两种检测系统测定血清肌红蛋白、肌酸激酶同工酶-MB及心肌肌钙蛋白I的比较实验研究

田刚　丁俊杰　刘靳波　吴堂明　李光荣

【摘要】 目的：探讨两种检测系统测定血清肌红蛋白（Myo）、肌酸激酶同工酶-MB（CK-MB）及心肌肌钙蛋白I（cTnI）结果的可比性。方法：依据美国临床实验室标准化协会（CLSI）EP9-A3文件，收集西南医科大学附属医院临床血清样品50例，采用西门子化学发光仪（ADVIA Centaur? XP）和三联生物微阵列化学发光仪（SLXP-002）同时测定血清中Myo、CK-MB和cTnI的浓度并进行统计学分析。结果：两种检测系统测定血清Myo、CK-MB和cTnI浓度的相关系数分别为0.980、0.997和0.984（P<0.05）。阳性符合率分别为93.3%、88.9%、100%，阴性符合率分别为97.2%、97.6%、97.5%。两种方法一致性检验的Kappa值分别为Myo（K=0.905，P=1.58×10-10），CK-MB（K=0.864，P=9.78×10-10）、cTnI（K=0.940，P=2.79×10-11）。Myo和CK-MB在医学决定水平5 ng/ml和72.0 ng/ml的偏倚分别为8.61%和8.14%。结论：三联生物微阵列化学发光法与西门子化学发光法测定血清Myo、CK-MB和cTnI的结果有较好的相关性和一致性，可用于临床血清Myo、CK-MB和cTnI的检测。

【关键词】 肌红蛋白; 肌酸激酶同工酶-MB; 心肌肌钙蛋白I; 评价研究

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2019.16.031 文献标识码 B 文章编号 1674-6805（2019）16-00-03

【Abstract】 Objective：To evaluate the comparability of two test systems for serum myoglobin（Myo），creatine kinase isoenzyme-MB（CK-MB） and cardiac troponin I（cTnI） detection.Method：A total of 50 serum samples from the Affiliated Hospital of the Southwest Medical University were collected according to the Clinical and Laboratory Standard Institute（CLSI） document EP9-A3，and measured both by the SIEMENS chemiluminescence analyzer（ADVIA Centaur? XP） and the Sanlant micro-array chemiluminescence instrument.The test results of serum samples were analyzed with statistical tools.Result：There were significant relationship of these two test systems for serum Myo（r=0.980，P<0.05），CK-MB （r=0.997，P<0.05） and cTnI（r=0.984，P<0.05） concentrations.The positive coincidence rate of these two test systems were 93.3%，88.9%，and 100%，and the negative coincidence rate were 97.2%，97.6%，and 97.5%，respectively.The Kappa analysis revealed a significant consistency of the two methods for serum Myo（K=0.905，P=1.58×10-10），CK-MB （K=0.864，P=9.78×10-10） and cTnI （K=0.940，P=2.79×10-11） detection，respectively.The bias of Myo and CK-MB were 8.61% and 8.14% at the medical determination levels of 5.0 ng/ml and 72.0 ng/ml in serum.Conclusion：Serum Myo，CK-MB and cTnI concentrations detected by the Sanlant micro-array chemiluminescence instrument showed a good correlation and consistency with the SIEMENS chemiluminescence analyzer.The Sanlant micro-array chemiluminescence instrument is suitable for serum Myo，CK-MB and cTnI measurement.

【Key words】 Myoglobin; Creatine kinase isoenzyme-MB; Cardiac troponin I; Evaluation study

First-authors address：The Affiliated Hospital of Southwest Medical University，Luzhou 646000，China

急性心肌梗死（acute myocardial infarction，AMI）是冠狀动脉病变后血供急剧减少或中断，心肌严重、持久缺血导致的急性心肌坏死[1]。AMI严重威胁患者生命，早期诊断、及时治疗是降低患者死亡率和改善预后的关键[2]。肌红蛋白（myoglobin，Myo）、肌酸激酶同工酶-MB（creatine kinase isoenzyme，CK-MB）和心肌肌钙蛋白I/T（cardiac troponin I/T，cTnI/cTnT）是临床常用的心肌损伤标志物，在AMI的临床诊断、疗效评估和并发症的鉴别诊断中具有重要作用[3-4]。目前，临床检测血清Myo、CK-MB、cTnI和cTnT多采用进口仪器和配套试剂，成本均较高。为积极响应国家对国产仪器的研发、转化与应用，扩大国产科学仪器的市场占有率[5]。本研究以西门子化学发光检测系统为参照，首次评估三联生物微阵列化学发光免疫分析系统和西门子化学发光检测系统测定血清Myo、CK-MB和cTnI的准确性和一致性，为国产仪器、试剂和新方法的临床应用提供实验依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集笔者所在医院2018年3月临床血清样本共50份。在检测系统室内质控在控下，依据美国临床实验室标准化协会（Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI）EP9-A3文件的要求[6]，采用待评估系统和参比系统同时测定血清Myo、CK-MB和cTnI水平。本研究均采用患者检测后剩余血清，仅用于结果比较，对患者无任何损害和潜在风险。因此，本研究参照“体外诊断试剂临床研究技术指导原则”中“客观上不可能获得受试者的知情同意或该临床研究对受试者几乎没有风险，可不提交伦理委员会的审评意见及受试者的知情同意书”进行[7-8]。

