洁净室检测采样方法中的随机抽样理论

常玥

【摘 要】洁净室净度分级是对新建成以及运行中洁净室净度等级重要措施，为了更好的做好洁净度检测，要求合理应用采样方法，基于此，本文论述了洁净室检测采样方法中的随机抽样方法的应用。

【关键词】洁净室；检测；采样

引言

洁净室在微生物检测过程中处于核心地位，直接决定检测结果的准确性。如果洁净室的洁净度不达标，或因为其他原因受到污染，微生物检测过程将得不到控制，最终的检测结果数据也是无效的。因此，微生物实验室在把控检测质量时必须严格按照洁净室管理维护操作规程的要求，做好洁净度监控。

1、洁净室的污染源

洁净室污染源按性质可分物理、化学、生物等。直径在0.001-1000μm的固态、液态或二者的混合物质，包括生物粒子和非生物粒子，我们称为悬浮粒子（airborneparticles）。微生物一般以无生命的粒子作载体而悬浮，以气溶胶（Aerosol）形式存在于空气中，1μm以下者永外悬浮，10μm以上者会逐渐沉下来而形成菌尘。洁净室污染可分为外部污染和内部污染。外部污染指大气尘污染，可以通过光电法测得。内部污染，是由人和有关的物品、设备等引起的。人是洁净室最大的污染源，占90%左右。人和环境造成了洁净室的污染，所以在洁净室中，人的数量和活动应有特别严格的限制。一般男性每人每分钟向周围排放1000个以上的含菌粒子，女性为750个以上。穿衣服时，静止态发菌量为10-300个/min·人，行走时的发菌量为900-2500个/min·人。咳嗽一次发菌量为70-700个/min·人，喷嚏一次为400-600个/min·人。由于空气中存在大量尘埃粒子，而微生物大多依附于这些尘埃粒子随空气流动造成污染。制药工业用多种方法获得无菌状态，过滤法以其捕集率高，又经济而被广泛使用。其中，特别应该提到的是采用了HEPA（HighEqqicienoyParticulateAir）过滤器，对0.3μm以上空气粒子捕集率高达99.97%以上，除滤过病毒外，空气中所有微生物颗粒可被滤除。因此，正常洁净室是无菌的，但是，由于人、物、环境等污染因素，洁净室往往受到不同程度污染。

2、采样方法分析

对采样点的确定按照标准并结合实际以分析产品与其接触或暴露的环境的程度为原则。对能够反映产品的微生物污染水平有代表性的取样点则必须取样。结合工厂实际确定合适的采样点有很多因素。对在实际操作中的一些情况分析如下：（1）生产车间洁净室的形状很多是不规则的，不能按照GB/T16294—2010《医药工业洁净室（区）沉降菌的检测方法》中规定的位置布点，但可以按照GB/T16294—2010中的布点原则“力求均匀，避免采样点在某区域过于集中”布点。（2）GB/T16294—2010《医药工业洁净室（区）沉降菌的检测方法》中规定采样点的位置离地0.8～1.5m（略高于工作面），但在实际空间上有些摆放点没有0.8～1.5m的台面，因此培养皿只好摆在地面上，这实际上是提高了监测标准。（3）在回风口附近和气流路径不直接通过的房间角落处，可加放培养皿，用于监测洁净室最差处的微生物状况（可不作为评判洁净室的数据）。因为洁净室操作人员的存在，在其所到之处，只要有微生物的存在，都可能由其带入同级别的主要生产区域，因此，有必要对最差区域进行微生物监测，从而掌握洁净室的洁净度，保证所生产药品的质量。

以置信度计算出采样点数量说明，洁净室空气洁净度分级检测的采样方法是建立在概率论基础上的，即按一定的置信度以有限数量的样本反映整体或一定比例（如90%）整体的特征。但样本的随机性是这一方法的灵魂。就是说整体中所有样本被抽取受到检测的机会均等，抽到哪一个只是随机而定。无论样本好坏如何，它们都有被测到的同等机会。以此保证抽样的客观性及对整体反映的可靠度。为将此理论应用于洁净室检测，先要以某个单位面积（例如4m2）为基本单元，将洁净室划分为若干或更多的等面积单元。按照洁净室的面积找到表1中对应于该面积的采样点数量，从数量众多的等面积单元中，随机选取该数量的单元进行检测。具体检测位置也是在该单元之内随机选定。以100m2洁净室为例，它可分为25个单元，每个单元4m2。100m2的采样点数量为16个，再在这25个单元中随机选取16个进行采样。这个随机选点过程不是由人随意选定的，是根据随机数字发生器产生的随机数字，选定编号相同的单元确定的。这一方法的随机性是最佳的，每次抽样时尚未被抽到的单元被抽到的概率是完全相等的。所以，被抽到的单元不会均匀或大致均匀分布在洁净室中。采用这种抽样方法可能在洁净室中留下大片未抽到区域，同时，有些采样点会显得相对集中。洁净室面积越大，这种趋势越明显。那么这种方法能够反映洁净室粒子浓度的全貌吗？问题还要从对4m2的单元分析开始。按随机抽样理论，每个样本性质相同，各自独立，互不影响。例如对产品质量的抽检，每件产品都是以基本相同的原材料，同样的机器，同样的工艺，甚至相同的工人操作而生产出来的。它们总的内在质量应该是基本一致的。这时用随机抽样方法进行检测，找出可能混杂于其中的不合格产品，是一种省时、省力的方法。但处在洁净室中的这4m2空间，每个4m2的空间可能各不相同，如處在风口之下的、风口之间的，或在无风口处的，它们情况也是各有不同。而且由于这个小单元并未“与世隔绝”，也只有在空态的垂直层流洁净室内，这4m2的单元可能处于“最理想”的状态。即特性大体一致，各种独立，互无干扰和影响。混合流洁净室无论处于三种占用状态的哪一种，或对处于静态或动态的垂直层流洁净室，其基本单元的统一性和独立性都是要大打折扣的。

3、结语

微生物洁净室的管理和检测质量息息相关，洁净室的管理维护是一个持续的过程，应重视制度、人员等起到的作用，重视日常管理维护措施，保障洁净室的洁净度，才能确保检测质量。

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（作者单位：天津津环医净空气检测技术有限公司）