大承气汤对肠源性脓毒血症大鼠免疫功能的影响

1.湖南中医药高等专科学校基础医学部,湖南 株洲 412012；2.湖南中医药高等专科学校附属第一医院，湖南 株洲 412000

大承气汤由大黄、芒硝、厚朴和枳实4味中药组成，方中大黄为君药，行泻热通便之效；芒硝为臣药，行泻热软坚润燥之效，助大黄通腑实积滞；枳实、厚朴共为佐使药，有行气散结，消痞除满之效，共助大黄、芒硝荡涤肠中积滞。全方用药虽少，但其峻下热结功效显著，主治阳明腑实证、热结旁流以及里热实证之热厥、痉病或发狂等。中医学中并无脓毒血症之谓，但究其临床特点，其病机主要是热毒积阻，气血瘀滞，治宜清热解毒，通腑利气，活血化瘀。因此，大承气汤对脓毒血症有比较好的治疗价值[1-2]，并进行了相关的实验研究。

脓毒血症是一种由感染引起的全身性炎症反应，且伴随感染出现的器官功能性损害的临床综合征[3-4]。脓毒血症发生过程中，炎症级联反应启动，刺激诱发细胞因子风暴，多种促炎性细胞因子和抑炎细胞因子被激活，大量淋巴细胞被诱导凋亡，导致机体的免疫调节机能紊乱，甚至被抑制[5-6]。在脓毒血症病理过程中，免疫细胞过度激活和淋巴细胞受抑制的持续存在，会导致机体的免疫调节机能和淋巴细胞的分泌和增殖功能受到抑制，持续造成组织和器官损伤[7]。本次实验旨在探讨大承气汤对脓毒血症大鼠的免疫功能影响作用，探讨和分析其内在的机理。

1 实验材料

1.1 动物 SPF级SD大鼠，雌雄各半，体重180～220 g，购自湖南斯莱达景克实验动物有限公司(许可证号：SCXK(湘) 2014-0003)。

1.2 药物 大承气汤药物按大黄：厚朴：枳实：芒硝体质量比4∶5∶5∶3组成。药材用蒸馏水清洗3次，再蒸馏水中浸泡30 min，武火将厚朴、枳实武火煮沸20 min后，改用文火煎煮10 min，再加入大黄续煎10 min后澄取煎液，头煎和复煎液混匀，芒硝倒入，充分融化，用四层无菌纱布过滤，55 ℃水浴浓缩至含生药1.0 g/mL，置4 ℃冰箱保存备用。醋酸泼尼松片，国药准字H33021207，批号:150117，浙江仙琚制药股份有限公司生产。

1.3 仪器和试剂 GHP-9160隔水式恒温培养箱(上海一恒公司生产)，分析天平(湖南湘仪公司)，台式变频TGL16M型高速冷冻离心机(长沙科威实业有限公司)，ELISA 酶标仪(Thermo公司)，IgA、IgG、IgM ELISA试剂盒(上海研谨生物科技有限公司)。

2 方法

2.1 肠源性脓毒症模型制备[8]参照经典的盲肠结扎穿刺法(ceca ligation and puncture，CLP)复制动物模型，2%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉大鼠后，大鼠板固定，手术常规消毒后，沿腹中线切开，在盲肠远端结扎盲肠，18G针头在结扎处远端垂直于盲肠对穿盲肠2次，轻轻挤出肠内容物，复位，然后缝合。假手术组动物打开腹腔后，不结扎不对穿，钝性搅动盲肠后缝合，不做其他处理。

2.2 动物分组及干预措施 模型动物按体重随机分为模型组、大承气汤5 g/kg组、大承气汤10 g/kg组和激素组，另设正常组和假手术组，每组动物10只。动物给药剂量按照体表面积折算法进行，其中正常组、模型组和假手术组动物生理盐水灌胃，大承气汤5 /kg组、大承气汤10 g/kg组、激素组0.5 mg/kg分别灌胃对应药物，所有动物给药体积为10 mL/kg，连续7 d。

2.3 样本取材和观察指标 最后一次灌胃给药结束后8 h，腹主动脉取大鼠外周血，低速冷冻离心分离血清，-70 ℃冰箱冻存备检测各组动物血清IgA、IgG、IgM水平(ELISA法)；解剖大鼠，分离大鼠脾脏和胸腺，无菌生理盐水冲洗干净，分析天平称重，分别计算脾脏指数和胸腺指数，其中脾脏(胸腺)指数=脾脏(胸腺)重量(g)/体重(kg)。

