦软件分析血压数据，得出正常大鼠血压昼夜节律图，其中中值(均值)M=89.324±2.570，振幅A=5.8±1.4，峰值位相Ф=5.204±0.334。

2.2 两组大鼠不同时间血压比较 治疗后，坦度螺酮组3个时间血压均降低，以峰值前血压降低最明显，与高血压对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。详见表1。

组别只数 峰值前2 h 给药前给药后 中值前2 h 给药前给药后 谷值前2 h 给药前给药后高血压对照组15132.4±6.1132.3±6.2133.4±6.3133.3±6.2131.2±6.0131.1±6.1坦度螺酮组15133.0±6.2112.4±4.3132.6±6.2122.0±3.4132.0±6.1122.4±3.9t值-0.6233.2010.5272.417-0.4272.214P>0.05<0.05>0.05<0.05>0.05<0.05

注：1 mmHg=0.133 kPa

2.3 两组大鼠不同时间血浆NO和ET水平比较 坦度螺酮组大鼠血浆ET-1水平低于高血压对照组，NO水平升高，差异均有统计学意义(P<0.05)。详见表2。

组别只数NO(μmol/L)ET-1(pg/mL)高血压对照组4525.3±1.7179.8±8.9坦度螺酮组4536.1±2.8160.3±9.01)t值-3.0212.174P<0.05<0.05

2.4 坦度螺酮组不同时间血浆NO和ET-1水平比较 不同时间给药后，血浆NO水平均高于高血压模型期(P<0.05)，峰值前2 h给药后NO水平升高最明显(P<0.05)；不同时间给药后，血浆ET-1水平低于高血压模型期，峰值前2 h和中值前2 h给药后ET-1显著降低(P<0.05)。详见表3。

时间NO(μmol/L)ET-1(pg/mL)高血压模型期25.1±1.3179.8±8.7峰值前2 h39.6±0.71)2)163.1±10.21)2)中值前2 h34.7±0.81)161.0±7.91)2)谷值前2 h34.3±0.71)166.2±10.31)

与高血压模型期比较，1)P<0.05；与谷值前2 h比较；2)P<0.05

3 讨 论

人体各个系统生理活动均具有明显的节律现象，依照节律周期分为3种类型：①节律周期接近24 h为近日节律；②节律周期明显小于24 h为超日节律；③节律周期长于24 h属于亚日节律。人体常见的生理活动为近日节律，心血管系统多数生理与病理现象均属此类[6]。心脑血管疾病的发生具有明显昼夜节律，心肌梗死、心脏猝死、室性心律失常及脑卒中等均于早晨高发而夜间发病率最低。相关研究发现，NO、ET-1等水平或活性均呈现典型的昼夜节律。人体血压的昼

夜节律性较大程度取决于NO、ET-1时间生物学特征。有研究表明，血压昼夜节律紊乱是导致靶器官损害的重要因素，非杓型高血压病人靶器官损害程度严重，主要由于机体心肌肥厚，脑血管硬化严重。血压昼夜节律消失是独立于血压之外的心脑血管病预测因素[7]。高血压的临床治疗中，如何恢复或维持血压的正常昼夜节律，是目前临床研究的热点。

本研究以高血压大鼠作为实验对象，长期应用NO合成酶抑制剂L-NAME复制典型高血压大鼠模型，并对每只大鼠进行尾动脉置管，并进行24 h动态血压监测，余弦软件分析血压节律情况，从而标记高血压模型大鼠高血压期血压峰值、中值及谷值时间，以确定实验给药时间[8]。给药枸橼酸坦度螺酮2 h后，坦度螺酮血浆浓度达到峰值，因此，分组时以坦度螺酮药效最佳时间前2 h灌胃给药，使血药浓度峰值分别处于以上3个时间。本研究结果表明，大鼠经枸橼酸坦度螺酮灌胃后4周，与高血压对照组大鼠比较，血压均明显降低，表明枸橼酸坦度螺酮可拮抗由L-NAME引起的高血压；以峰值前2 h给药后大鼠血压下降最明显，结果显示最大血药浓度出现在血压处于峰值时，给予枸橼酸坦度螺酮治疗降压效果显著。

NO为近年来发现的一种新型信息传递体，作为机体主要的一类舒血管活性物质，通过激活水溶性鸟苷酸环化酶，升高平滑肌环磷酸鸟苷(cGMP)浓度，达到舒张血管目的[9]。ET-1是体内已知的最强缩血管物质，主要由日本学者Yanagisawade等于1988年经猪主动脉内皮细胞分离出的一种多肽[1]。本研究采用枸橼酸坦度螺酮不同时间给药后，坦度螺酮组与高血压对照组比较，血浆NO水平升高，以峰值前给药升高程度最明显，这主要与峰值前给予坦度螺酮后血压降低最明显，峰值前和中值前给药后血浆ET-1低于高血压对照组。结果表明，降压过程中NO可能起着重要作用，但具体作用机制需进一步验证。

高血压疾病的治疗，不仅需考虑药物的代谢动力学，同时治疗过程需根据病人血压情况选择合理时间给药，从而为高血压治疗提供新方向[10]。选择高血压药物或其他药物治疗时，根据病人血压节律情况结合治疗药物的药理性质，选择合适的给药时间，反复研究进而找到稳定的降压时间，最大程度降低病人血压。本研究结果证明，枸橼酸坦度螺酮对高血压大鼠具有降压作用，并可改善其内皮功能。