颈骨康胶囊对神经根型颈椎病大鼠的影响

姚 彤， 吴春燕， 宁昶华， 杜帅帅， 王 荣， 曹永孝∗

（1.西安交通大学医学部基础医学院药理学系，陕西 西安710061；2. 西安医学院药学院，陕西 西安710021）

颈椎病是在椎间盘退行性改变的基础上受外力作用，使椎体及周围组织发生病理改变，从而压迫神经、血管，并引起相应的症状和体征［1-2］，以神经根型发病率最高，其主要特点是椎间盘退行性改变致使脊神经根受压，表现为颈肩背疼痛、肢体麻木、活动受限甚至瘫痪等［3-4］。在颈椎病非手术治疗方法中，西医常用非甾体类药物，但其不良反应较多，尤以胃肠道反应较为严重；在中医理论指导下，中药疗效理想，深受患者欢迎，以活血化瘀、通络止痛、散风除湿、益气补肾类药物为主［5-6］。其中，颈骨康胶囊是山西亚宝药业集团股份有限公司研制的中药复方制剂，由葛根、当归、杜仲、川芎、威灵仙、桂枝、独活、熟地黄组成，具有活血化瘀、散风止痛、舒经活络功效，主治因颈椎病所致的颈项强直、头晕目眩、肩背疼痛，临床治愈率78.5%，有效率97.1%［7］，但缺少系统药效学资料，故本实验研究颈骨康胶囊对神经根型颈椎病大鼠的影响。

1 材料

1.1 动物 SD 大鼠，体质量200～250 g，雌雄兼用，由西安交通大学医学部实验动物中心提供，动物许可证号SCXK（陕）2012-003，颗粒饲料、常水喂养。

1.2 试药 颈骨康胶囊（亚宝药业集团股份有限公司，批号170201）；颈复康颗粒（承德颈复康药业集团有限公司，批号710153）；布洛芬缓释胶囊（中美天津史克制药有限公司，批号17010347）；青霉素钠（华北制药股份有限公司，批号F6092101）。

1.3 仪器 Aesthesio 机械痛阈测定套件 （意大利Ugo Basile 公司）；Scientz-48 高通量组织研磨器（宁波新芝生物科技股份有限公司）；H1850R 台式高速冷冻离心机（长沙湘仪离心机仪器有限公司）；全波长酶标仪（美国热电公司）。

2 方法

2.1 模型建立［8］大鼠麻醉后消毒，铺巾，由第2 胸椎沿棘突向上作一约3 cm 切口，眼科剪分离皮下组织和肌肉，鼻剥离器剥离第6 颈椎至第1 胸椎棘突两侧肌肉，充分暴露椎板，眼科镊提起第2 胸椎棘突，同时用止血钳夹开第1 胸椎椎板，暴露脊髓，鼻剥离器将脊髓轻拨至右侧，显微外科镊将长约1.2 cm、直径约0.8 mm 的尼龙渔线由第1胸椎沿脊髓纵向轻轻插入至第6 颈椎，放置在左侧神经根处，伤口处撒少量青霉素钠粉末，逐层关闭伤口，缝合；假手术组大鼠除不放尼龙渔线外，其余操作同上。术后第5 天，按表1 标准进行步态评分［9-11］。

表1 大鼠步态评分标准

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2.2 分组与给药 将步态评分在2 ～3 分、未见脊髓压迫症状的大鼠随机分为假手术组、模型组、颈复康颗粒组（2.0 g／kg）、布洛芬缓释胶囊组（0.08 g／kg） 及颈骨康胶囊低、中、高剂量组（0.12、0.24、0.48 g／kg）。假手术组、模型组大鼠灌胃蒸馏水，其余各组大鼠灌胃相应药物，每天1 次，给药量10 mL／kg，连续14 d（所有药物溶于0.5%羧甲基纤维素钠中）。实验过程中，少数大鼠因感染、水合氯醛麻醉致肠梗阻死亡，导致缺失。

2.3 指标检测 于给药前及给药第7、14 天检测。

2.3.1 自发痛［12］将大鼠置于透明鼠笼中，待其安静后记录5 min 内左前肢离地累积时间，平行3 次，取平均值。

2.3.2 步态［9-11］观察大鼠行走及休息时的姿势，按表1对其因疼痛造成的步态障碍进行评分。

2.3.3 机械刺激痛阈 将大鼠固定，机械痛阈测定套件从小到大依次刺激其前足底中央，每个尼龙刺激针刺激2 次，间隔至少10 s，若在10 s 内出现缩爪即为阳性反应［13］；如果使用最大强度300 g 尼龙刺激针刺激后仍无阳性反应，则本次阈值为300 g。记录大鼠左右前足机械刺激痛阈，计算差值，平行3 次，取平均值。

