2018年河南省水生动物致病菌对抗菌药物的敏感性监测分析

(河南省水产技术推广站,郑州450008)

长期以来，由于我国没有开展水产养殖动物病原菌耐药性普查，没有掌握其对各种抗生素药物敏感性变化，导致养殖业者没有科学用药依据，水产品质量安全水平得不到有效保障，水产养殖绿色发展受到制约，因此，开展水产养殖动物病原菌耐药性普查刻不容缓。为了了解河南省内水产养殖动物病原菌耐药性状况，同时帮助执业兽医师（水生）科学选择和使用水产抗菌素类药物，2018年4～10月，从河南省人工养殖的黄河鲤和斑点叉尾鮰鱼体内分离致病菌，测定其对水产用抗菌素类药物的敏感性，现将结果报告如下：

1 材料与方法

1.1 供试药物

供试药物为硫氰酸红霉素、恩诺沙星、强力霉素、盐酸土霉素、磺胺嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺甲恶唑、盐酸环丙沙星、硫酸新霉素、磺胺二甲氧嘧啶、交沙霉素、甲砜霉素、氟苯尼考和氨苄西林钠。测试所用抗菌类药物样品为原料药，均由全国水产技术推广总站提供。

1.2 供试菌株

2018年4～10月，分别从河南省郑州市中牟县、荥阳市王村、洛阳市孟津县、新乡市延津县和开封市龙亭区等地池塘饲养的黄河鲤和斑点叉尾鮰体内，分离到66株菌株，包括5株维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)、5株嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)、2株温和气单胞菌(Aeromonas sobria)、1株简氏气单胞菌(Aeromonas jandaei)、7株不动杆菌(Acinetobacter spp.)、2株芽孢杆菌（Bacillus spp.）、5株其他杆菌、17株微球菌（Micrococcus spp.）、9株葡萄球菌（Staphylococcus spp.）和13株其他细菌。

1.3 供试菌株最小抑菌浓度的测定

将供试药物采用适宜的溶媒溶解后，用灭菌生理盐水分别稀释至所需浓度。在无菌条件下，取96孔板，在第1～12孔分别加入100 μL的MH液体培养基，取100 μL的药物原液加入第一孔中，混匀后吸取100 μL加入第二孔，混匀后吸取100 μL至第3孔，以此方法稀释至第11孔，吸取100 μL弃掉。分别在1～10孔、12孔加入100 μL浓度约为1.2*106cfu/mL的活菌液，其中11孔为不加菌液对照，12孔为不加药物对照，每种药物做两个平行，置于28℃培养5 d，通过肉眼判定，无菌生长孔对应最低药物浓度，即为药物的最小抑菌浓度 (minimum inhibitory concentration，MIC)。

2 结果

2.1 气单胞菌对抗菌药物的感受性

13株气单胞菌包括5株维氏气单胞菌、5株嗜水气单胞菌、2株温和气单胞菌和1株简氏气单胞菌，对各种抗菌药物感受性如表1所示。由表1可以看出，气单胞菌对磺胺甲恶唑、磺胺二甲氧嘧啶、甲砜霉素、氟苯尼考相对敏感，对磺胺嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、硫酸新霉素敏感性相对较低。

表1 气单胞菌对各种抗菌药物的感受性

2.2 1杆菌对抗菌药物的感受性

14株杆菌包括7株不动杆菌、2株芽孢杆菌和5株其他杆菌（放线杆菌、节杆菌、金黄杆菌、鞘脂杆菌、微小杆菌），对各种抗菌药物感受性如表2所示。由表2可以看出，所分离的杆菌对恩诺沙星、盐酸土霉素、磺胺甲恶唑、磺胺二甲氧嘧啶相对敏感，对强力霉素、硫酸新霉素、甲砜霉素、磺胺嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶敏感性相对较低。

表2 杆菌对各种抗菌药物的感受性

2.3 微球菌对各种抗菌药物的感受性

17株微球菌对抗菌药物的感受性见表3。由表3可以看出，所分离出的球菌对恩诺沙星、盐酸土霉素、磺胺甲恶唑、磺胺二甲氧嘧啶相对敏感，对强力霉素、磺胺嘧啶、硫酸新霉素、甲砜霉素敏感性相对较低。

表3 微球菌对抗菌药物的感受性

2.4 葡萄球菌对各种抗菌药物的感受性

9株葡萄球菌对抗菌药物的感受性见表4。由表4可以看出，所分离出的球菌对恩诺沙星、磺胺甲恶唑、盐酸环丙沙星、磺胺二甲氧嘧啶，交沙霉素相对敏感，对硫氰酸红霉素、磺胺甲氧嘧啶、磺胺嘧啶、强力霉素、硫酸新霉素敏感性相对较低。

表4 葡萄球菌对抗菌药物的感受性

2.5 其他

在试验过程中还分离到13株其他细菌，对抗菌药物的感受性如表5所示。由图5可以看出，分离出的其它细菌对恩诺沙星、磺胺甲恶唑、磺胺二甲氧嘧啶相对敏感，对强力霉素、磺胺间甲氧嘧啶、硫铵新霉素敏感性相对较低。

表5 13株其他细菌对抗菌药物的感受性

3 分析与建议

3.1 关于水生动物致病菌药物感受性的分析

本次分离到的13株气单胞菌，对磺胺甲恶唑、磺胺二甲氧嘧啶、氟苯尼考、甲砜霉素MIC50在0.78～3.12 mg/L之间，在所测试的抗菌药物中，为最敏感的药物；对强力霉素、磺胺嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、硫酸新霉素、氨苄西林钠MIC50均在100 mg/L以上，为最不敏感性药物；对交沙霉素、恩诺沙星的MIC50在6.25～12.5 mg/L之间；对硫氰酸红素、盐酸土霉素、盐酸环丙沙星敏感度相似，与交沙霉素、恩诺沙星相比更为不敏感。其他菌株对各种抗菌药物的感受性与气单胞菌具有相似的结果，对强力霉素、磺胺嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、硫酸新霉素等最不敏感，对磺胺甲恶唑、磺胺二甲氧嘧啶、氟苯尼考等最为敏感。

3.2 关于目前选择用药的建议

目前的检测结果表明，养殖户在选择用药时，磺胺甲恶唑、磺胺二甲氧嘧啶、氟苯尼考等为首选抗菌药物，甲砜霉素、交沙霉素、恩诺沙星可以考虑选用，尽量不要选择强力霉素、磺胺嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、硫酸新霉素等药物。在生产实际中，对于养殖业者，一旦发生鱼病，最正确的给药方式是采集患病鱼类的致病菌，开展药物敏感性试验，确定最佳的用药品种和剂量。