1.2 方法

1.2.1 仪器与试剂 采用西门子ADVIA Centaur? XP化学发光检测系统及其配套试剂为参比系统，江苏三联生物全自动生物芯片分析仪（微阵列化学发光免疫分析法）及配套试剂为待评估系统。

1.2.2 检测方法 分别采用两套系统对50份血清样本进行检测和数据分析。

1.3 统计学处理

采用SPSS 17.0软件对数据进行分析，由于两类仪器的测定原理不完全相同，采用Pearson相关性分析数据，若相关系数r≥0.975（r2≥0.95）且P<0.05，认为两种方法相关性良好[9]。采用字2检验计算两类方法的一致性，若Kappa系数（K）>0.75，认为两类方法的一致性较好。西门子检测系统测定血清CK-MB、Myo和cTnI浓度的临界值（cutoff值）分别为5.0 ng/ml、72.0 ng/ml和0.06 ng/ml。

2 结果

2.1 相关性和回归分析

以参比系统为x，待评估系统为y，进行回归分析。血清Myo的回归方程为y=0.962x-3.467（r=0.980，P<0.05）;血清CK-MB的回归方程为y=1.050x+0.157（r=0.997，P<0.05）;血清cTnI的回归方程为y=0.957x+0.110（r=0.984，P<0.05），均呈显著正相关，见图1～图3。

2.2 阳性和阴性符合率分析

以西门子化学发光法为参照，三联生物微阵列化学发光免疫分析法測定临床样本血清Myo、CK-MB和cTnI。在CK-MB、Myo和cTnI浓度的临界值分别为5 ng/ml，72.0 ng/ml和0.06 ng/ml时阳性符合率分别为93.3%、88.9%、100%，阴性符合率分别为97.2%、97.6%、97.5%。

2.3 两种检测系统测定血清Myo、CK-MB和cTnI结果的一致性

对以上数据进行字2检验并计算K值，两种检测系统一致性检验的K值分别为Myo（K=0.905，P=1.58×10-10），CK-MB （K=0.864，P=9.78×10-10） and cTnI （K=0.940，P=2.79×10-11），K均>0.75，两种方法的一致性良好。

2.4 两种检测系统测定血清Myo、CK-MB和cTnI医学决定水平处偏倚比较

将Myo和CK-MB在医学决定水平处的浓度72.0 ng/ml、5 ng/ml分别带入线性回归方程y=0.962x-3.467和y=1.050x+0.157，Myo和CK-MB在医学决定水平处的偏倚分别为8.61%和8.14%，均小于1/2允许总误差（15.0%）。由于西门子检测系统测定超敏cTnI而三联生物测定cTnI，故未比较cTnI医学决定水平的偏倚。

