留兰香质量标准探讨*

万红才，徐作刚，刘晓艳，段 萍，罗洪莲，曾 琦，安 军

（贵州省黔南州食品药品检验所，贵州 都匀 558000）

留兰香Mentha spicataL.为唇形科植物，全草入药，夏、秋二季采收，除去杂质，鲜用或阴干；气芳香，味辛凉[1]，功能疏风清热、解表和中、里气止痛，用于感冒头痛、胃痛、咳嗽、腹胀、吐泻、痛经、肢麻、跌扑肿痛。目前对民族药材留兰香的质量控制仅有性状描述[2]。本研究中建立了其叶含量、水分、总灰分、酸不溶性灰分及挥发油含量测定等相关检测项目，以保证该民族药材的药用安全性、有效性和可靠性，同时也为下一步的开发研究提供参考。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

DM-2500型生物显微镜，莱卡Las-v3.8型显微照相系统（德国莱卡公司）；SK250LHC型超声波清洗器（上海科导仪器有限公司）；AG135型电子天平（梅特勒托利多）；挥发油测定器；水分测定管及配套玻璃仪器；水浴锅及常规实验器材。

1.2 试药

香芹酮对照品（中国食品药品检定研究院，批号为C11052000，含量为98.2%）；样品采集于都匀翁奎（编号为 201701，201707，201708）、都匀大坪东冲（编号为201703）、都匀剑江河（编号为 201702）、开阳毛云（编号为 201706）、威宁草海（编号为 201704）、遵义桐梓（编号为201705）等贵州各地，经贵州省食品药品检验所李扬主任药师鉴定为正品；硅胶G预制板（批号为20110712）、硅胶G板（批号为0110916）均由青岛海洋化工有限公司生产；有机试剂及其他化学试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 显微鉴别

市场上留兰香伪品时有发现，采用显微鉴别能对伪品作初步判定[3-4]。对3个不同采集地点的留兰香进行显微鉴别，其显微鉴别特征见图1。本品叶表面观：上表面腺鳞圆形或椭圆形，头部8细胞，直径约至100 μm，小腺毛长 20～30 μm，直径约 10 μm，头部及柄部均为单细胞；下表面非腺毛3～15个细胞，长30～150 μm，直径约30 μm，常弯曲，微具疣突；气孔多见，直轴式。

图1 显微鉴别图

2.2 薄层色谱鉴别

溶液制备：分别称取留兰香药材细粉3.0 g，优化提取方法，对提取溶剂、提取方法进行考察，最终以加乙醇30 mL，水浴回流30 min，滤过，取续滤液2 mL，作为供试品溶液。此方法操作简便，溶剂毒性小，耗时短，提取较完全。另取香芹酮对照品约10 mg，置100 mL容量瓶中，加乙醇溶解并稀释至刻度，作为对照品溶液。

展开系统考察：选用极性适当的溶剂，分别以正已烷 -乙酸乙酯 -甲酸（15∶8∶0.1，V∶V∶V）、石油醚 -乙酸乙酯 -甲酸（10∶1∶0.2，V∶V∶V）、石油醚 -乙酸乙酯 -甲酸（12∶8∶2，V∶V∶V）和正已烷 -乙酸乙酯 -甲酸（10∶1∶0.1，V∶V∶V）进行考察，根据色谱图分离效果，结合展开剂的毒性、主要斑点的Rf值及清晰度，选取后一种为展开系统。

点样量考察：取制备的供试品溶液 2，3，5，6，8，10 μL及对照品溶液10 μL，点于同一硅胶G薄层板上，以正已烷 -乙酸乙酯 -甲酸（10∶1∶0.1，V∶V∶V）为展开剂，展开，取出，晾干，喷5%香草醛硫酸溶液，105℃加热至斑点显色清晰。供试品溶液色谱中，点样量在5～10 μL时，所显主斑点均清晰，分离度好背景浅，故选取5～10 μL为点样体积。

耐用性考察：按国家药典委员会《中药分析方法验证指导原则实施细则》相关要求进行考察。温度考察了低温（4 ℃）、室温（24 ℃）、高温（40 ℃），相对湿度考察了低湿度（25% ）、中等湿度（50% ）和高湿度（75% ），薄层板分别选用硅胶G预制板（批号20110712）和硅胶G板（批号为0110916），结果均较好。