3 结果

3.1 大承气汤对脓毒症大鼠胸腺和脾脏指数的影响 从表1可知，模型组胸腺指数和脾指数显著低于正常组和假手术组，说明脓毒血症大鼠对免疫器官受到显著的抑制作用(P< 0.01)；但在大承气汤治疗7 d后，脓毒血症大鼠的胸腺指数和脾指数得到一定提高，和模型组相比有统计学意义(P<0.01或P<0.05)；与激素组相比，大承气汤10 g/kg组胸腺指数和脾指数有一定程度提高(P<0.05)。结果表明大承气汤可以保护脓毒血症中免疫器官，对机体的正常免疫应答有正向调节作用。

组别n胸腺指数脾脏指数正常组102.026±0.182∗∗5.492±0.428∗∗模型组100.907±0.0922.617±0.119假手术组101.752±0.137∗∗4.638±0.354∗∗大承气汤5g/kg组101.523±0.186∗4.296±0.385∗大承气汤10g/kg组101.948±0.160∗∗△5.081±0.407∗∗△激素组101.605±0.142∗4.335±0.373∗

注：与模型组相比，*P<0.05，* *P<0.01；与激素组相比，△P<0.05，△△P<0.01。

3.2 大承气汤对脓毒症大鼠血清IgA、IgG、IgM水平的影响 正常组与模型组比较，模型组 IgG、IgA、IgM 含量显著降低，差异具有统计学意义(P<0.01)，提示模型动物体内炎性因子大量释放，导致外周血清中免疫细胞数目显著减少；大承气汤干预治疗后，血清IgA、IgG、IgM水平能明显的回升(P<0.01或P<0.05)，说明大承气汤能促进机体的主动免疫反应；与激素组相比，大承气汤10 g/kg组也明显具有优势(P<0.05)。见表2。

组别nIgAIgGIgM正常组100.284±0.023∗∗1.587±0.046∗∗0.507±0.026∗∗模型组100.129±0.0141.034±0.0370.204±0.019假手术组100.246±0.018∗∗1.352±0.026∗∗0.468±0.026∗∗大承气汤5g/kg组100.197±0.016∗1.226±0.028∗ 0.411±0. 028∗ 大承气汤10g/kg组100.255±0.020∗∗△1.441±0.030∗∗△0.482±0.033∗∗△激素组100.224±0.026∗1.305±0.029∗0.419±0.027∗

注：与模型组相比，*P<0.05，**P<0.01；与激素组相比，△P<0.05，△△P<0.01。

4 讨论

在脓毒血症病理过程中，促炎因子大量释放的同时，也会激发大量抑炎因子被释放，导致患者的正常免疫功能受到抑制[9-10]。在CLP复制脓毒血症小鼠中，Hotchkiss等[11]研究发现动物体内存在淋巴细胞凋亡，原发性低免疫反应和T淋巴细胞免疫功能抑制。当脓毒血症患者进入免疫抑制阶段，过渡活化淋巴细胞会发生大概率凋亡，其增殖能力受到显著抑制，导致机体自身免疫保护能力降低[12]。

药理研究证实[13-14]，大承气汤有攻下泻热逐瘀之效，其能降低肠粘膜和肠细胞膜通透性，减轻肠粘膜组织炎症病理损伤，减少血清内毒素和炎性细胞因子的释放。另外，大承气汤能双向调节巨噬细胞免疫功能，其适当剂量能促进正常巨噬细胞释放TNF-α，TNF-α可进而作用于并激活T、B淋巴细胞，最终增强T、B淋巴细胞免疫功能[15]。胸腺和脾脏是机体重要的免疫器官，其体质量是反映免疫器官功能的重要指标，因此选用胸腺指数和脾脏指数来评价本实验研究中脓毒血症大鼠的免疫水平。研究结果表明：大承气汤可明显提高模型动物的胸腺指数和脾脏指数(P<0.01或P<0.05)，且呈现一定的剂量正相关性，可见大承气汤可对抗脓毒血症大鼠胸腺和脾脏萎缩，提高机体免疫能力。存在于血液、体液、组织液中的免疫球蛋白，是机体具有抗体活性的蛋白，可发挥抗感染免疫功能。血清中IgA、IgG、IgM水平的变化，能提示脓毒血症病变进程和治疗效果。实验中，脓毒血症大鼠血清IgA、IgG、IgM水平较正常组显著降低(P<0.01)，提示其免疫反应受到抑制，机体免疫反应低下。大承气汤可有效提高血清IgA、IgG、IgM水平(P<0.01或P<0.05)，说明其可有效调节浆细胞分泌球蛋白，参与机体体液免疫反应，提高机体免疫能力，从而减缓器官和组织免受损伤。综合来看，大承气汤可有效调节脓毒血症中抗炎与抑炎失衡所导致的免疫功能紊乱，来发挥其治疗作用，机理值得进一步深入探讨。