IGF- 1 R、EGFR和p53在胸腺上皮瘤中的表达及临床意义

王兰朋，武丽蕊，王超

廊坊市人民医院1胸外科3实验室，河北 廊坊065000

2河北中石油中心医院妇科，河北 廊坊0650000

胸腺上皮瘤是临床中常见的纵隔肿瘤，在纵隔肿瘤中所占的比例为15%～20%，其主要病理表现为肿瘤细胞内存在非肿瘤细胞的浸润。胸腺上皮瘤患者多存在免疫系统失衡的现象，因此会引发重症肌无力等多种免疫性疾病，对患者的生活质量造成了严重的影响[1-2]。目前临床上对于胸腺上皮瘤的发病机制尚未完全明确。有研究显示，胸腺上皮瘤的发生与相关细胞因子的表达异常密切相关[3]。胰岛素样生长因子-1受体（insulin-like growth factor-1 receptor，IGF-1R）是酪氨酸蛋白激酶家族的成员，是一种糖蛋白跨膜受体，与肿瘤的发生、发展具有密切的关系[4]。表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）是一种跨膜糖蛋白受体，能够促进肿瘤的生长、浸润和转移[5]。p53基因是一种抑癌基因，是细胞生长、增殖的负调节因子，在多种恶性肿瘤中均有表达，且与肿瘤的预后及生物学特性具有相关性，对细胞周期及细胞凋亡的调控起关键作用[6]。目前，关于IGF-1R、EGFR、p53蛋白表达与胸腺上皮瘤关系的相关报道较少，因此，本研究对IGF-1R、EGFR、p53蛋白在胸腺上皮瘤组织中的表达情况及临床意义进行了探讨，旨在为临床医师诊治胸腺上皮瘤提供参考依据，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2013年3月至2015年2月廊坊市人民医院收治的胸腺上皮瘤患者的胸腺上皮瘤组织存档石蜡标本。胸腺上皮瘤患者的纳入标准：①经过病理组织学检查确诊为胸腺上皮瘤；②未接受过放化疗治疗；③临床资料完整。排除标准：①合并其他恶性肿瘤；②合并先天性免疫系统疾病；③哺乳期或妊娠期妇女。根据纳入、排除标准，本研究共纳入82例胸腺上皮瘤患者的胸腺上皮瘤组织标本。82例胸腺上皮瘤患者中，男45例，女37例；年龄为41～76岁，平均年龄为（62.14±3.27）岁；合并淋巴结转移39例，合并重症肌无力43例；Masaoka分期：Ⅰ～Ⅱ期34例，Ⅲ～Ⅳ期48例。另选取同期胸腺滤泡性增生患者的胸腺滤泡性增生组织存档石蜡标本为对照，纳入标准：①确诊为胸腺滤泡性增生；②临床资料完整。排除标准：①恶性肿瘤患者；②哺乳期或妊娠期妇女；③合并先天性免疫系统疾病。根据纳入、排除标准，本研究共纳入60例胸腺滤泡性增生患者，其中，男32例，女28例；年龄为31～74岁，平均年龄为（59.87±3.81）岁。两组患者的性别、年龄比较，差异均无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2 仪器与试剂

电子显微镜购于深圳超眼科技有限公司，鼠抗人IGF-1R单克隆抗体购于美国NeoMarkers公司，鼠抗人EGFR单克隆抗体购于美国Sigma公司，鼠抗人p53单克隆抗体购于丹麦Dako公司；IGF-1R、EGFR、p53检测试剂盒均购于上海酶联生物科技有限公司。免疫组织化学染色试剂盒和二氨基联苯胺显色试剂盒均购于徕卡显微系统（上海）贸易有限公司。

1.3 免疫组织化学染色法

采用免疫组织化学染色法检测胸腺上皮瘤组织和胸腺滤泡性增生组织中IGF-1R、EGFR、p53蛋白的表达情况。具体方法：取石蜡包埋组织进行切片，切片厚度为4 μm。采用免疫组织化学EnVision二步法进行染色：将组织切片置于65℃下烘烤12 h，然后脱蜡、水化切片，应用3%的过氧化氢对内源性过氧化物酶进行灭活，采用磷酸盐缓冲液（phosphate buffered saline，PBS）冲洗标本2次，依次加入鼠抗人IGF-1R单克隆抗体、鼠抗人EGFR单克隆抗体、鼠抗人p53单克隆抗体，再应用PBS冲洗标本2次，然后加入链霉素工作液（经辣根过氧化物酶标记），置于温度为37℃的恒温培养箱中孵育25 min，完成后应用PBS冲洗，二氨基联苯胺染色，苏木素复染，应用中性树胶进行封固。

