橡胶树枯萎病病原菌室内毒力测定

彭 昀，肖宇明，刘衍超，李增平，王 萌，梁晓宇，张 宇

(海南大学 植物保护学院，海口 570228)

橡胶树(Heveabrasiliensis)生产的乳胶是我国重要的战略资源，随着橡胶树种植年代增加及周边生态环境变化，一些新的病虫害逐渐显现出来[1]。2017年在对海南省琼中加钗农场橡胶树的病情调查中发现尖孢镰刀菌(Fusariumoxysporum)引起了橡胶树枯萎病。该病导致橡胶幼树顶梢自上而下回枯变褐，呈现“半边死”症状。枯死枝条茎干木质部髓心变褐，木质部横切面有零散分布的蓝变症状。有的幼树基部茎干一侧的树皮爆裂溢胶，溢胶凝固变黑，削去表皮，韧皮部组织变黄褐色至黑褐色，木质组织有变黑褐色的纵向条纹。为预防这种橡胶树新病害的潜在威胁，笔者对橡胶树枯萎病进行室内药剂筛选，采用生长速率法测定了4种常用杀菌剂对该病原菌进行毒力测定[2]，并选择2种防效显著的药剂进行复配研究[3]，旨在为该病害防治提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料供试菌种:供试尖孢镰刀菌(Fusariumoxysporum)分离于海南省琼中加钗农场热研7-33-97橡胶树幼树枝条。供试药剂:97.3 %咪鲜胺(prochloraz)原药购自江苏辉丰农化股份有限公司；97 %异菌脲(iprodione)原药购自江苏快达农化股份有限公司；96 %百菌清(chlorothalonil)原药购自山东青岛奥迪斯生物科技有限公司；96%吡唑醚菌酯(pyraclostrobin)购自海南正业中农高科股份有限公司；97.2 %多菌灵(carbendazim)原药购自江苏省太仓市农药厂；99 %水杨羟肟酸(SHAM)购自上海麦克林生化科技有限公司。将各原药配成10 000 mg·L-1的母液，4 ℃保存。 供试培养基:PDA(马铃薯葡萄糖琼脂)培养基：马铃薯200 g，葡萄糖15 g，琼脂粉15 g，蒸馏水1 000 mL，灭菌备用。

1.2 方法

1.2.1 含药平板的制备分别取各药剂母液加入到定量的PDA培养基中摇晃混匀，使培养基含咪鲜胺的浓度为 0，0.1，0.5，1，5，10 mg·L-1，含百菌清的浓度为 0，1，2，4，8，16 mg·L-1，含吡唑嘧菌酯的浓度为 0，0.1，0.5，1，5，10 mg·L-1(为降低旁路呼吸途径对药剂的影响, 供试培养基中加入终浓度为100 mg·L-1的水杨羟肟酸[4])，含多菌灵的浓度为 0，0.1，0.5，1，5，10 mg·L-1。将含药培养基倒入灭菌的培养皿中，每皿 20 mL，每个处理设置3个重复。

1.2.2 处理方式取制作好的含药平板，空白对照为不加药剂的PDA平板。使用5 mm打孔器在PDA培养基上28 ℃培养2 d的病原菌菌落边缘取菌碟，分别接于处理培养基平板的中心位置上[5]，每个处理做3个重复，放置于28 ℃生化培养箱内培养，于对照组菌落生长6～7 cm时，用十字交叉法测量菌落直径并记录[6]。

1.2.3 药剂复配选取2种药效作用较好的药剂进行复配，以EC50浓度按照不同比例配比，配比为1∶1，1∶3，1∶5，3∶1，5∶1。再在不同比例配比下设置5个浓度梯度，浓度稀释按照逐级稀释法稀释浓度，实验按照1.2.2和1.2.3中所述方法进行。

1.2.4 数据处理使用EXCEL2016，DPS7.05数据处理软件对所得的数据进行统计分析，得出各药剂的毒力回归方程、EC50和相关系数。

复配增效系数(SR)[7]计算方法如下：

式中：a，b分别代表2种农药的含量比例。根据增效系数(SR)作出2种药的联合作用评价：当SR>1.5 时，药剂混用时毒力大于各单剂单用时毒力的总和，表现为增效作用；当SR在 0.5～1.5 时，表现为相加作用；当SR<0.5时，药剂混用毒力低于各单剂的毒力总和，表现为拮抗作用[8]。

2 结果与分析

2.1 4种杀菌剂对橡胶树枯萎病病原菌的抑制效果4种杀菌剂对橡胶树枯萎病病原菌的抑制效果见表1。由表1可见，4种常见杀菌剂对尖孢镰刀菌丝的生长抑制效果为：咪鲜胺> 多菌灵>吡唑醚菌酯>百菌清。结果表明，麦角甾醇合成抑制剂类杀菌剂的咪鲜胺和有机杂环类(苯并咪唑类)杀菌剂的多菌灵对尖孢镰刀菌具有较高的抑制活性，故选择咪鲜胺和多菌灵作为单剂进行下一阶段的复配实验。

表1 供试4种杀菌剂对尖孢镰刀菌的抑制作用Tab.1 Toxicity of 4 fungicides on mycelium growth of Fusarium oxysporum

2.2 复配杀菌剂对橡胶树枯萎病病原菌的抑制效果复配杀菌剂对橡胶树枯萎病病原菌的抑制效果见表2，由表2可见，咪鲜胺和多菌灵1∶1，1∶3，1∶5，3∶1及5∶1复配条件下EC50值分别为0.96，0.71，0.17，0.87，1.01 mg·L-1，1∶5的复配效果最佳，5∶1的复配效果最差。

表2 复配药剂对菌丝的生长抑制结果Tab.2 Toxicity of fungicide mixture on mycelium growth of Fusarium oxysporum

咪鲜胺和多菌灵的复配增效系数见表3，由表3可见，咪鲜胺和多菌灵1∶1，1∶3，3∶1及5:1复配条件下增效系数分别为 0.92，1.37，0.92，0.77，均在0.5～1.5之间，2者药效作用为相加作用，无拮抗作用。咪鲜胺和多菌灵配比在1∶5时，SR值为6.01，表现为增效作用。

表3 咪鲜胺和多菌灵的复配增效系数Tab.3 The SR values of fungicide mixtures of carbendazim and prochloraz on mycelium growth of Fusarium oxysporum

3 讨 论

本研究对4种常见杀菌剂对橡胶树尖孢镰刀菌丝的生长抑制进行了测定，除百菌清外，咪鲜胺、多菌灵、吡唑醚菌酯抑制菌丝效果显著。其中麦角甾醇合成抑制剂类杀菌剂的咪鲜胺和有机杂环类(苯并咪唑)杀菌剂的多菌灵对橡胶树尖孢镰刀菌的抑菌效果尤为突出，故选择咪鲜胺和多菌灵进行复配实验，通过5种不同比例复配得出的抑菌效果来看，其中咪鲜胺：多菌灵为1∶5的复配效果最佳，表现为增效作用，并且EC50达到了0.17 mg·L-1，效果优于任何一种单剂。

综上所述，橡胶树枯萎病可由常用药剂进行防治，鉴于咪鲜胺与多菌灵的复配效果尤为突出，推荐在病害发生时采用，避免单一药剂的过度使用所导致病菌抗药性的增强。