干扰素α-1b序贯拉米夫定联合治疗对慢性乙型肝炎患儿T淋巴细胞亚群、补体水平及肝功能的影响

李博　郑欢伟　赵召霞　李健霞　许剑萍　金鹏

[摘要] 目的 探讨干扰素α-1b序贯拉米夫定联合治疗对慢性乙型肝炎患儿T淋巴细胞亚群、补体表达水平的影响，并对其肝功能进行评价。 方法 选取2015年11月～2017年12月石家庄市第五医院（以下简称“我院”）收治的136例慢性乙型肝炎患儿作为研究对象，根据随机数字表法将其分为研究组和对照组，每组68例。对照组患者仅给予肌内注射干扰素α-1b。研究组采用拉米夫定联合干扰素α-1b治疗。观察两组治疗前后T淋巴细胞亚群（CD4+、CD8+、CD4+/CD8+）及CD8+ T细胞PD-1、Tim-3表达量、补体（C3、C4）水平;观察两组治疗前后谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、总胆红素（TBil）水平的變化。 结果 研究组治疗后CD4+、CD4+/CD8+水平高于对照组，CD8+水平低于对照组，差异均有统计学意义（P < 0.05）。研究组治疗后CD8+ T细胞PD-1、CD8+ Tim-3水平低于对照组，C3、C4水平均高于对照组，差异均有统计学意义（P < 0.05）。两组治疗后ALT、AST、TBil均较治疗前降低，且研究组低于对照组，差异有统计学意义（P < 0.05）。 结论 拉米夫定联合干扰素α-1b治疗小儿慢性乙型肝炎可以明显改善患儿的T淋巴细胞亚群，且HBV DNA、HBsAg、HBeAg水平得到明显改善，具有显著的抗肝纤维化的作用。

[关键词] 乙型肝炎;患儿;干扰素;拉米夫定;T淋巴细胞亚群;补体;肝功能

[中图分类号] R512.62          [文献标识码] A          [文章编号] 1673-7210（2019）05（b）-0148-04

[Abstract] Objective To investigate the effects of interferon α-1b sequential Lamivudine on the expression of T lymphocyte subsets and complement in children with chronic hepatitis B， and to evaluate liver function. Methods A total of 136 children with chronic hepatitis B admitted to the Shijiazhuang Fifth Hospital （“our hospital” for short） from November 2015 to December 2017 were selected as subjects. They were divided into study groups according to the random number table method， and 68 cases in each group. The control group received only intramuscular injection of interferon α-1b. The study group was treated with Lamivudine combined interferon α-1b. The T lymphocyte subsets （CD4+， CD8+， CD4+/CD8+）， CD8+ T cell PD-1， Tim-3 expression， complement （C3， C4） levels were observed before and after treatment in two groups. The levels of alanine aminotransferase （ALT）， aspartate aminotransferase （AST） and total bilirubin （TBil） were observed before and after treatment in both groups. Results After treatment， the levels of CD4+， CD4+/CD8+ in the study group were higher than those in the control group， and the levels of CD8+ in the study group were lower than those in the control group （P < 0.05）. After treatment， the levels of CD8+ T cell PD-1， CD8+ Tim-3 in the study group were lower than those in the control group， while the levels of C3 and C4 in the study group were higher than those in the control group （P < 0.05）. After treatment， ALT， AST and TBil in the two groups were lower than those before treatment， and the differences between the study group and the control group were statistically significant （P < 0.05）. Conclusion Lamivudine combined with interferon α-1b in the treatment of children with chronic hepatitis B can significantly improve the T lymphocyte subsets of children， HBV DNA， HBsAg， HBeAg levels are significantly improved， with significant anti-fibrosis effect.

