过氧化物酶法检测sdLDL-C的分析性能评价

杜敏

摘要：目的  分析过氧化物酶法检测小而密低密度脂蛋白胆固醇（sdLDL-C）的性能。方法  选择2018年10月～2018年12月在我院接受健康体检的120例体检者作为研究对象，均采用过氧化物酶法对sdLDL-C进行检测。以美国临床实验室标准协会EP文件要求，对过氧化物酶法检测sdLDL-C的精密度、参考区间、抗干扰能力进行评估和分析。结果  低值总精密度、高值总精密度分别为（0.06±0.02）mmol/L、（2.18±0.07）mmol/L，二者比较，差异有统计学意义（P<0.05）。低值总CV、高值总CV分别为3.14%、2.80%，二者比较，差异有统计学意义（P<0.05）。男性中青年组sdLDL-C水平为（0.61±0.18）mmol/L，高于女性中青年组的（0.43±0.10）mmol/L;男性老年组sdLDL-C水平为（0.75±0.12）mmol/L，低于女性老年组的（0.89±0.20）mmol/L，差异均有统计学意义（P<0.05）。在血红蛋白、胆红素、乳糜微粒干扰水平分別为5 g/L、598.5 μmol/L、67.7 mmol/L，与试剂盒厂商说明书提供的参考数据相符。结论  过氧化物酶法应用于sdLDL-C的检测中，在抗干扰性、重复性、操作性方面具有一定优势，符合实验室常规检测的需要。

关键词：过氧化物酶法;sdLDL-C;胆固醇;性能评价

中图分类号：R446.1                                  文献标识码：A                                DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2019.14.060

文章编号：1006-1959（2019）14-0178-02

Abstract：Objective  To analyze the performance of peroxidase assay for small， dense low-density lipoprotein cholesterol （sdLDL-C）. Methods  120 patients who underwent a physical examination in our hospital from October to December 2018 were enrolled in the study. All of them were tested by sdLDL-C by peroxidase method. The precision， reference interval， and anti-interference ability of sdLDL-C were measured and analyzed by peroxidase method according to the requirements of EP file of American Clinical Laboratory Standards Association. Results  The total precision of the low value total precision and high value were （0.06±0.02） mmol/L and （2.18±0.07） mmol/L， respectively，the difference was statistically significant （P<0.05）. The total CV of low value and the total CV of high value were 3.14% and 2.80%， respectively，the difference was statistically significant （P<0.05）. The sdLDL-C level in male middle-aged group was （0.61±0.18） mmol/L， which was higher than that in female middle-aged group （0.43±0.10） mmol/L; the male sdLDL-C level was （0.75±0.12） mmol/L， lower than the female elderly group （0.89 ± 0.20） mmol / L， the difference was statistically significant （P<0.05）. The interference levels of hemoglobin， bilirubin， and chylomicrons were 5 g/L， 598.5 μmol/L， and 67.7 mmol/L， respectively， which were consistent with the reference data provided by the kit manufacturer's instructions.Conclusion  The peroxidase method has certain advantages in the detection of sdLDL-C in terms of anti-interference， repeatability and operability， and meets the needs of routine laboratory testing.

Key words：Peroxidase method;sdLDL-C;Cholesterol;Performance evaluation

小而密低密度脂蛋白胆固醇（sdLDL-C）是低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）中的一种常见分型[1]。研究表明，sdLDL-C是致动脉粥样硬化的主要亚型，且与动脉粥样硬化类疾病发生心脑血管事件有密切联系，对心脑血管疾病的评估具有较高的参考价值[2]。目前，sdLDL-C的检测方法比较多，过氧化物酶检测法便是其中之一。过氧化物酶检测法相较于梯度凝胶电泳法、密度梯度超速离心法、核磁共振光谱法等检测sdLDL-C的方法，较容易在临床实验室推广应用，从而为临床常规检测sdLDL-C提供了可能[3]。为进一步探究过氧化物酶检测法在sdLDL-C检测中的应用及效果，本研究针对30例收治的健康体检者，采用过氧化物酶检测法检测sdLDL-C进行了分析，现将结果报告如下。

1资料与方法

1.1一般资料  选择2018年10月～12月黑龙江省佳木斯市中心医院120例健康体检者作为研究对象，排除合并严重的脏器功能衰竭者，年龄21～78岁。其中男64例，年龄21～78岁，平均年龄（45.84±2.35）岁;女56例，年龄22～78岁，平均年龄（45.05±2.41）岁。根据年龄将21～59岁设为中青年组，60～78岁设为老年组。男中青年组40例，平均年龄（33.26±3.12）岁;男老年组24例，平均年龄（64.23±2.08）岁;女中青年组30例，平均年龄（34.05±3.39）岁;女老年组26例，平均年龄（63.89±2.17）岁。本研究经医院伦理委员会批准，研究对象均知情同意，并签署同意书。

1.2方法

1.2.1仪器与试剂  sdLDL-C过氧化物酶法检测试剂盒，配套胶质校准品，配套质控品1和2（16-0622），由北京九强生物试剂公司提供，全自动生化分析仪由日本Hitachi7600公司提供。

1.2.2标本采集  于清晨8时空腹状态下采集受检者静脉血，剂量为5 ml，保存至黄头管（分离胶管）中，30 min内在3000 r/min的环境下离心处理5 min，而后保存于-20℃的冰箱中，于2 h内集中检测。

1.2.3检测方法  采用过氧化物酶法进行检测，试剂盒采用两步法分析。检测温度设置为37℃，主波长和副波长分别设置为600 nm、700 nm，反应时间为10 min，校准方式为亮点线性校准。

