铁棒锤化学成分研究

邵成雷 孔倩倩

【摘要】目的：研究铁棒锤生物碱类化学成分。方法：采用高分辨液质联用法明确铁棒锤主要生物碱类化学成分。结果：确定了铁棒锤18个酯型生物碱成分。结论：铁棒锤中生物碱成分的明确为其科学应用提供了依据。

【关键词】铁棒锤，薄层色谱，液质联用

[中图分类号]R284.1 [文献标识码]A [文章编号]2096-5249（2019）17-0063-02

铁棒锤为铁棒锤（Aconitum pendulum Busch）和伏毛铁棒锤（Aconitum flavum Hand-Mazz）的干燥块根和幼苗，收载于《中华人民共和国卫生部药品标准（藏药）》第一册。资料记载，宁产铁棒锤为道地药材，主要为伏毛铁棒锤。铁棒锤资源丰富，分布广泛，主要分布于四川、云南西北部，甘肃、西藏、陕西、青海、宁夏及内蒙古南部，生于2000-3000 m的山顶、山坡、草地或林下。

1铁棒锤总生物碱的制备

1.1材料试药：铁棒锤;石油醚（60-90%沸程）、乙醇、二氯甲烷、甲醇、正己烷、乙酸乙酯、氨水、甲醇、稀碘化铋钾、盐酸均为分析纯。

仪器：电子分析天平、KQ5200B超声波清洗器、旋转蒸发仪。

1.2方法与结果

1.2.1总生物碱的制备总生物碱提取：取铁棒锤药材，加石油醚（60-90°C沸程）回流搅拌提取2次，第一次加石油醚8倍量（v/w），提取2h，第二次加石油醚6倍量（v/w1，提取1h。抽滤，药渣，挥尽石油醚，加乙醇温浸搅拌提取两次，第一次加乙醇8倍量（v/w），温度70%，提取2h，第二次加乙醇6倍量（v/w），温度70%，提取1h，抽滤，乙醇液合并，低温（40℃）减压回收乙醇，得提取物A。加1%盐酸10倍量，超声溶解，用乙酸乙酯萃取2次，每次等倍量，合并乙酸乙酯液，低温（35℃）减压回收乙酸乙酯，备用。酸水液用氨水调PH%10，用乙酸乙酯萃取4次，每次等倍量，合并乙酸乙酯液，低温（35℃）减压回收乙酸乙酯，得铁棒锤总碱提取物。

1.2.2生物碱成分的分离纯化氧化铝柱纯化：取铁棒锤总碱提取物，甲醇溶解，加中性氧化铝（100-200目）3倍量，拌样，过氧化铝柱（拌样硅胶：空白硅胶=10：1），用二氯甲烷-甲醇（70：30）洗脱，至流出液生物碱反应阴性。合并所有洗脱液，浓缩，低温干燥，得浓缩样品。氧化铝柱再用甲醇洗脱，合并甲醇液，浓缩，备用。TLC检测结果表明，总碱提取物经氧化铝柱纯化，二氯甲烷一甲醇（70：30）洗脱剂单一梯度可以将生物碱完全洗脱，杂质吸附在氧化铝柱上，实现初步纯化。MCI GEL柱纯化：取氧化铝柱所得二氯甲烷一甲醇（70：30）洗脱部分浓缩样品，用稀甲醇适量溶解，滤过，上MCI GEL柱，依次用水→10%甲醇→30%甲醇→50%甲醇→70%甲醇→90%甲醇→甲醇→丙酮洗脱，收集不同流份得铁棒锤生物碱纯化后流份，用于HPLC-MS分析。

2.HPLC-MS分析

供试品溶液的制备：样品溶液制备：取1.1.2项下铁棒锤生物碱纯化后流份，加适量甲醇溶解，用0.45um有机微孔滤膜滤过，作为供试品溶液。仪器：德国Thermo FischerScientific高分辨液相色谱质谱联用仪。色谱条件：WatersSymmetryCl8色谱柱（5um，250mm×4.6mm），柱温：25%，流速800ul/min，检测波长：230nm，进样体积：5ul。流动相：以乙腈为流动性A，以0.1%氨水为流动性B，按下表规定进行梯度洗脱。

质谱条件：LTQ-Orbitrap XL型质谱，ESI离子源，鞘气50arb，毛细管温度275%，辅助气lOarb，毛细管电压25V，喷雾电压4.0kV。正离子模式扫描，m/z扫描范围100-1000。

3讨论

铁棒锤为常用毒性药材，但通过炮制可以实现解毒增效。现代医药研究开发的藏成药中，铁棒锤亦为常用药材，仅《中华人民共和国卫生部药品标准》藏药第1册（1995年版）中收载的成药方剂中，就有31个处方含有铁棒锤，占藏成方的15.5%，如安神丸、三十五味沉香丸、二十五味肺病胶囊、十一味金色丸、二十九味能消散、青鹏软膏等。铁棒锤主物质主要毒性成分为为二萜生物碱，根据基本骨架所含的碳原子数不同，可分为c19-二萜生物碱、C20-二萜生物碱。前者是目前发现的最具毒性的植物成分之一，又称乌头碱型生物碱，其结构和活性密切相关，取代基种类、数目、位置的差异等均可导致药理作用、毒性方面的差异。其中乌头碱型双酯碱>牛扁碱型酯碱>乌头碱型单酯碱>C19及C20醇胺型碱>内酯型碱;双酯型>单酯型>醇胺型。双酯型乌头碱c8位上的乙酰基水解，得到苯甲酰单酯型生物碱，其毒性为双酯型乌头碱的1/50～1/500本实验采用高分辨液相色谱质谱联用仪对铁棒锤中生物碱成分进行检测，确定18个酯型生物碱：去甲基尼奧灵、螺翠宁、heterophyllidine、尼奥灵、daphnezomine s、echivulgarine、欧乌头碱、yuzurine、苯甲酰去氧乌头碱、16-epi-pyroaconitine、去乙酰乌头碱、阿替辛、philogaline、乌头碱、daechuine-$3、14-O-vera/roylneoline、多裂乌头碱D、苯甲酰乌头原碱。