不同规格等级天麻的主要成分测定及相关性分析

郑治洪　邵先强　邱志龙　黎启高　刘鹏

摘要 [目的]測定贵州德江不同等级天麻的主要成分，并进行相关性分析。[方法]采取硫酸-苯酚法、高效液相色谱法分别对天麻中的主要成分多糖、天麻素和对羟基苯甲醇等进行测定分析。[结果]不同等级天麻多糖含量差异显著，但是与规格等级没有相关性;天麻素和对羟基苯甲醇含量与天麻规格等级之间不具有相关性，不同规格等级之间天麻素和对羟基苯甲醇含量差异显著。[结论]该研究为天麻分级和产品开发研究提供理论指导依据。

关键词 天麻;规格等级;成分测定;相关性分析;质量评价

中图分类号 R284文献标识码 A

文章编号 0517-6611（2019）16-0223-02

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2019.16.063

开放科学（资源服务）标识码（OSID）：

Determination of Main Components and Correlation Analysis of Gastrodia aleta in Different Specification Levels

ZHENG Zhi hong1，SHAO Xian qiang2，QIU Zhi long2 et al （1.Institute of Crop Germplasm Resources， Guizhou Academy of Agricultural Sciences， Guiyang，Guizhou 550006;2.Dejiang County Chinese Herbal Medicine Industry Development Office， Dejiang， Guizhou 565200）

Abstract [Objective] The main components of different grades of Gastrodia aleta in Guizhou Dejiang were determined and analyzed for correlation.[Method] The main components of Gastrodia aleta polysaccharide， gastrodin and p hydroxybenzyl alcohol were measured and analyzed by sulfuric acid phenol method and high performance liquid chromatography.[Result]There were significant differences in the content of different levels of Gastrodia aleta polysaccharide， but there is no correlation with the specification level;there was no correlation between the total content of gastrodin and p hydroxybenzyl alcohol and the level of Gastrodia aleta， and the total content of gastrodin and p hydroxybenzyl alcohol was significantly different between different grades.[Conclusion]This study provides theoretical guidance for the research of classification and product development of Gastrodia aleta.

Key words Gastrodia alela;Specification grade;Composition determination;Correlation analysis;Quality evaluation

天麻为兰科植物天麻（Gastrodia aleta BI.）的干燥块茎，名贵的中药材之一[1]。天麻味甘，性平，归肝经，具有息风止痉、平抑肝阳、祛风通络之功效[2]。天麻分布广泛，全国大部分地区都有种植，大多是人工栽培，少数仿野生栽培。其中，云、贵、川等地种植历史悠久，是天麻的地道产区，其非地道产区有湖南、安徽、西藏等地[3]。但各产区对天麻等级划分有所不同，直至1984年国药联材字第72号文规定了标准，至此我国才有了中药材产业市场流通的法律依据[4]。该标准将天麻分成4个等级，一直沿用至今。然而，该标准对天麻的划分过于简单，没有考虑到栽培与野生间的差异，不同产区或产地间的差异以及冬天麻与春天麻间的差异，以致于市场上出现不同的划分标准，导致天麻产业发展混乱[5]。笔者通过测定天麻多糖、天麻素、对羟基苯甲醇等主要成分[6]及其相关性分析，为天麻分级提供科学依据。

1材料与方法

1.1 试验材料

供试材料均为贵州德江天麻，经鉴定为兰科植物天麻（Gastrodia aleta BI.）的干燥块茎，共分4个等级（一等麻平均长度11.7 cm，平均宽度4.1 cm ;二等麻平均长度 8.6 cm，平均宽度2.7 cm;三等麻平均长度7.1 cm，平均宽度1.7 cm;四等麻平均长度5.1 cm，平均宽度1.1 cm）。葡糖糖标准品、乙腈（高效液相色谱），天津市科密欧化学试剂有限公司;无水乙醇、乙醇（95%）、磷酸，天津市富宇精细化工有限公司;苯酚，天津市永大化学试剂有限公司;浓硫酸，重庆川东化工（集团）有限公司;超纯水;磷（P）、钾（K）、钙（Ca）、镁（Mg）、钠（Na）、铁（Fe）、锌（Zn）、硼（B）、锰（Mn）、钼（Mo）、铜（Cu）元素标准溶液等。

