血清TK1、FOLR1在卵巢癌患者中的表达及临床意义*

2019-07-15李雪锋赵红利孟宜波

国际检验医学杂志 2019年13期

杨琴，李雪锋，龚钿，赵红利，孟宜波

(眉山市人民医院：1．妇科；2．ICU，四川眉山 620010)

卵巢癌是女性生殖系统3大恶性肿瘤之一，多发生于围绝经期的妇女[1]。由于卵巢深陷于盆腔，且卵巢癌患者在发病早期缺乏特异临床表现，大部分患者在确诊时已处于晚期。据统计报道[2]，早期卵巢癌患者在得到及时有效的治疗后，其5年生存率在92%左右，而晚期的卵巢癌患者即使进行了针对性治疗，其5年生存率也只有30%左右，早诊断、早治疗是改善卵巢癌患者生存率的重要举措。胸苷激酶1(TK1)是与细胞分裂、增殖密切相关的酶，参与了DNA的合成和损伤修复[3]，其在胃癌、肝癌、乳腺癌等多种恶性肿瘤中高表达[4-6]，并且可以直接通过检测血清中TK1的水平来反映细胞增殖情况，方便快捷，因此，TK1对恶性肿瘤诊断和预后评估的作用逐渐受到重视。叶酸结合蛋白1(FOLR1)是一种膜蛋白，可通过受体介导的内吞作用来吸收叶酸[7]，LI等[8]的研究显示，FOLR1可影响鼻咽癌的耐性药，鱼志琪等[9]的研究显示，FOLR1的表达水平与卵巢癌的发展密切相关。目前，较少关于血清TK1、FOLR1与卵巢癌的研究报道，本研究分析了TK1、FOLR1在卵巢癌患者血清中的表达及其对卵巢癌的诊断价值，以期为临床诊治卵巢癌提供新的思路，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料选取2012年1月至2017年12月在眉山市人民医院接受治疗的卵巢癌患者50例作为卵巢癌组，另根据卵巢癌组的一般资料匹配同期在本院接受治疗的良性卵巢肿瘤患者50例作为良性卵巢肿瘤组。卵巢癌组患者年龄36～67岁，平均(52.97±9.45)岁。体质量42～71 kg，平均体质量(48.62±4.21)kg。绝经情况：绝经38例，未绝经12例。国际妇产科联盟(FIGO)分期：Ⅰ～Ⅱ期18例，Ⅲ～Ⅳ期32例。分化程度：高分化16例，中低分化34例。淋巴结转移：有淋巴结转移27例，无淋巴结转移23例。肿瘤最大径：≥5 cm 28例，<5 cm 22例。组织分型：浆液性腺癌38例，黏液性腺癌7例，其他5例。良性卵巢肿瘤组患者年龄33～69岁，平均(53.51±9.69)岁。体质量41～70 kg，平均体质量(49.38±4.54)kg。绝经情况：绝经39例，未绝经11例。组织分型：黏液性囊腺瘤22例，浆液性囊腺瘤16例，其他12例。2组患者的年龄、体质量、绝经情况等差异无统计学意义(P>0.05)，均衡可比。所有研究对象对本次研究均知情同意，且本研究已通过本院伦理委员会的批准。

1.2纳入、排除标准纳入标准：(1)卵巢癌组和良性卵巢肿瘤组患者所患疾病均经过临床病理检验确诊；(2)入组前未接受过放化疗；(3)卵巢癌组患者均为新发病例；(4)病历资料完整。排除标准：(1)合并有其他恶性肿瘤者；(2)预计生存时间低于3个月者；(3)存在血液系统疾病者；(4)不同意此次研究者。

1.3检测方法抽取2组研究对象的空腹静脉血5 mL，3 000 r/min离心10 min，提取血清，采用酶联免疫吸附法检测血清中TK1、FOLR1的水平。TK1试剂盒购自上海恒斐生物科技有限公司；FOLR1试剂盒购自武汉博士德生物有限公司；全自动酶标仪为680酶标仪，购自美国Bio-Rad公司。严格按照试剂盒说明书指导相关操作。