1.2.4精密度检测  参照美国临床实验室标准协会（CLSI）临床化学设备操作精密度评价核准指南，取0.50 mmol/L（低值混合血清）、2.20 mmol/L（高值混合血清）作为实验标本。对标本进行反复检测，次数控制为20次，计算平均值、标准差以及变异系数（CV），得到批內精密度相关数据。在此基础上，再于每天对标本进行2次测定，每次测定做2份，测定20 d，计算出平均值、标准差以及CV，得到批间精密度。

1.2.5抗干扰试验  参照CLSI相关指南，取健康受检者EDTA-k2抗凝的全血样品，进行离心处理后将血浆去除，取上层血清，反复冻融后配制成高水平（50 g/L）的溶血样品备用。取黄疸和脂浊者标本作为干扰物质。混合血清分为2份，1份加入干扰物质，1份不加干扰物质（加等量去离子水），按比例混合成不同的水平梯度，测定3次，在血红蛋白、胆红素、乳糜微粒干扰水平计算分析干扰。若结果≤10.0%表示无干扰影响。

1.3统计学方法  数据分析使用SPSS 21.0统计软件包，计量资料采用（x±s）表示，组间比较采用t检验，计数资料采用（%）表示，组间比较采用？字2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1精密度检测  低值总精密度、高值总精密度分别为（0.06±0.02）mmol/L、（2.18±0.07）mmol/L，二者比较，差异有统计学意义（P<0.05）。低值总CV、高值总CV分别为3.14%、2.80%，二者比较，差异有统计学意义（P<0.05）。

2.2不同性别sdLDL-C参考区间比较  男性中青年组sdLDL-C参考区间水平高于女性中青年组，男性老年组低于女性老年组，差异均有统计学意义（P<0.05），见表1。

2.3抗干扰试验  在血红蛋白、胆红素、乳糜微粒干扰水平分别为5 g/L、598.5 μmol/L、67.7 mmol/L，与试剂盒厂商说明书提供的参考数据相符，可用于抵抗临床常见的干扰问题。

3讨论

近年来，心血管疾病的发病率及致死率不断上升，已位居我国国民死因首位[4]。动脉粥样硬化是造成心血管疾病的主要因素，而动脉粥样硬化又是多种因素共同作用的结果，较为常见的因素如肥胖、糖尿病、高血压、血脂异常等。其中，血脂异常作为动脉粥样硬化的常见因素，受到了临床的广泛关注，可以通过对三酰甘油、总胆固醇及高、低密度脂蛋白胆固醇的检测进行评估。研究发现，小而密低密度脂蛋白胆固醇（sdLDL-C）可以作为新的脂类危险因素，应用在缺血性心血管疾病患者的评估和预后中，具有较高的应用价值[5]。

过氧化物酶法sdLDL-C试剂盒的检测原理源于Hiran等提出利用特殊表面活性剂与脂蛋白的特异性反应从而检测sdLDL-C水平的理论。即选用聚氧乙烯苄基苯基醚衍生物作为表面活性剂选择性地解离出非LDL-C脂蛋白成分，胆固醇酯被胆固醇酯酶和胆固醇氧化酶分解掉，大而轻低密度脂蛋白被鞘磷脂酶水解，从而只有剩余的sdLDL-C参与显色反应。该方法利用特异表面活性剂使试剂中的酶可以和特定的脂蛋白发生特异的反应，sdLDL-C被释放出来参与显色反应的原理进行检测，具有较强的操作性。本研究中低值总精密度、高值总精密度分别为（0.06±0.02）mmol/L、（2.18±0.07）mmol/L，二者比较，差异有统计学意义（P<0.05）。低值总CV、高值总CV分别为3.14%、2.80%，二者比较，差异有统计学意义（P<0.05）。男性中青年组sdLDL-C水平高于女性中青年组，男性老年组sdLDL-C水平低于女性老年组（P<0.05）。在血红蛋白、胆红素、乳糜微粒干扰水平分别为5 g/L、598.5 μmol/L、67.7 mmol/L，与试剂盒厂商说明书提供的参考数据相符。且仍与CLSI相关指南一致，提示过氧化物酶法检测的价值。

综上所述，过氧化物酶法检测sdLDL-C效果明显，可满足临床常规检测要求，具有一定的应用价值。

参考文献：

[1]闻华，张润玲.小而密低密度脂蛋白胆固醇临床检测应用的研究进展[J].标记免疫分析与临床，2017，24（12）：1440-1442.

[2]成士清，鞠瑛，栾芳，等.清除法测定小而密低密度脂蛋白胆固醇的方法学评价及临床应用初探[J].中华检验医学杂志，2017，40（4）：253.

[3]徐竞，李美英，周曾.小而密低密度脂蛋白胆固醇联合同型半胱氨酸检测对脑梗死老年患者预后评估的价值[J].安徽医学，2017，38（9）：64-68.

[4]Wang M，Li YF，Guo YG，et al.Positive correlation between plasma PCSK9 and tissue factors levels in patients with angiographically diagnosed coronary artery disease and diabetes mellitus[J]. Journal of Geriatric Cardiology Jgc，2016，13（4）：312-315.

[5]Zhang Y，Xu RX，Li S，et al.Association of plasma small dense LDL cholesterol with PCSK9 levels in patients with angiographically proven coronary artery disease[J].Nutr Metab Cardiovasc Dis，2015，25（4）：426-433.

收稿日期：2019-2-13;修回日期：2019-2-24

编辑/冯清亮