1.4 染色结果判断标准

染色结果由两名高资历病理科医师进行观察，以胸腺上皮瘤组织和胸腺滤泡性增生组织中上皮细胞的细胞质或者细胞膜呈棕褐色或黄色颗粒判定为IGF-1R阳性染色，以上皮细胞的细胞膜呈棕褐色或黄色颗粒判定为EGFR阳性染色，以肿瘤上皮细胞的细胞核呈棕褐色、棕黄色或黄色颗粒判定为p53阳性染色。每个切片选择10个高倍镜视野进行观察，于每个视野下观察100个细胞的着色情况。①染色强度评分标准：棕褐色计3分，棕黄色计2分，淡黄色计1分，基本无着色计0分。阳性细胞所占百分比评分标准：阳性细胞所占百分比≤5%计0分，阳性细胞所占百分比为6%～25%计1分，阳性细胞所占百分比为26%～50%计2分，阳性细胞所占百分比≥51%计3分。染色强度和阳性细胞所占百分比的乘积为0～2分判定为IGF-1R、EGFR、p53阴性表达，染色强度和阳性细胞所占百分比的乘积为3～9分判定为IGF-1R、EGFR、p53阳性表达。

1.5 观察指标及随访

比较胸腺上皮瘤组织和胸腺滤泡性增生组织中IGF-1R、EGFR、p53蛋白的阳性表达情况，并分析IGF-1R、EGFR、p53蛋白在胸腺上皮瘤组织中的阳性表达情况与胸腺上皮瘤患者临床特征及预后的关系。以电话随访的方式对全部患者进行随访，随访截止时间为2016年3月，统计胸腺上皮瘤患者的生存与死亡例数，并对生存与死亡的胸腺上皮瘤患者胸腺上皮瘤组织中IGF-1R、EGFR、p53蛋白的阳性表达情况进行比较。

1.6 统计学分析

采用SPSS 19.0软件对数据进行统计分析。计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用t检验；计数资料以例数和率（%）表示，组间比较采用χ2检验；相关性分析采用Pearson相关性分析。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 IGF- 1 R、EGFR、 p53蛋白在胸腺上皮瘤组织和胸腺滤泡性增生组织中阳性表达情况的比较

IGF-1R、EGFR、p53蛋白在胸腺上皮瘤组织中的阳性表达率均明显高于胸腺滤泡性增生组织，差异均有统计学意义（P＜0.01）。（表1）

表1 胸腺上皮瘤组织与胸腺滤泡性增生组织中IGF- 1 R、EGFR、 p53蛋白阳性表达情况的比较[ n（%）]

2.2 IGF- 1 R、EGFR、 p53蛋白阳性表达情况与胸腺上皮瘤患者临床特征的关系

不同性别、年龄、世界卫生组织（WHO）分型、肿瘤直径胸腺上皮瘤患者胸腺上皮瘤组织中IGF-1R、EGFR、p53蛋白的阳性表达率比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。Masaoka分期为Ⅲ～Ⅳ期胸腺上皮瘤患者胸腺上皮瘤组织中的IGF-1R、EGFR、p53蛋白的阳性表达率均高于Masaoka分期为Ⅰ～Ⅱ期的胸腺上皮瘤患者，差异均有统计学意义（χ2=5.251、6.037、7.212，P＜0.05）。有淋巴结转移胸腺上皮瘤患者胸腺上皮瘤组织中的IGF-1R、EGFR、p53蛋白的阳性表达率均高于无淋巴结转移的胸腺上皮瘤患者，差异均有统计学意义（χ2=10.070、5.398、16.943，P＜0.05）。（表2）

2.3 IGF- 1 R、EGFR、 p53蛋白阳性表达情况与胸腺上皮瘤患者预后的关系

截至2016年3月，共失访6例，获得随访76例，其中，43例胸腺上皮瘤患者生存。将76例胸腺上皮瘤患者分为生存组与死亡组，死亡组胸腺上皮瘤患者胸腺上皮瘤组织中IGF-1R、EGFR、p53蛋白的阳性表达率均明显高于生存组，差异均有统计学意义（P＜0.01）。（表3）

