湛江地区478例儿童地中海贫血基因检测及结果分析

庞伟鸿 陈晓煜 叶晓云 李 艳 陈亚珍

广东省湛江中心人民医院，广东湛江 524045

地中海贫血是一种珠蛋白链合成比例失衡的单基因遗传病，据受损珠蛋白的不同可分为α-地中海贫血和β-地中海贫血两大类，均呈常染色体隐性遗传。α-地中海贫血主要由发生于16 号染色体短臂末端α-珠蛋白基因簇内包含α 基因在内的缺失引起，少数由点突变引起，β-地中海贫血主要由发生于位于11 号染色体短臂的β 基因内的点突变引起[1-2]。其临床症状差异较大，轻者与常人无异，重者会出现胎儿水肿或夭折现象，有些患者需要终生输血来维持生活，给家庭社会带来沉重的负担[3]。湛江本就属于地中海贫血高发地区，但是自2003 年10 月1 日国家婚姻法确定取消了强制婚前检查（包括了地中海贫血检查）开始，使得一部分夫妇取消了婚检甚至产检，造成婴儿出生缺陷率上升，为下一代的健康埋下了隐患。因此对该地区中可能携带地中海贫血基因儿童进行筛查，运用先进的PCR+膜技术进行地中海贫血基因检测，并统计该地区儿童地中海贫血多发基因类型和其发生率，可有效地减少育龄夫妇因携带同型地中海贫血基因而可能生出中、重型地中海贫血患儿的机率。

1 资料与方法

1.1 一般资料

从2015 年1 月～2017 年12 月在湛江中心人民医院门诊和住院部就诊的疑诊地中海贫血儿童共478 例，其中男251 例，女227 例，年龄3 ～12 岁，平均（7.5±1.4）岁。

1.2 方法

1.2.1 标本采集 采用无菌抗凝管（EDTA 抗凝管），抽取静脉血2mL 混匀，样本采集后应立即送检。4℃保存不超过3d，-20℃保存不超过3 个月进行检测。标本运送时建议采用低温保存运送。

1.2.2 αβ 地中海贫血基因检测 取待检血液200μL，具体操作步骤严格按照作业书规程进行。观察膜条上出现的蓝色斑点显色来判定结果，该检测用于中国人常见的3 种α 缺失型地中海贫血（-SEA、-α3.7和-α4.2），2 种α 突变型地中海贫血（CS、QS）及11 种β 突变型地中海贫血（CD41-42、CD43、IVS-Ⅱ-654、CD17、CD14-15、-28、-29、CD71-72、βE、IVS Ⅰ-1、CD27-28）。若在突变或缺失检测探针处出现显色强度与相应的正常对照探针相近的蓝紫色斑点，则该位点为地中海贫血突变或缺失的杂合子。

2 结果

2.1 本组478例检测者检测结果

经过基因检测确诊为地中海贫血280 例，其中α-地中海贫血159 例，β-地中海贫血107 例，α-地中海贫血复合β-地中海贫血14 例，还发现一例有巴氏综合征（胎儿水肿）。其中α-地中海贫血以东南亚型缺失的α-地中海贫血为主，数量达111 例（23.22%），其次是3.7 杂合缺失的α-地中海贫血数量为36 例（7.52%）。β-地中海贫血以41-42 位点纯合突变的β-地中海贫血为主，数量为45 例（9.41%），其次是654 位点杂合突变的β-地中海贫血为31 例（6.48%）。见表1。

2.2 α-地中海贫血基因检测结果

159 例α-地中海贫血共检测出185 个含有6种常见α-地中海贫血等位基因，携带率、频率和分布情况，见表2。

表1 478例检测者检测结果

2.3 β-地中海贫血基因检测结果

107 例β-地中海贫血共检测出115 个含有10 种常见等位基因，携带率、频率和分布情况，见表3。

表2 α-地中海贫血基因检测结果

表3 β-地中海贫血基因检测结果

3 讨论

流行病学资料显示，地中海贫血广泛流行于地中海沿岸、东南亚及我国南方地区，其发生率、基因突变类型和频率存在明显的种族地域及人群差异。基因是由珠蛋白链的分子结构及合成来决定的，若正常人父母双方各继承2 个α 珠蛋白基因（αα/αα）合成足够的α 珠蛋白链；自父母双方各继承1 个β 珠蛋白基因合成足够的β 珠蛋白链。因珠蛋白基因的缺失或突变，肽链合成障碍致使发病，β 及α 在地中海贫血中是常见的类型。地中海贫血的检测方法包括地中海贫血的初筛试验和基因确诊，前者主要有平均红细胞体积MCV、平均红细胞血红蛋白含量MCH 和红细胞脆性试验及血红蛋白电泳，可以初步诊断地中海贫血[4-5]；而后者则依靠地中海贫血基因的分子生物学诊断。本研究中的478 例检测者已有302 例经初步怀疑是地中海贫血，在进行地中海贫血基因检测后有280 例确诊为地中海贫血，发生率为58.57%。其中α-地中海贫血159 例，占33.26%，β-地中海贫血107例，占22.38%。α-地中海贫血复合β-地中海贫血14 例，占2.93%；与贺钰等报道的检测结果[3]相符。由于中型和重型的α 或β 地中海贫血均为致死性或致残性血液病，目前尚无理想的治愈方法，因此，通过大规模人群的遗传筛查、基因分型检测、遗传咨询和产前诊断，避免受累胎儿的出生是最佳选择[6-8]。

从本地区儿童地中海贫血发生情况来看，结果依然不容乐观。自2003 年国家取消强制婚前检查，我国出生缺陷发生率有所上升[9-11]。相关数据显示[12-13]：地中海贫血发生率没有得到改善反而有所上升。此外，还发现14 例αβ 复合型地中海贫血，1 例巴氏综合征（胎儿水肿）。由于αβ 复合型地中海贫血的血红蛋白电泳表现不典型，应同时进行α 和β 地中海贫血基因检测，避免复合型地中海贫血的漏诊。

159 例α-地中海贫血共检测出185 个α-地中海贫血等位基因，携带率为38.70%，以-SEA 基因为最多111 个，携带率为23.22%，构成比占60.00%。其次是-α3.7 和-α4.2 构成比分别为19.47%、9.73%；此结果与同类研究结果吻合[14]。107 例β-地中海贫血患者共检测出115 个β-地中海贫血患者等位基因，携带率为24.06%，其中β41-42 基因45 例，携带率为9.41%，构成比占39.13%。其次是β654和β17 构成比分别为26.96%、9.56%。此结果与文献报道[15]的相符。地中海贫血基因同型携带者婚配的下一代有1/4 的机会患重症地中海贫血[16]。因此，监测本地区人群中地中海贫血患者的基因类型和频率，对减少地中海贫血的危害，提高本地区的人口素质具有重要的意义。

总而言之，基因检测技术可精准的检测出儿童地中海贫血的类型，初步了解了湛江地区儿童地中海贫血的基因突变普，为地中海贫血的诊断提供了科学的依据，更是促进了湛江地区地中海贫血的防治工作，对提高湛江地区得到人口质量有着重大的经济和社会效益。