游离脂肪酸受体FFAR4/GPR120在乳腺癌组织中的表达及其临床意义

郭文静，伍春梅，居琦，李金平

中国已成为乳腺癌发病率全球增长最快的国家之一，乳腺癌发病率位居我国女性恶性肿瘤首位[1]。目前对于乳腺癌的发病机制在分子领域中的研究发展迅速，GPR120近期被研究证实为长链脂肪酸受体，属于进化高度保守的视紫红质家族孤儿受体，链长度不同的长链脂肪酸(LCFAs)能够结合并活化GPR120，进而激活不同的信号通路而发挥不同的生物学功效[2]。作为ω-3脂肪酸的受体GPR120，大多数研究局限于肥胖和炎性反应等一些代谢性疾病的领域，其中炎性反应可作为多种恶性肿瘤发生的危险因素，因此，近年来已有不少关于GPR120与恶性肿瘤组织发生发展的相关研究[3]。目前GPR120与癌症进展相互关系的研究结果不一，相关研究数据显示其在不同肿瘤中发挥着不同的的生物学作用,尤其是在乳腺癌发生发展中的作用尚不明确。本研究采用了免疫组织化学染色法检测GPR120在人乳腺癌组织和癌旁正常组织中的表达,结合临床病理资料,进而分析其与临床病理学特征的关系，报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 收集 2016年10月—2017年10月宁夏医科大学总医院肿瘤医院肿瘤外一科行手术获取的乳腺癌石蜡标本125份及癌旁正常组织标本63份，所有病例术前均未接受放疗、化疗及其他抗肿瘤治疗,排除合并其他恶性肿瘤和癌前病变者以及患有严重的心、肺等器质性病变或严重的肝肾功能损害者。所有纳入患者均为女性，年龄27～80 (49.62±10.32)岁，<35周岁10例，35～55岁87例，>55岁28例；病理类型，浸润性小叶癌20例，浸润性导管癌96例，其他特殊类型乳腺癌9例；组织学分级，Ⅰ级14例，Ⅱ级49例，Ⅲ级41例；pTNM分期(根据AJCC乳腺癌TNM分期2017年版),Ⅰ期43例，Ⅱ期56例，Ⅲ期26例；伴腋窝淋巴结转移57例，无腋窝淋巴结转移68例。依据乳腺癌组织中雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、人表皮生长因子受体2(HER-2)及细胞增殖核抗原Ki-67的表达情况，可将其分为4种不同的乳腺癌分子亚型：Luminal A型(35例)、B型(48例)、HER-2过表达型(18例)与三阴型乳腺癌(TNBC型)(24例)；不同分子分型的乳腺癌，其疾病的进展、治疗的方式、治疗疗效、复发及转移都不尽相同[4]。

1.2 观察指标与方法 本研究经脱蜡和水化、抗原修复、过氧化物封闭、一抗孵育(以PBS缓冲液代替一抗为空白对照，以已知阳性切片为阳性对照；一抗兔抗人GPR120抗体的工作浓度为1∶150，兔抗人GPR120抗体购自英国ABCAM公司)、二抗孵育(二抗为快捷型酶标羊抗鼠/兔IgG聚合物，购自北京中杉金桥生物技术有限公司)、DAB显色(浓缩型DAB试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司)、干燥封片等免疫组化染色SP法步骤，其均在病理科实验专业技术人员的指导下严格按照试剂说明书进行。

1.2.1 GPR120蛋白表达检测：CPR120 主要在细胞膜呈阳性表达，部分表达于细胞质，以黄色、棕黄色着色为主，最终运用双盲法进行结果观察，由2位病理医师在显微镜下进行阅片，采用半定量评估法进行结果判读[5]。

1.2.2 ER、PR、雄激素受体(AR)、HER-2和Ki-67等指标：直接从宁夏医科大学总医院病例信息系统中获取。

1.3 结果判断 采取半定量评估方法对GPR120在组织中的阳性表达情况进行结果判读:(1)依据染色强度评分，无色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分, 黄褐色为3分；(2)依据阳性染色细胞百分率计分，<10%记作0分， 10%～25%记作1分， >25%～50%记作2分，>50%～75%记作3分，>75%记作4分；最后将(1)×(2)的结果作为阳性指数(0～12分)进行判定，<4分为阴性，≥4分为阳性。

2 结 果

2.1 乳腺癌组织及癌旁正常组织GPR120蛋白表达比较 GPR120蛋白在细胞膜呈阳性表达为主，部分于细胞质呈阳性表达，以黄色、棕黄色着色为主(图1见封3)；乳腺癌组织GPR120蛋白阳性表达率为90.4%(113/125) 高于癌旁正常组织的31.7%(20/63)(P<0.01)，见表1。

表1 乳腺癌组织及癌旁正常组织中GPR120蛋白表达比较 [例(%)]

2.2 GPR120蛋白在乳腺癌不同分子分型中的表达比较 在HER-2过表达型和TNBC型乳腺癌中GPR120蛋白的阳性表达率比Luminal型乳腺癌中的表达较高，但是在这4种不同的乳腺癌分子分型中，GPR120蛋白的阳性表达比较差异无统计学意义(P>0.05)，见表2。

2.3 不同临床病理特征患者GPR120蛋白表达比较 GPR120蛋白表达在乳腺癌不同病理类型中比较，差异有统计学意义(P<0.05)，而在不同年龄、绝经状态、组织学分级、病理分期、肿瘤大小以及淋巴结转移等之间比较，差异均无统计学意义(P>0.05)，见表3。