[Key words] Hepatitis B; Children; Interferon; Lamivudine; T lymphocyte subsets; Complement; Liver function

在世界上大约有20亿人感染乙型肝炎病毒（HBV），超过3亿5000万为慢性携带者，乙肝疫苗接种的广泛实施使世界许多地区的病毒传播的显著降低，但在许多发展中国家，它仍然是高度流行的[1-2]。慢性乙型肝炎在儿童和青少年时期虽然无明显恶性倾向，但在成年之前分别有3%～5%和0.01%～0.03%的慢性携带者发展为肝硬化或肝细胞癌[3-5]。目前，只有干擾素-α（IFN-α）和拉米夫定可作为慢性乙型肝炎（CHB）的一线治疗药物[6]。本研究通过干扰素α-1b序贯拉米夫定联合治疗小儿慢性乙型肝炎，探讨联合用药对患儿细胞免疫、补体表达水平的影响，并对患者肝功能进行评价。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2015年11月～2017年12月石家庄市第五医院（以下简称“我院”）收治的136例慢性乙型肝炎患儿作为研究对象，其中男91例，女45例;年龄1～12岁，平均（4.6±1.3）岁;轻度55例，重度81例;病程6个月～4年，平均（3.1±1.1）年;父母罹患乙肝80例，无感染56例;出生后24 h接受高效乙型肝炎免疫球蛋白阻断者28例，未进行处理者108例。根据随机数字表法将患儿分为研究组和对照组，每组68例。研究组中男45例，女23例;年龄1～11岁，平均（4.5±1.4）岁;轻度28例，重度40例;病程7个月～4年，平均（3.2±1.0）年;父母罹患乙肝39例，无感染29例;出生后24 h接受高效乙型肝炎免疫球蛋白阻断者15例，未进行处理者53例。对照组中男46例，女22例;年龄1～12岁，平均（4.6±1.5）岁;轻度27例，重度41例;病程6个月～4年，平均（3.1±0.9）年;父母罹患乙肝41例，无感染27例;出生后24 h接受高效乙型肝炎免疫球蛋白阻断者13例，未进行处理者55例。两组患儿性别、年龄、病情严重程度、病程、父母罹患乙肝情况及出生后是否进行阻断等一般资料比较，差异无统计学意义（P > 0.05）。本研究经我院医学伦理委员会批准。

1.2 纳入与排除标准

1.2.1 纳入标准  ①均符合2015年“慢性乙型肝炎防治指南”[7]中的诊断标准：乙肝表面抗原（HbsAg）阳性，乙肝病毒基因（HBV DNA）阳性>6个月，丙氨酸转氨酶（ALT）持续或反复升高;②血清学检测显示HBV DNA、HBeAg均为阳性;③患儿入院接受治疗前6个月未使用过抗病毒等药物;④监护人知情同意，并签署知情同意书。

1.2.2 排除标准  ①甲、丙、丁、戊型肝炎病毒性的感染;②肝硬化、甲亢、心脏疾病、肾脏疾病及糖尿病等;③药物性、遗传代谢性、自身免疫性肝脏疾病;④影响肝功能的其他疾病或服用相关药物者。

1.3 治疗方法

1.3.1 对照组  对照组患者仅给予肌内注射干扰素α-1b（由北京三元基因工程有限公司生产提供，50 μg/（mL·支），生产批号：20121008），隔日肌内注射1次，30 μg/（m2·次），连续治疗1个月后，改为60 μg/（m2·次），隔日肌内注射1次，连续治疗6个月[8]。

1.3.2 研究组  采用拉米夫定联合干扰素α-1b治疗。口服拉米夫定[由葛兰素史克制药（苏州）有限公司生产提供，生产批号：11080051]，按照3 mg/（kg·d）顿服，同时肌内注射干扰素α-1b（方法同对照组）[9]。

1.4 观察指标

1.4.1 T淋巴细胞亚群  于治疗前后抽取患儿清晨肘静脉血5 mL，应用美国BD公司FACSCantoⅡ型流式细胞仪检测CD4+、CD8+ T细胞水平，计算二者比值。同时应用FACSCantoⅡ型流式细胞仪测定CD8+ T细胞PD-1、Tim-3表达量。

1.4.2 补体测定  于治疗前后抽取患儿清晨肘静脉血5 mL，采用补体（C3、C4）测定试剂盒（上海荣盛生物技术有限公司），应用全自动生化分析仪（OLYMPUS株式会社）检测外周血C3、C4水平。

1.4.3 肝功能  治疗前空腹抽取患儿静脉血3 mL，采用全自动生化分析仪（日立7080）对谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、总胆红素（TBil）水平进行检测[10-12]。