薄层色谱鉴别：按上述优化的方法分别制备各地采集样品的供试品溶液，取对照品溶液，照薄层色谱法（2015 年版《中国药典（四部）》通则 0502）试验。8 批留兰香样品色谱图中，在对照品色谱相应位置上均显相同颜色的斑点，详见图2。采用香芹酮对照品做主要成分鉴定，能把同科同属植物薄荷伪品作有效区别，是专属性强的有效方法之一[5]，弥补了显微鉴别法的局限性。

2.3 指标成分检查

叶含量：药材所含挥发油成分在全草植物体的不同部位（器官）中含量是不均衡的，叶中的含量要远高于其他部位（器官）；由于该药材在采收季节、加工、炮制、运输过程中，常因其叶在干燥后易脱落或碎裂而致其药材中所含叶量少而主要为茎根，使得药材和饮片中挥发油含量下降；为了保证药材的完整性，把叶含量作为控制药材质量指标之一；参照2015年版《中国药典（一部）》中薄荷药材检查方法[6]及2015年版《中国药典（四部）》通则0211药材和饮片的取样法[7]29取样，称定质量；把根茎和叶分离，称取叶的质量，计算即得。详见表1。

图2 薄层色谱图

表1 各成分含量测定结果（%）

水分：中药材含有过量的水分时，极易造成中药霉烂变质，使有效成分分解，且相对减少了实际用量而影响疗效，因此，控制中药中的水分含量对保证中药质量有密切关系；留兰香药材及饮片中主要含挥发性成分，水分测定按2015年版《中国药典（四部）》通则0832水分测定第四法测定[7]103。结果见表 1。

总灰分及酸不溶性灰分：测定灰分的目的是限制中药中无机杂质如泥土、沙石的含量，以保证中药的纯度，《中国药典》已将灰分测定作为一种常规检查，对大多数药材和饮片规定了限量检查指标[7]204。总灰分测定法用的供试品须粉碎，使能通过2号筛，混匀后，取供试品3～5 g，依法测定，根据残渣质量，计算供试品中总灰分的含量（%）。酸不溶性灰分测定根据残渣质量，计算供试品中酸不溶性灰分的含量（%）。结果见表1。

挥发油含量测定：按2015年版《中国药典（四部）》通则2204测定[7]203。测定的留兰香样品须粉碎，使能通过 2号至 3号筛，混匀，取供试品适量（150.00～200.00 g），置2 000 mL的硬质圆底烧瓶中，加水650～700 mL与玻璃珠数粒，保持微沸3 h，依法测定，读取挥发油量，并计算供试品中挥发油的含量（%），结合8批以上不同采集地点、时间来源样品的测定结果，确定含量的限度。详见表2。

表2 挥发油含量测定结果（%）

3 讨论

显微鉴别方法是通过对留兰香显微特征进行观察、测量所总结出的具有代表性的共性描述，可简便快速地对该药材进行初步判定。

薄层色谱鉴别法的建立试验中采用提取方法、点样量、展开系统及耐用性等能与相似药材薄荷区分开，可行性与专属性可作为该药材的质量控制方法之一。

因留兰香叶是含挥发油成分的主要器官，采用控制叶含量测定来控制该药材质量，保证了药材的完整性，同时提高了有效成分挥发油的含量，经测定8批留兰香药材含叶平均值为18.04%，按不低于平均值的80%制订标准。

留兰香药材中叶含量不得少于15.52%，再结合现行2015年版《中国药典》中对该类药材的限量要求和实际测定结果，建议留兰香药材叶含量不得少于14.00%。

由于留兰香含有挥发性成分，因此建立甲苯法测定其水分，经测定8批留兰香药材平均值为10.86%，建议留兰香药材水分不得超过15.00%。

该药材为全草入药，采收时可能会带入泥土、砂石，有建立总灰分及酸不溶性灰分检查的必要性，根据对8批留兰香药材样品的检测，总灰分平均值为7.89%，酸不溶灰分为1.34%，建议留兰香药材总灰分平均值为10.00%，酸不溶灰分为2.00%。

样品中挥发油含量的多少关系到药材的优劣，结果8批留兰香药材挥发油平均值为0.36%，按不低于平均值的80.00%制订标准，留兰香药材挥发油不得少于0.26%，建议留兰香药材挥发油含量不得少于0.25%（mL／g）。

此标准在原质量标准基础上增加显微鉴别、薄层色谱鉴别、各项检查及挥发油含量测定等方法，形成了一个较完整的质量评价体系，可进一步加强对该药材的质量控制，保障民众用药安全。