UbcH10在肝癌组织中的表达及临床意义

田明　常伟平　盛旭东

摘要：目的  探讨UbcH10在肝癌组织中的表达及临床意义。方法  收集2018年2月～10月在本院就診并行手术切除的肝癌患者肿瘤组织标本30例，并以相应癌旁正常组织（距离肿瘤组织>5 cm）为参照。采用免疫组化分析肝癌组织和癌旁正常肝组织中的UbcH10蛋白的表达量以及肝癌UbcH10蛋白表达与临床病理特征的关系。结果  有93.33%的肝癌组织中显示UbcH10表达，仅有6.67%的癌旁正常肝组织显示UbcH10表达，肝癌组织中UbcH10表达高于癌旁正常肝组织，差异有统计学意义（P<0.05）;其中高分化肝癌组织UbcH10表达低于低分化肝癌组织，差异有统计学意义（P<0.05）。不同年龄、性别患者中UbcH10表达比较，差异无统计学意义（P>0.05）;不同肿瘤大小、组织学分化程度、淋巴结是否转移患者中UbcH10表达比较，差异有统计学意义（P<0.05）。结论  UbcH10在肝癌患者肝组织中过度表达，并与肿瘤大小、分化程度及淋巴结转移相关。UbcH10可作为肝癌患者肿瘤治疗的预后标志物和潜在分子靶点。

关键词：UbcH10;肝癌组织;癌旁正常肝组织

中图分类号：R735.7                                 文献标识码：A                                 DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2019.14.023

文章编号：1006-1959（2019）14-0072-03

Abstract：Objective  To investigate the expression and clinical significance of UbcH10 in hepatocellular carcinoma.Methods  30 cases of tumor tissue specimens from patients with liver cancer who underwent surgical resection in our hospital from February to October 2018 were collected and referenced to the corresponding adjacent normal tissues （>5 cm from tumor tissue）. The expression of UbcH10 protein in liver cancer tissues and adjacent normal liver tissues and the relationship between UbcH10 protein expression and clinicopathological features were analyzed by immunohistochemistry.Results  U3cH10 expression was observed in 93.33% of liver cancer tissues， and only 6.67% of adjacent normal liver tissues showed UbcH10 expression. The expression of UbcH10 in liver cancer tissues was higher than that in adjacent normal liver tissues， the difference was statistically significant （P<0.05）. The expression of UbcH10 in highly differentiated liver cancer tissues was lower than that in poorly differentiated liver cancer tissues， the difference was statistically significant （P<0.05）. There was no significant difference in the expression of UbcH10 between patients of different ages and genders （P>0.05）. The expression of UbcH10 in patients with different tumor size， histological differentiation and lymph node metastasis was statistically significant （P<0.05）.Conclusion  UbcH10 is overexpressed in liver tissues of patients with liver cancer and is associated with tumor size， differentiation and lymph node metastasis. UbcH10 can be used as a prognostic marker and a potential molecular target for tumor therapy in patients with liver cancer.

Key words：UbcH10;Liver cancer tissue;Adjacent normal liver tissue

原發性肝细胞癌（primary hepatocellular carcinoma），简称肝癌，是高发病率高死亡率的恶性肿瘤，手术切除是其最主要的根治性治疗，但术后5年生存率仅约50%，5年复发率可达60%～70%[1]。泛素结合酶UbcH10是第10个被识别的人泛素结合酶，属于泛素结合酶E2家族的成员，是一种调节细胞周期的蛋白，其可参与蛋白质的特异性降解，通过与细胞后期促进复合物相互作用影响有丝分裂纺锤体装配检测点，驱动有丝分裂后期转换[2]。有研究报道[3]，泛素结合酶UbcH10与肿瘤的发生与进展密切相关。因此，寻找更准确的早期诊断工具和新的治疗靶点尤为重要，也是降低肝癌患者死亡率的重要举措。本研究主要探讨UbcH10表达在肝癌组织中的表达及临床意义，现报道如下。

1资料与方法

1.1一般资料  收集2018年2月～10月在西安医学院第一附属医院就诊并行手术切除的肝癌患者肿瘤组织标本30例，并以相应癌旁正常组织（距离肿瘤组织>5 cm）为参照。所有患者在手术前或手术后均未进行化疗或放疗。30例肝癌患者中，男性17例，女性13例;年龄50～65岁，平均年龄（54.23±4.37）岁;其中8例无淋巴结转移，22例发生淋巴结转移。本研获得患者同意并获得研究所研究伦理委员会的批准。

1.2纳入及排除标准   纳入标准：①心、肺功能基本正常;②预计生存期>3个月;③经临床和病理学检查为原发性肝癌。排除标准：①合并其他部位肿瘤;②不稳定的系统性疾病;③未控制的感染。

1.3主要试剂   UbcH10特异的兔抗体抗体、免疫组化通用二抗试剂盒均购自武汉博士德生物技术有限公司;Harris苏木素购自中国北京中衫金桥公司;DAB显色液试剂盒、柠檬酸盐缓冲液均购自北京中杉金桥有限公司。