2.3.4 游泳时间 将大鼠置于 （30±0.5）℃、水深约45 cm的水池中游泳，当水面连续3 次没过鼻尖、每次超过5 s 时将其捞出［14］，以大鼠入水至捞出的间隔为大鼠游泳时间。

2.3.5 组织病理学变化观察 以上指标评价完成后，CO2处死大鼠，取颈7～胸1 脊椎。固定于10%甲醛中24 h，清水冲洗后，20% EDTA 脱钙10 d，梯度酒精脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，横断面切片，HE 染色［15］，在光镜下观察。

2.4 统计学分析 通过SPSS 18.0 软件进行处理，计量资料以表示，方差分析有显著性后，组间比较采用t检验；步态评分采用秩和检验。P＜0.05 表示差异有统计学意义。

3 结果

3.1 颈骨康胶囊对大鼠自发痛的影响 表2 显示，与假手术组比较，模型组大鼠左前肢离地时间显著升高 （P ＜0.01）；与模型组比较，给药第7、14 天颈骨康胶囊组大鼠该时间显著降低（P＜0.05，P＜0.01），也显著低于给药前（P＜0.05，P＜0.01）。

表2 颈骨康胶囊对大鼠自发痛的影响

表2 颈骨康胶囊对大鼠自发痛的影响

注：与假手术组比较，△△P＜0.01；与模型组比较，∗P＜0.05，∗∗P＜0.01；与给药前比较，#P＜0.05，##P＜0.01

假手术组组别 （g剂·—k量g -／1）离5地5±时28间∗∗／给s药前动物1数5／只 离4地4±时35间∗给 ∗／ 药s第7动天物1数4 ／只 离4地4±时48间∗∗／ s给药第14动 天物1数2／只模型组 — 225±87△△ 15 224±87△△ 14 170±87△△ 14颈骨康胶囊组 0.12 204±98 15 118±61∗∗## 14 104±75∗## 13颈骨康胶囊组 0.24 215±73 14 109±74∗∗## 12 76±93∗## 11颈骨康胶囊组 0.48 197±79 14 131±74∗∗# 13 79±67∗∗## 13颈复康颗粒组 2.0 200±91 15 123±69∗∗# 15 103±74∗## 15布洛芬缓释胶囊组 0.08 201±92 16 107±83∗∗## 14 81±73∗## 9

3.2 颈骨康胶囊对大鼠机械刺激痛阈的影响 表3 显示，与假手术组比较，模型组大鼠机械刺激痛阈差显著升高（P＜0.01）；与模型组比较，给药第7、14 天颈骨康胶囊组大鼠该差值显著降低（P＜0.05，P＜0.01）；与给药第7 天比较，给药第14 天0.12、0.48／kg 组该差值显著降低（P＜0.05，P＜0.01）。

表3 颈骨康胶囊对大鼠机械刺激痛阈的影响

表3 颈骨康胶囊对大鼠机械刺激痛阈的影响

注：与假手术组比较，△△P＜0.01；与模型组比较，∗P＜0.05，∗∗P＜0.01；与给药第7 天比较，#P＜0.05，##P＜0.01

组别 剂量／（g·kg-1）痛阈差／g给 药前动物数／只 痛阈差给／g药第7动天物数／只 痛阈差／g给药第14动 天物数／只假手术组 — 20±39∗∗ 15 33±28∗∗ 14 31±42∗∗ 12模型组 — 138±34△△ 15 128±24△△ 14 120±29△△ 14颈骨康胶囊组 0.12 132±40## 15 83±33∗∗ 14 40±61∗∗# 13颈骨康胶囊组 0.24 127±45# 14 77±57∗∗ 12 37±43∗∗ 11颈骨康胶囊组 0.48 139±64# 14 98±32∗ 13 34±30∗∗## 13颈复康颗粒组 2.0 133±30## 15 60±37∗∗ 15 15±65∗∗# 15布洛芬缓释胶囊组 0.08 135±48# 16 82±70∗ 14 16±61∗∗# 9

3.3 颈骨康胶囊对大鼠步态的影响 表4 显示，与假手术组比较，模型组大鼠步态评分显著升高（P＜0.01）；与模型组比较，给药第7、14 天颈骨康胶囊组该评分显著降低（P＜0.05，P＜0.01）；与给药第7 天比较，给药第14天颈骨康胶囊各剂量组该评分显著降低 （P＜0.05，P＜0.01）。