1.2 试验仪器

SG8200HDT型超声波清洗器，上海冠特超声仪器有限公司;万分之一电子天平，型号JF1204，余姚市金诺天平仪器有限公司;酶标仪，上海赛默生物科技发展有限公司;TD5-II低速离心机，长沙平凡仪器仪表有限公司;电子恒温水浴锅，型号HH-S8型，北京科伟永兴仪器有限公司;Agilent Technologies 1206高效液相色谱仪;Optima 8100 电感耦合等离子体发射光谱仪，Perkin Elmer公司;Kjeltec 8400凯氏定氮仪，FOSS公司。

1.3 试验方法

1.3.1 天麻多糖含量测定。

1.3.1.1 葡萄糖对照品溶液的制备。

精确定量称取10 mg 的葡萄糖于 100mL 容量瓶中，配成0.1 mg/mL的溶液。分别取 0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL 葡萄糖母液，加蒸馏水到  1.0mL，移液枪分别加入 5%的苯酚溶液 1.0mL，摇匀，然后加入4.5mL浓硫酸，充分摇匀，静置10 min后在 490 nm 下测定吸光度。以葡萄糖浓度为横坐标、测量的吸光度（A）为纵坐标，绘制葡萄糖标准曲线。

1.3.1.2 苯酚溶液的配制。

精密称5.000 0 g 苯酚，烧杯溶解，全部转移至 100mL 的棕色容量瓶中并定容，避光保存， 备用。

1.3.1.3 样品溶液的制备。

采用水提醇沉法提取多糖[7]。精密称取天麻干粉0.300 0 g，按1∶25（g∶mL）料液比加入蒸馏水，超声波提取35 min，溫度50 ℃，提取液及残渣全部转移至 100 mL 容量瓶中定容，取25 mL定容后的提取液于离心管中，经离心（3 000r/min，20 min）去沉淀，得到上清液，精密吸取 10 mL于装有40 mL乙醇（95%）的离心管中，静置过夜， 3 000 r/min离心20 min弃上清，沉淀物热水溶解，定容至 50 mL，得到提取液。

1.3.1.4 标准曲线的绘制。

采用硫酸-苯酚法，在490 nm波长下测定溶液吸光度。以吸光度（y）为纵坐标、浓度 （x，mg/mL）为横坐标绘制标准曲线（图1），得回归方程y= 3.562 1x-0.001 4（R2=0.999 5），结果表明，葡萄糖在0.02～ 0.10 mg/mL具有很好的线性关系。

1.3.2 天麻素、对羟基苯甲醇含量测定。

1.3.2.1 色谱条件。

以十八烷基硅胶键合硅胶为填充剂，流动相为乙腈-0.05%磷酸水（3∶97，V/V），流速为1.0 mL/min，检测波长为 220 nm，柱温为 30℃，进样量为10 μL。其色谱图详见图2。

1.3.2.2 标准曲线的绘制。

分别精密称取对照品天麻中天麻素和对羟基苯甲醇适量，用乙腈-水（3∶97，V/V）溶解，并定容至100 mL容量瓶中，分别配成0.188 8mg/mL的天麻素对照品溶液和0.342 mg/mL的对羟基苯甲醇对照品溶液。用注射器分别吸取1 mL经0.45 μm微孔滤膜过滤于安瓿瓶中，除进样量依次为2、3、5、8、10 μL外，按色谱条件检测峰面积，以峰面积（Y）为纵坐标、浓度（X）为横坐标，进行线性回归[8]，得天麻素的回归方程为Y=17 587X+5.374 3（r= 1.000 0）;对羟基苯甲醇的回归方程为Y=32 681X+18.732 （r=1.000 0）。结果表明，天麻素和对羟基苯甲醇分别在0～18.8和0～ 34.2 mg/μL 具有很好的线性关系。