1.4方法  在取得组织样本后在液氮中快速冷冻，并在手术后于-80℃下储存以进行免疫组化分析。通过免疫组织化学检测肝癌组织中的UbcH10蛋白表达。免疫组化染色采用链霉卵白素-辣根过氧化物酶（sp）法。石蜡包埋，3 μm厚的组织切片，将切片脱石蜡并使用乙醇溶液脱水。终止内源过氧化物酶活性后在磷酸盐缓冲盐水（PBS）中漂洗后，在柠檬酸盐缓冲液（pH 6.0）中处理，然后将切片在室温下冷却。第一抗体是对UbcH10特异的兔抗体（1∶15，Atlas Antibodies，Sigma-Aldrich，USA）。将切片与一抗孵育过夜4℃，然后使用二抗，用二氨基联苯胺显示结果。实验结果通过显微镜计数阳性细胞百分比判定，在光学显微镜下每张切片随机连续计数5个视野（×400）内阳性细胞个数。具体判断标准：组织完全不着色或阳性细胞数不足5%为阴性（-）;组织阳性细胞数为5%～25%为阳性（+）;阳性细胞数>25%～50%为中阳性（++）;阳性细胞数占50%以上为强阳性（+++），视为UbcH10高表达。

1.5统计学方法  采用SPSS 13.0统计学软件进行数据分析。计量资料以（x±s）表示，采用t检验;计数资料以[n（%）]表示，采用？字2检验。以P<0.05表示差异有统计学意义。

2结果

2.1肝癌组织中UbcH10的表达  有93.33%（28/30）的肝癌组织中显示UbcH10表达，仅有6.67%（2/30）的正常肝组织显示UbcH10表达，肝癌组织中UbcH10表达高于癌旁正常肝组织，差异有统计学意义（P<0.05）;其中高分化肝癌组织UbcH10表达低于低分化肝癌组织，差异有统计学意义（P<0.05），见图1。

2.2肝癌UbcH10表达与临床病理特征关系  不同年龄、性别患者中UbcH10表达比较，差异无统计学意义（P>0.05）;不同肿瘤大小、组织学分化程度、淋巴结是否转移患者中UbcH10表达比较，差异有统计学意义（P<0.05），见表1。

3讨论

癌症的发生发展是一个由多种基因参与的、多步骤、多阶段的病理过程。其中可能涉及多种原癌基因的异常激活，抑癌基因作用减弱或者失活。这些病理改变可能使正常细胞的增殖失控，最终导致细胞癌变。肝癌做为一种常见的恶性肿瘤，原发性肝癌的病因及确切分子机制尚不完全清楚，目前认为其发病是多因素的复杂过程，受环境和饮食双重因素影响。早期肝癌常症状无特异性，中晚期肝癌的症状则较多，常见的临床表现为肝区疼痛、纳差、腹胀、消瘦，乏力、进行性肝大或上腹部包块等;部分患者有低热、腹泻、黄疸、上消化道出血;且肝癌破裂后出现急腹症表现等，也有症状不明显或仅表现为转移灶的症状。肿瘤标志物指在肿瘤发生和增殖过程中，由肿瘤细胞生物合成、释放或者是宿主对癌类反应性的一类物质。

白酶体系统（UPS），介导泛素-蛋细胞内泛素化的蛋白质经蛋白酶体降解，是调节细胞内蛋白稳态的重要途径。当泛素-蛋白酶体通路对肿瘤相关因子的降解功能发生异常时，可能引起癌基因蛋白异常增高、抑癌基因蛋白异常降解、肿瘤细胞凋亡通路受抑制或增殖活化，而参与肿瘤的发生发展。UbcH10作为泛素结合酶家族的成员，参与细胞周期关键调节分子的泛素依赖性蛋白水解过程，被认为是癌症进展中的关键因素。韩少山等[4]研究表明，UbcH10的高表达与肝癌的恶性临床病理特征相关，其可能成为潜在的分子标注或治疗靶点。UbcH10过度表达可引起肿瘤细胞多种指标的改变[5，6]，抑制其表达可降低癌细胞的恶性程度。多项研究表明，UbcH10在乳腺癌[7]、卵巢癌[8]、淋巴瘤[9]、胃癌[10]、胰腺导管癌[11]、脑胶质瘤[12]、结肠癌[13]等多种肿瘤中呈高表达并且与肿瘤分期呈正相关，提示不良预后[14-16]。

本研究结果显示，有93.33%（28/30）的肝癌组织中显示UbcH10表达，仅有6.67%（2/30）的正常肝组织显示UbcH10表达，肝癌组织中UbcH10表达高于癌旁正常肝组织，差异有统计学意义（P<0.05）;其中高分化肝癌组织UbcH10表达低于低分化肝癌组织，差异有统计学意义（P<0.05）。不同年龄、性别患者中UbcH10表达比较，差异无统计学意义（P>0.05）;不同肿瘤大小、组织学分化程度、淋巴结是否转移患者中UbcH10表达比较，差异有统计学意义（P<0.05）。说明肝癌组织中存在UbcH10过度表达，可能与肿瘤发生发展过程密切相关。另有研究表明[17]，干扰UbcH10基因表达可显著抑制多发性骨髓瘤细胞的增殖活性并增加细胞凋亡。Treffers EE等[18]研究表明，UbcH10基因过表达小鼠在接触致癌药物后有更高的癌症发病率，并且UbcH10基因过表达小鼠在生长过程有自然形成肿瘤的倾向。

综上所述，UbcH10在肝癌患者肝组织中过度表达，并与肿瘤大小、分化程度及淋巴结转移相关。UbcH10可作为肝癌患者肿瘤治疗的预后标志物和潜在分子靶点。

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收稿日期：2019-3-26;修回日期：2019-4-30

編辑/杜帆