1.4实验室质量控制由于本研究前后历时5年，故按中国药典2010版附录XIX B药物制剂人体生物利用度和生物等效性试验指导原则之《生物样品分析方法的基本要求》制订实验室检测质量控制方法，主要为：每半年更新测试样本的标准物，每年替换一次新的质控样品，按质控样品水平对测试结果进行修正，使新旧标准物对照的样本水平相对标准偏差(RSD)控制在RSD10%以内，回收率控制在85%～115%，并由本院高年资的检验医师具体负责。

2 结果

2.1TK1、FOLR1在卵巢癌患者和良性卵巢肿瘤患者血清中的表达卵巢癌组患者血清中TK1、FOLR1水平均明显高于良性卵巢肿瘤组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 TK1、FOLR1在卵巢癌患者和良性卵巢肿瘤患者血清中的表达

2.2卵巢癌患者血清中TK1、FOLR1水平与临床病理特征的关系卵巢癌患者血清中TK1水平与年龄、绝经情况、肿瘤最大径、组织分型无关(P>0.05)，与FIGO分期、分化程度、淋巴结转移有关(P<0.05)。卵巢癌患者血清中FOLR1水平与年龄、绝经情况、肿瘤最大径无关(P>0.05)，与FIGO分期、分化程度、淋巴结转移、组织分型有关(P<0.05)。见表2。

表2 卵巢癌患者血清中TK1、FOLR1的表达水平与临床病理特征的关系

2.3血清TK1、FOLR1对卵巢癌的诊断价值将血清TK1、FOLR1指标数据划分成若干组段，建立对卵巢癌诊断价值的ROC分析模型。ROC结果显示，血清TK1取1.21 pmol/L时诊断卵巢癌的灵敏度为0.701，特异度为0.782，ROC曲线下面积为0.786。血清FOLR1取224.16 pg/mL时诊断卵巢癌的灵敏度为0.883，特异度为0.871，ROC曲线下面积为0.891。见图1。

注：A为TK1；B为FOLR1

图1血清TK1、FOLR1诊断卵巢癌的ROC曲线

2.4血清TK1、FOLR1联合诊断对卵巢癌的诊断价值本研究进一步设计了TK1、FOLR1联合诊断模式：以达到各指标的阈值(TK1=1.21 pmol/L、FOLR1=224.16 pg/mL)为阳性检出，当样本被判断2个指标均阳性或均阴性时，做出阳性或阴性的诊断。若一阳一阴时则进行复查，复查不变时给以FOLR1指标结果。经计算，TK1、FOLR1联合诊断模式能进一步提高诊断的灵敏度和特异度，分别达到0.895和0.889。见图2。

注：A表示偏阳诊断界点(1个指标达到阈值即给阳性诊断)；B表示偏阴诊断界点(1个指标未达阈值即给阴性诊断)；C表示联合诊断界点(2个指标均达或不达阈值，给阳或阴性诊断；若1个指标达1个指标不达阈值行复查，复查不变取FOLR1结果)

图2血清TK1、FOLR1联合诊断卵巢癌的ROC曲线

3 讨论

TK1是一种细胞增殖标志物，以三磷酸腺苷为底物，在镁离子的参与下，可将胸腺嘧啶核苷转化为单磷酸胸腺嘧啶，在合成 DNA 前体中起到重要的作用[10]。TK1是细胞周期中S期的关键酶，其表达水平受到S期DNA合成速度的影响，具有细胞周期依赖性，在G1期表达水平较低，在G1/S期交界时TK1水平逐渐升高，一直持续到G2/M期，之后TK1的表达水平开始明显下降[11-12]。由于肿瘤细胞失去正常细胞周期性，具有无限增殖的特点，因此，处于S期、G2期的细胞比例高，肿瘤细胞内大量的TK1被释放入血，导致血清中的TK1水平升高[13]。本研究结果显示，卵巢癌组患者血清中TK1水平均明显高于良性卵巢肿瘤组(P<0.05)，这主要是因为卵巢癌是恶性肿瘤，与良性卵巢肿瘤相比，肿瘤细胞增殖旺盛，DNA合成剧增，血清中的TK1水平更高。此外，本研究结果显示，卵巢癌患者血清中TK1的表达水平与年龄、绝经情况、肿瘤最大径、组织分型无关(P>0.05)，与FIGO分期、分化程度、淋巴结转移有关(P<0.05)，可见血清中TK1的表达水平可反映卵巢癌的FIGO分期、分化程度、淋巴结转移情况，这可能是因为FIGO分期、分化程度、淋巴结转移均受到细胞增殖的影响。薄维波[14]的研究显示，卵巢癌患者血清中TK1水平与FIGO分期、分化程度有关，但与淋巴结转移无关，与本研究存在一定差异，这可能是由于2个研究TK1检测方法不一致所导致，并且该研究还显示TK1是卵巢癌患者预后的独立危险因素，这提示TK1对卵巢癌患者的预后有较好的预测价值，在后续的研究中将进一步验证。