3 讨论

血清Myo、CK-MB和cTnI是美国心脏病学会和欧洲心脏病学会推荐的AMI血清标志物[10]。Myo在AMI发作后约2 h开始增高，6～9 h达到高峰，24～36 h恢复至正常水平[11]。因此，若血清Myo水平在患者胸痛发作12 h内在仍正常，则可排除AMI。CK-MB是心肌能量的重要调节酶，在AMI后6～9 h，其诊断AMI的灵敏度高达97.0%[12]。cTnI在AMI发作4～10 h后开始增高，在12～48 h达到高峰，对AMI的诊断特异性高达100.0%[13]。本实验中三联生物检测系统中Myo、CK-MB和cTnI定量检测试剂盒均采用微阵列化学发光免疫分析原理，以活化处理的硬基质玻片为芯片基质，通过特殊处理将单克隆抗体固定在基质玻片上捕获待测抗原，再加入辣根过氧化物酶标记抗体形成双抗夹心结构，最后加入发光检测液酶促化学发光。因此，该方法为酶促间接化学发光，具有检测方式简单，成本较低等优点。西门子ADVIA Centaur? XP则采用纳米超顺磁珠包被载体，利用吖啶酯标记抗体结合待测抗原形成复合物，该复合物在含H2O2和NaOH的强碱性环境下吖啶酯分解发光。该为直接化学发光法，灵敏度高，结果稳定。本研究结果表明，与西门子化学发光检测系统相比，三联生物微阵列化学发光免疫分析系统具有很高的一致性（K>0.75），阳性符合率均>88.0%，阴性符合率均>93.0%，且测定结果均显著正相关（r>0.975）。该结果表明，两种检测系统测定Myo和CK-MB有较好的相关性和一致性。三联生物微阵列化学发光免疫分析系统与西门子化学发光检测系统有较好的临床适用性，有助于AMI的早期诊断、治疗监测和预后评估。

由于两种系统检测原理不完全不同，西门子直接化学发光法灵敏高，能检测超敏cTnI而酶促间接化学发光法测定血清总cTnI。因此，本研究未采用CLSI EP9-A3文件对西门子血清cTnI医学决定水平处回归方程的偏倚进行评估。两种检测系统测定血清cTnI具有很好的相关性，阳性符合率和阴性符合率均较高。因此，若采用三联生物微阵列化学发光免疫分析系统对临床血清cTnI进行分析需建立正常人群的参考区间并获取该方法大样本血清cTnI的医学决定水平，以便于对AMI进行准确诊断、治疗药物监测和预后评估。

综上所述，三联生物微阵列化学发光免疫分析系统与西门子化学发光检测系统有较好的相关性、阳性符合率、阴性符合率和一致性，且仪器和试剂成本低，可用于临床血清Myo、CK-MB和cTnI的快速定量分析。

参考文献

[1]王吉耀.内科学[M].北京：人民卫生出版社，2005：283.

[2]魏腾飞，赵蓓，刘佩林，等.发病至首次医疗接触时间对急性ST段抬高型心肌梗死患者预后的影响[J].中华心血管病杂志，2017，45（5）：393-398.

[3] Fan J，Ma J，Xia N，et al.Clinical value of combined detection of CK-MB，MYO，cTnI and plasma NT-proBNP in Diagnosis of acute myocardial infarction[J].Clinical Laboratory，2017，63（3）：427-433.

[4]渠梦茹，张桐硕，房加雄，等.心肌损伤标志物单独及联合检测在急性心肌梗死的诊断价值[J].武警后勤学院学报：医学版，2017，26（2）：32-36.

[5]赵珏.生物实验室常用进口和国产仪器性价比研究[J].实验技术与管理，2018，35（4）：235-238.

[6] Clinical and Laboratory Standards Institute.Measurement Procedure Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples;Approved Guideline-Third Edition[S].Wayne，PA：CISI，2013.

[7]赵强元，刘敏，齐永志，等.体外诊断试剂临床试验免除知情同意的伦理学探讨[J].国际检验医学杂志，2014，35（18）：2425-2426.

[8]王臣玉，杨丽萍，陈磊，等.两种降钙素原检测系统比较实验研究[J].现代检验医学杂志，2017，32（4）：143-144.

[9]徐建华，刘冬冬，黄宪章，等.新指南CLSI EP9-A3在方法学比对及偏移评估中的应用[J].中华医学杂志，2015，95（12）：894-897.

[10] Van de Warf F，Bax J，Betriu A，et al.Management of acute myocardial infarction in patients presenting with persistent ST-segment elevation：the task force on the management of ST-segment elevation acute myocardial infarction of the European society of cardiology[J].Eur Heart J，2008，29（23）：2909-2945.

[11]尹一兵，倪賠华，刘新光，等.临床生物化学检验技术[M].北京：人民卫生出版社，2016：237-238.

[12] Kakoti A，Goswami P.Heart type fatty acid binding protein：Structure，function and Biosensing applications for early detection of myocardial infarction[J].Biosens Bioelectron，2013，43（12）：400-411.

[13] Chin C T，Wang T Y，Li S，et al.Comparison of the prognostic value of peak creatine kinase-MB and troponin levels among patients with acute myocardial infarction：a report from the Acute Coronary Treatment and Intervention Outcomes Network registry-get with the guidelines[J].Clin Cardiol，2012，35（7）：424-429.

（收稿日期：2019-01-07） （本文编辑：郎序莹）