1.3.2.3 供试样品溶液的制备。

称取天麻药材粉末2.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇（50% 50 mL，称定重量），超声处理（功率 250 W，温度40 ℃，频率 59 kHz）  30 min，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，滤过，精密量取续滤液 10 mL，浓缩至近干无醇味，残渣加乙腈-水（ 3∶97，V/V） 溶解，转移至 25 mL容量瓶中，用乙腈-水 （3∶97，V/V） 稀释至刻度，摇匀，经 0.45 μm 微孔滤膜过滤 即得。

1.3.2.4 样品含量的测定。

对不同规格等级天麻各做3次重复制备样品溶液，进样10 μL，按图2中色谱条件测定天麻素和对羟基苯甲醇含量[9]。

2 结果与分析

2.1 天麻样品中多糖含量的计算

对不同规格等级天麻各做3次重复，根据吸光度，计算样品中多糖含量。结果表明，不同等级天麻多糖含量有所差异，其中多糖含量最多的是三等天麻14.26%，其次是二等天麻，多糖含量为11.41%，一、四等天麻多糖含量差异较小，分别为9.86%和9.97%，多糖含量最少的是一等天麻。

2.2 不同规格等级天麻多糖含量方差分析

对不同规格等级天麻多糖含量进行方差分析[10]，分析其差异显著性，结果发现，不同规格等级间的F介于F0.05（3，8）和F0.01（3，8）之间、 0.01

2.3 天麻素和对羟基苯甲醇含量计算

根据峰面积，可计算出天麻素和对羟基苯甲醇的含量，结果表明，一等、二等、三等、四等天麻素和对羟基苯甲醇平均含量分别为 0.09%、 0.09%、0.11%和0.12%，差异不明显。

2.4 不同规格等级天麻天麻素和对羟基苯甲醇含量的方差分析

对不同等级天麻天麻素和对羟基苯甲醇含量进行方差分析，结果发现，不同等级间的F>F0.01（3，8），P≤0.01，表明4个等级天麻天麻素和对羟基苯甲醇含量差异极显著。

3 小结与讨论

随着中医药的快速发展，天麻产品中的其他微量成分正在引起人们的高度重视。通过对不同规格等级天麻主要成分测定及其相关性分析，由此得知，不同等级的天麻多糖含量差异显著，但是与规格没有相关性;天麻素和对羟基苯甲醇含量与天麻规格等级之间不具有相关性，不同规格等级之间天麻素和对羟基苯甲醇含量差异显著。因此，该试验结果为天麻分级提供理论依据，同时，也为今后天麻的產品开发研究提供指导意义。

参考文献

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2015.

[2] 钟赣生，刘树民，宋捷民，等.中药学[M].北京：中国中医药出版社，2012：351-352.

[3] 阳明，庞邦斌，银胜高，等.天麻传统规格等级与化学成分研究进展[J].海峡药学，2015，27（3）：42-43.

[4] 任守利.中药天麻商品规格等级相关性及划分合理性的研究[D].长沙：湖南中医药大学，2010.

[5] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：三部[S].北京：中国医药科技出版社，2015.

[6] 李云， 王志伟， 刘大会，等. HPLC法测定鲜天麻中多指标成分的含量[J].山东科学， 2017， 30（2）：7-12.

[7] 杨天友，刘金涛，李刚凤.超声波辅助提取德江天麻多糖工艺优化[J].中国酿造，2015，34（12）：117-121.

[8] 朱鹤云，张秀荣，于德水，等.正交试验优选天麻中天麻素与对羟基苯甲醇的提取工艺[J].吉林医药学院学报，2017，38（6）：415-417.

[9] 吕紫璇， 车早红， 唐瑜，等. HPLC法测定6省各等级天麻中天麻素和对羟基苯甲醇的含量[J]. 医学信息， 2016， 29（30）：212-213.

[10] 雷有成， 李建蕊， 肖佳佳，等. 天麻商品等级与天麻素和天麻多糖的相关性研究[J].中草药， 2015，46（3）：418-423.