表2 GPR120蛋白在乳腺癌不同分子分型中表达比较 [例(%)]

表3 乳腺癌患者不同临床病理特征GPR120蛋白表达比较 [例(%)]

2.4 不同乳腺癌标记物表达患者中GPR120蛋白表达比较 GPR120蛋白表达在不同ER和Ki-67表达患者中比较，差异有统计学意义(P<0.05)，而在不同PR、AR及HER-2表达患者中比较，差异均无统计学意义(P>0.05)，见表4。

2.5 GPR120蛋白表达与肿瘤标志物相关性分析 经进一步相关性分析，GPR120蛋白表达与Ki-67的表达呈正相关(r=0.220，P=0.014)，与ER的表达呈负相关(r=-0.232，P=0.009)，与病理类型无相关性(r=-0.240，P=0.07)。

表4 在乳腺癌常规检测分子标记物中GPR120蛋白表达比较 [例(%)]

3 讨 论

近年来已有不少关于GPR120与恶性肿瘤组织发生发展的相关研究。有学者先后研究了前列腺癌、乳腺癌及卵巢癌，研究数据证实ω-3脂肪酸对前列腺癌细胞的抑制作用可以由FFAR介导，且主要由GPR120介导，首次确定了卵巢癌细胞中FFARs的潜在抑制作用[6-8]。

本研究采用免疫组织化学染色法证实了GPR120蛋白在人乳腺癌组织中表达，与之前多项研究FFA4在乳腺癌细胞株中表达的结果相一致[9]。根据免疫组化染色的结果统计分析GPR120蛋白在人乳腺癌组织中及癌旁正常乳腺组织中表达的差异，本结果显示，在乳腺癌中GPR120蛋白的阳性表达率为90.4%，明显高于癌旁正常组织，与Zhu等[10]研究结果一致。这一结果提示在乳腺癌组织中GPR120可能起着促进肿瘤进展的作用，作为癌症治疗药物靶点的潜在作用，同时有助于实现个体化治疗。

常规的乳腺癌分子生物学指标不仅能够预测肿瘤对临床治疗的反应，还能够帮助临床判断肿瘤患者的预后。本研究依照GPR120蛋白的表达，对乳腺癌常规检测的分子指标之间的关系进行统计学分析结果显示，GPR120在乳腺癌组织中的表达与ER以及Ki-67的表达具有相关性，且差异有统计学意义，与PR、AR、HER-2的表达无统计学意义；ER的表达可作为一项判断乳腺癌患者预后是否良好的指标，ER阴性的乳腺癌患者提示预后较差。Ki-67作为增殖相关的核抗原，其表达率越高则提示着预后越差[11]。本实验结果显示GPR120蛋白的表达与Ki-67的表达呈正相关，且在ER阴性的乳腺癌组织中的表达明显高于ER阳性乳腺癌组织，由此可推测GPR120阳性乳腺癌患者的预后可能会较阴性患者的预后差，这预示着GPR120的表达与否可作为判断乳腺癌患者预后是否良好的指标。之前的研究报道显示乳腺浸润性小叶癌有更良好的生物学表型，如更多的ER阳性、Ki-67的低表达[12]，本研究随后综合GPR120蛋白的表达情况，统计分析了其与临床病理特征的相关性，分析结果显示GPR120蛋白的表达与乳腺癌的病理类型状态具有相关性，其在浸润性导管癌和其他类型乳腺癌中阳性表达较高，在浸润性小叶癌中的表达较低,该结果预示着GPR120在乳腺癌组织中可能存在促进作用，导致乳腺癌疾病的进展。

研究进一步分析了GPR120蛋白在不同分子分型乳腺癌之间的表达情况，数据显示HER-2过表达型和TNBC型较Luminal型的乳腺癌GPR120蛋白的阳性表达率高，但在4种不同的乳腺癌分子分型中,GPR120蛋白的阳性表达差异无统计学意义，可能由于本次研究样本量相对较小，后续仍需要更多的研究去证实其在分子分型之间的意义。

综上，本研究发现，GPR120蛋白在乳腺癌癌组织中的表达显著高于其在癌旁正常组织中的表达；相比以前的实验研究，本研究首次发现乳腺癌组织中的GPR120蛋白的表达与Ki-67的表达及ER的表达有相关性，这一结果表明GPR120或可作为乳腺癌患者不良预后的预测指标；另外数据显示HER-2过表达型和TNBC型较Luminal型的阳性率高，虽然差异无明显统计学意义，但可能由于不同分子分型样本量相对较小所致，后续仍需要更多的研究去证实其在分子分型之间的意义；另外研究纳入人群均为可手术乳腺癌患者的组织标本，对于病理Ⅳ期的乳腺癌患者中GPR120的表达仍待确定；其次，研究仅依据GPR120蛋白的表达与乳腺癌常规检测分子标记物之间的相互关系，大胆地推测GPR120的高表达或可作为乳腺癌患者不良预后的预测指标，但是并未对纳入患者进行后期的追踪随访，以探究其与患者的无病生存时间、五年生存率及总生存率的关系。

利益冲突：无

作者贡献声明

郭文静：设计研究方案，实施研究过程，分析整理数据以及论文撰写；伍春梅、居琦：参与文章的修改；李金平：提供研究方向、研究思路及研究选题，分析试验数据及论文审核