对不同免疫程序的开产蛋鸡禽流感免疫抗体水平的研究

刘婷婷 陈 婷 李凤玲 黄 鑫

（南京市畜牧兽医站，江苏南京 210012）

疫苗免疫接种是防控禽流感的主要措施和手段，现阶段用于预防禽流感的疫苗主要是重组禽流感病毒（H5+H7）灭活疫苗，本研究主要是围绕H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re1株二价灭活苗开展的。通过对比不同蛋鸡场的免疫程序对开产蛋鸡鸡群免疫抗体水平的影响，为产蛋鸡制定合理的免疫方案提供科学的依据。

1 研究材料与方法

1.1 试验鸡群

选择规模蛋鸡场的开产蛋鸡鸡群为研究对象，对不同免疫程序的蛋鸡场开展禽流感相关免疫抗体的监测。

1.2 试验疫苗

疫苗种类为重组禽流感病毒二价（H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re1株）灭活疫苗，生产厂家为乾元浩生物股份有限公司郑州生物药厂和青岛易邦生物工程有限公司。

1.3 试剂

禽流感病毒H5亚型Re-8株病毒血凝抑制试验抗原（批号2018005）、禽流感病毒H7亚型病毒血凝抑制试验抗原（批号2018006）、阴性血清和阳性血清，均购自哈尔滨维科生物技术开发公司。

1.4 1%红细胞悬液的配置

采集3只SPF公鸡的血液与等体积的阿氏液混合，用pH7.2、0.01mol/L PBS液洗涤3次，每次均以1000r/min离心10min，洗涤后用PBS配成体积分数为1%红细胞悬液，4℃保存。

1.5 鸡群筛选

采样前对规模蛋鸡场的免疫情况进行摸底调查，了解开产前的禽流感疫苗免疫情况、开产后的免疫程序、疫苗种类、生产厂家、接种剂量、注射部位及日常抗体监测报告等，选取其中禽流感疫苗免疫程序符合研究要求的12个规模蛋鸡场。

1.6 血清样本的采集

对符合研究条件的12家规模蛋鸡场分别在它们的免疫间隔时间临近期满时，进行开产蛋鸡鸡群的随机采样，每场采集20份，共240份血样，备以进行H5N1Re-8和H7N9免疫抗体水平的检测。

1.7 检测方法

血凝抑制试验使用一次性96孔V型微量反应板，检测方法按照国家标准《高致病性禽流感诊断技术》（GB/T18936-2003）进行。检测项目为H5N1Re-8抗体和H7N9抗体，检测过程中分别设阳性对照、阴性对照，并对配置的4单位病毒进行回归试验。结果判定标准按照≥4log2为合格。

2 研究内容和结果

2.1 不同免疫免疫间隔时间对禽流感免疫抗体水平的影响

选择使用乾元浩（郑州）疫苗但是免疫间隔时间各不相同的5家规模蛋鸡场，分别在它们的免疫间隔时间临近期满时对它们的开产蛋鸡鸡群开展随机抽样，然后进行H5N1Re-8和H7N9免疫抗体水平检测，结果如表1；选择使用青岛易邦疫苗但是免疫间隔时间各不相同的5家规模蛋鸡场，分别在它们的免疫间隔时间临近期满时对它们的开产蛋鸡鸡群开展随机抽样，然后进行H5N1Re-8和H7N9免疫抗体水平检测，结果如表2。

表1 乾元浩（郑州）疫苗不同间隔时间免疫抗体水平的变化

表2 青岛易邦疫苗不同间隔时间免疫抗体水平的变化

2.2 不同疫苗厂家对禽流感免疫抗体水平的影响

选择使用乾元浩（郑州）疫苗和青岛易邦疫苗的规模蛋鸡场各5家，对同一免疫间隔时间、相同免疫剂量（肌注0.5ml）的开产蛋鸡鸡群的H5N1Re-8和H7N9免疫抗体水平逐一进行对比，比对结果见表3。

2.3 不同剂量对禽流感免疫抗体水平的影响

选择使用乾元浩（郑州）疫苗但是免疫剂量不同的3个规模蛋鸡场的开产蛋鸡鸡群，在免疫间隔时间相同的前提下，对比它们的H5N1Re-8和H7N9免疫抗体水平，比对结果见表4。

表3 不同疫苗相同免疫间隔时间免疫抗体水平的对比

表4 同一种疫苗相同免疫间隔时间不同免疫剂量抗体水平的变化

3 结果分析

3.1 不同免疫间隔时间对禽流感免疫抗体水平的影响分析

由表1和表2可见，使用同一厂家的疫苗，不同的免疫间隔时间对H5N1Re-8和H7N9免疫抗体水平有较大的影响。免疫间隔达到4个月的时候，免疫抗体水平的范围和均值都开始呈现明显的下降趋势，当免疫间隔时间达到6个月的时候，H5N1Re-8和H7N9免疫抗体水平已降低到不能为鸡群提供良好的免疫保护。由此可见，开产蛋鸡的禽流感免疫间隔时间最好控制在3～4个月之间，即可以控制规模蛋鸡场的免疫成本，又可以保障开产蛋鸡鸡群可以一直维持较高的免疫抗体水平。

3.2 不同疫苗厂家对禽流感免疫抗体水平的影响分析

采样监测的规模蛋鸡场最常用的禽流感疫苗主要有乾元浩（郑州）和青岛易邦两个疫苗生产厂家。由表3可见，通过对比免疫间隔时间为40d、2个月、3个月、4个月和6个月的H5N1Re-8和H7N9免疫抗体水平，两个不同生产厂家的禽流感疫苗对免疫抗体水平的影响并不显著。

3.3 不同剂量对禽流感免疫抗体水平的影响分析

本研究还选取了3个使用乾元浩（郑州）疫苗的规模蛋鸡场，进行了不同免疫剂量对H5N1Re-8和H7N9免疫抗体水平的影响的研究。由表4可见，在免疫间隔时间相同的情况下，说明书要求的0.5ml/羽的免疫剂量足以给鸡群提供良好的免疫保护，增加免疫剂量并不能明显提高免疫效果，甚至可能因为产生免疫抑制而导致免疫抗体水平有所下降。从实际生产考虑，0.5ml的免疫剂量即经济又可以保障免疫效果，不需要额外增加免疫剂量。