3.4 颈骨康胶囊对大鼠游泳时间的影响 表5 显示，与假手术组比较，模型组大鼠游泳时间显著缩短（P＜0.01）；与模型组比较，给药第7、14 天颈骨康胶囊0.48 g／kg 组该时间显著延长（P＜0.05）；与给药前比较，给药第7 天0.24 g／kg 组、给药第14 天各剂量组该时间显著延长（P＜0.05，P＜0.01）。

3.5 组织病理学变化 图1 显示，假手术组大鼠可见脊神经节，大小不等、形态各异的节神经细胞，较密集的有髓神经横断和轴索，以及明显的髓鞘，未见明显的神经元变性等病变；模型组大鼠可见脊神经节、节细胞，以及个别散在的变性节细胞，正常的有髓神经明显减少（横截面计数），也有增生的雪旺氏细胞；颈骨康胶囊0.48 g／kg 组大鼠脊神经内神经元病变不明显，与模型组比较有髓神经数量明显增多，亦可见增生的雪旺氏细胞；颈骨康胶囊0.12、0.24 g／kg 组大鼠可见脊神经节中节细胞和神经纤维，较多的增生雪旺氏细胞，以及散在有髓神经，与模型组比较差异不明显；颈复康颗粒组与模型组比较，有髓神经数量明显增多。

表4 颈骨康胶囊对大鼠步态的影响

表4 颈骨康胶囊对大鼠步态的影响

注：与假手术组比较，△△P＜0.01；与模型组比较，∗P＜0.05，∗∗P＜0.01；与给药第7 天比较，#P＜0.05，##P＜0.01

组别 剂量／（g·kg-1）步态评分给药前动物数／只 步态评分给 药 第7动天物数／只 步态评分给药第14动 天物数／只假手术组 — 1.0±0.0∗∗ 15 1.0±0.0∗∗ 14 1.0±0.0∗∗ 12模型组 — 2.4±0.5△△ 15 2.4±0.5△△ 14 2.2±0.4△△ 14颈骨康胶囊组 0.12 2.7±0.5## 15 2.0±0.4∗ 14 1.5±0.5∗∗## 13颈骨康胶囊组 0.24 2.6±0.5## 14 1.9±0.9∗ 12 1.5±0.5∗∗# 11颈骨康胶囊组 0.48 2.4±0.5## 14 1.9±0.6∗ 13 1.5±0.8∗∗# 13颈复康颗粒组 2.0 2.4±0.5## 15 1.9±0.6∗ 15 1.5±0.7∗∗## 15布洛芬缓释胶囊组 0.08 2.6±0.5## 16 2.1±0.6 14 1.3±0.7∗∗## 9

表5 颈骨康胶囊对大鼠游泳时间的影响（x±s）

图1 各组大鼠神经病理切片（HE 染色）

4 讨论

研究颈椎病时常用大鼠模型，具有费用低、周期短、取材方便等优点；神经根型颈椎病的造模方法主要有椎管插线法、单纯机械性压迫法、机械压迫和化学刺激法、自身增生压迫法等［16］，本实验选择椎管插线法。神经根压迫后血液循环会受影响，营养供应发生障碍，毛细血管通透性增加，从而诱发水肿，并且可损害髓鞘，脱髓鞘处神经纤维异常放电。研究表明，神经根型颈椎病模型大鼠胶质细胞激活时，可使IL-1β、IL-6 等炎症细胞因子大量释放［17-18］，导致自发疼痛、痛觉过敏、运动障碍，这些变化与颈椎病临床表现相似。

本实验通过检测自发痛、机械刺激痛阈、步态、游泳时间4 个行为学指标和观察组织病理学变化，来评价颈骨康胶囊对神经根型颈椎病大鼠的影响。结果显示，大鼠神经所支配肢体会产生明显的自发疼痛和痛觉过敏；用机械痛阈测定套件测定大鼠左右前足的足跗痛阈值时，造模一侧前足机械刺激痛阈减小，左右前足机械刺激痛阈差显示模型神经根损伤后的痛阈降低情况；颈骨康胶囊3 个剂量（0.12、0.24、0.48 g／kg） 均能明显减轻大鼠自发痛，降低左右前足机械刺激痛阈差，表明它能缓解大鼠神经压迫和痛觉刺激症状。

神经根型颈椎病大鼠神经根受压、炎症刺激会影响运动神经功能，表现为步态异常、游泳时间缩短。本实验发现，颈骨康胶囊可明显改善大鼠步态，延长游泳时间，可能是它改善大鼠神经功能的结果。同时，病理结果显示颈骨康胶囊对损伤的神经也有恢复作用。

综上所述，颈骨康胶囊对神经根型大鼠颈椎病模型有明显改善作用，可缓解自发疼痛，提高机械刺激痛阈，改善步态，延长游泳时间，恢复损伤神经，即对该疾病有治疗作用。