1.6 统计学方法

采用SPSS 19.0统计学软件进行数据分析，计量资料用均数±标准差（x±s）表示，两组间比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差分析，等级资料组间比较采用秩和检验;计数资料用率表示，组间比较采用χ2检验，以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组治疗前后T淋巴细胞亚群比较

研究组治疗后CD4+、CD4+/CD8+水平高于对照组，CD8+水平低于对照组，差异均有统计学意义（P < 0.05）。见表1。

2.2 两组治疗前后CD8+ T细胞PD-1、Tim-3表达量比较

研究组治疗后CD8+ T细胞PD-1、CD8+ Tim-3水平低于对照组，差异均有统计学意义（P < 0.05）。见表2。

2.3 两组治疗前后补体C3、C4水平比较

研究组治疗后补体C3、C4水平均高于对照组，差异均有统计学意义（P < 0.05）。见表3。

2.4 两组治疗前后肝功能比较

治疗前，两组ALT、AST、TBil比较，差异无统计学意义（P > 0.05）;两组治疗后ALT、AST、TBil均较治疗前降低，且研究组低于对照组，差异有统计学意义（P < 0.05）。见表4。

3 讨论

干扰素是一种小型蛋白质信使，对各种生物和合成刺激产生反应，能与人体细胞膜的特异受体结合，然后合成抗病毒蛋白，并增强巨噬细胞及自然杀伤细胞的功能，从而可减轻肝脏炎症及坏死[13]。Sherbini等[14]对20篇小儿慢性乙型肝炎相关文献（1112例入选患者，2～18岁）进行研究发现，IFN-α治疗后HBV DNA和HBeAg水平显著低于高于无治疗组（OR = 3，95%CI：1.6～5.4，1.1～11.3），提示IFN-α仍然是大多数HBV感染儿童的首选治疗方法。

拉米夫定在体内生成活性物质拉米夫定三磷酸盐，后者既是HBV DNA聚合酶的抑制剂，又可以终止前病毒HBV DNA链复制，在慢性乙型肝炎肝功能失代偿患者中具有良好的安全性和耐受性[12，15-16]。虽然高效核苷/核苷酸类似物为儿童慢性乙型肝炎开启了治疗的新的可能性，但是也面临着耐药菌株的出现风险，故在开始治疗之前，应仔细权衡治疗的风险与利弊[17-19]。

CD4+T细胞主要是识别MHCⅡ类分子提呈的13～17个氨基酸残基的外源性抗原肽，是人体免疫系统中一种重要的免疫细胞。CD8+T细胞主要识别MHCⅠ类分子提呈的8～10个氨基酸残基的内源性抗原肽，可以分化为CD8+Teff细胞，主要是细胞毒性T细胞和特异性杀伤靶细胞[20]。本研究发现，研究组治疗后CD4+、CD4+/CD8+水平高于对照组，CD8+水平低于对照组，差异均有统计学意义（P < 0.05）。提示经过治疗后两组细胞免疫功能均得到改善。程序性死亡因子1及其配体是一对免疫共刺激因子，其信号通路激活可以导致免疫抑制性肿瘤微环境形成，使肿瘤细胞逃避机体免疫监视和杀伤，阻断其通路后可以逆转肿瘤免疫微环境，增强内源性抗肿瘤免疫效应[21-25]。CD8+ Tim-3是一种免疫调节分子，对机体免疫系统的稳定和凋亡细胞的清除有重要作用，但其对IFN-γ起负向调节作用，其过表达可能与乙肝患者免疫功能低下、病情迁延反复有关[20]。研究组治疗后CD8+ PD-1、CD8+ Tim-3水平低于对照组，C3、C4水平均高于对照组，差异均有统计学意义（P < 0.05）。

综上所述，干扰素α-1b序贯拉米夫定联合治疗小儿慢性乙型肝炎可以明显改善患儿的T淋巴细胞亚群和补体水平，抑制负向调节，HBV-DNA水平得到明显改善，并具有显著的抗肝纤维化的作用。

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（收稿日期：2018-10-31  本文编辑：王   蕾）