FOLR1定位于染色体11q13.3～14.1上，相对分子质量为(38～40)×103，其蛋白分子暴露在胞外，由糖基化磷脂酰肌醇锚定在细胞膜上[15]。FOLR1对叶酸及其衍生物具有高度亲和力，可介导细胞外叶酸进入细胞内，由于叶酸可以调节细胞的增殖、分裂，当叶酸缺乏时可对肿瘤细胞的DNA复制、修复产生重大的影响，因此，FOLR1的表达对细胞分裂、增殖有重要的作用[16]。本研究结果显示，卵巢癌组患者血清中的FOLR1水平均明显高于良性卵巢肿瘤组(P<0.05)，这说明FOLR1在卵巢癌患者血清中呈高表达，曾正莲等[17]的研究显示，FOLR1在卵巢癌组织中呈高表达，由于FOLR1可以从细胞表面脱落至血液中，卵巢癌组织中的FOLR1表达水平也会影响到血清中FOLR1的表达。本研究结果还显示，卵巢癌患者血清中FOLR1的表达水平与年龄、绝经情况、肿瘤最大径无关(P>0.05)，与FIGO分期、分化程度、淋巴结转移、组织分型有关(P<0.05)，这说明卵巢癌患者血清中FOLR1的表达水平可反映FIGO分期、分化程度、淋巴结转移、组织分型情况，可能在卵巢癌的发生、发展中起重要作用。SARA等[18]的研究显示，卵巢癌患者FOLR1的高表达与顺铂的灵敏度有关，可评估卵巢癌化疗耐药情况，可见FOLR1还有望成为提高卵巢癌化疗灵敏度的新靶点。

由于卵巢癌患者在疾病早期无特异性的临床表现，大部分患者在确诊时已进入中晚期，延误了最佳的治疗时机，寻找高效的诊断方法一直是临床关注的重点。血清肿瘤标志物可用于肿瘤的诊断、鉴别、疗效评估、预后预测等，且具有检测方便、重复检查性好等特点。TK1、FOLR1均可以通过测量血清中的表达水平来进行相关诊断，并且均可通过酶联免疫吸附法来进行测定，具有方便、经济等优点。本研究结果显示，血清TK1取1.21 pmol/L时对卵巢癌的灵敏度为0.701，特异度为0.782，曲线下面积为0.786。血清FOLR1取224.16 pg/mL时对卵巢癌的灵敏度为0.883，特异度为0.871，曲线下面积为0.891。若将TK1、FOLR1这2个指标进行联合应用，则灵敏度和特异度还有一定的升高。糖类抗原125(CA125)是临床广泛应用的卵巢癌血清肿瘤标志物，吴磊等[19]的研究结果显示，血清CA125对卵巢癌的灵敏度为76.67%，特异度为60.00%，曲线下面积为0.683，与之对比，说明血清TK1、FOLR1对卵巢癌具有较高的诊断价值，且FOLR1的灵敏度、特异度和曲线下面积均高于TK1、CA125，说明其漏诊率、误诊率更低，诊断价值更高。

综上所述，TK1、FOLR1在卵巢癌患者血清中呈高表达，且TK1的表达水平与患者的FIGO分期、分化程度、淋巴结转移有关，FOLR1的表达水平与患者的FIGO分期、分化程度、淋巴结转移、组织分型有关。血清TK1、FOLR1对卵巢癌具有较高的诊断价值，两者联合诊断时能够一定程度提高灵敏度和特异度。由于本研究选取病例数较少，且为单中心研究，血清TK1、FOLR1在卵巢癌中的应用价值还有待多中心、大样本量的研究进行验证。