表2 不同临床特征胸腺上皮瘤患者胸腺上皮瘤组织中IGF- 1 R、EGFR、 p53蛋白的阳性表达情况（ n=82）

表3 两组胸腺上皮瘤患者胸腺上皮瘤组织中IGF- 1 R、EGFR、 p53蛋白的阳性表达情况[ n（%）]

2.4 IGF- 1 R、EGFR、 p53蛋白在胸腺上皮瘤组织中表达的相关性

经Pearson相关性分析，结果显示，EGFR与IGF-1R的阳性表达呈正相关（r=0.270，P=0.032），EGFR与p53的阳性表达呈正相关（r=0.443，P=0.014），IGF-1R与p53的阳性表达无相关性（r=-0.121，P=0.918）。

3 讨论

胸腺上皮瘤可发生于各年龄段的人群，中年人为该肿瘤的高发人群。在发病早期，胸腺上皮瘤患者的肿瘤体积较小，无明显的临床症状，临床检查的漏诊率较高；当肿瘤体积增大至一定程度时，周围组织器官会受到压迫，进而患者会表现出胸闷、胸痛、发热、咳嗽、体重减轻等症状，一旦确诊患者已经发展至中晚期，临床治疗效果及预后均较差。因此，寻找能够辅助诊断恶性肿瘤及评估肿瘤恶性程度及预后的分子标志物成为临床研究的热点[7-9]。

IGF-1R广泛存在于人细胞质区、胞外区及跨膜区，是一种糖蛋白跨膜受体。据相关研究结果显示，IGF-1R在乳腺癌、卵巢癌等多种恶性肿瘤组织中均异常表达，且能够促进肿瘤细胞的增殖，抑制肿瘤细胞的凋亡，与肿瘤细胞的转移和浸润密切相关[10-11]。EGFR是一种细胞膜表面的糖蛋白受体，是由原癌基因c-erbB-1编码，在多种恶性肿瘤中的表达水平均较高，且被认为是对恶性肿瘤患者生存情况影响最大的分子标志物。有研究指出，EGFR的过表达与恶性肿瘤细胞的增殖、活动性、浸润性、细胞凋亡抑制、黏连性及新生血管的形成均具有密切的关系[12-14]。p53基因是机体内重要的抑癌基因，也是调节细胞增殖、分化和凋亡的重要因子，在正常细胞中能够有效地抑制肿瘤的增殖，并对细胞的分化具有促进作用，进而抑制肿瘤的发生，但突变的p53基因则可参与肿瘤的发生与发展。本研究结果显示，IGF-1R、EGFR、p53蛋白在胸腺上皮瘤组织中的阳性表达率均明显高于胸腺滤泡性增生组织（P＜0.01），Masaoka分期为Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移胸腺上皮瘤患者胸腺上皮瘤组织中的IGF-1R、EGFR、p53蛋白的阳性表达率均高于Masaoka分期为Ⅰ～Ⅱ期、无淋巴结转移的患者，且死亡组胸腺上皮瘤患者胸腺上皮瘤组织中IGF-1R、EGFR、p53蛋白的阳性表达率均明显高于生存组（P＜0.01），说明IGF-1R、EGFR、p53蛋白在胸腺上皮瘤组织中的表达水平较高，且可能与肿瘤的发生、发展和预后有关。本研究发现，IGF-1R、EGFR、p53蛋白阳性表达率高的胸腺上皮瘤患者，其生存率较低。分析其原因主要包括以下3个方面：①IGF-1R的信号转导能够使细胞的黏附性发生变化，导致细胞向恶性方向发展，进而导致恶性肿瘤发生；②EGFR异常表达会对细胞核的正常转录造成干扰，诱导肿瘤细胞分化、增殖，并促进肿瘤细胞侵袭、转移及血管生成，抑制肿瘤细胞的凋亡，进而对肿瘤的发展发挥促进作用；③p53基因在突变后可发挥致癌基因的作用，其高表达可有效促进胸腺上皮瘤的发生以及浸润和转移。宋楠等[15]研究发现，p53与胸腺上皮瘤的分型具有一定的关系，其阳性表达率随着肿瘤细胞异型程度的增加而升高。然而，本研究结果显示，p53阳性表达可能与WHO分型无关，分析其原因可能与样本的选择和样本数量的不同有关。通过对IGF-1R、EGFR、p53蛋白在胸腺上皮瘤组织中表达的相关性进行分析发现，EGFR与IGF-1R、p53蛋白的阳性表达均呈正相关，IGF-1R与p53的阳性表达无相关性，说明EGFR、IGF-1R、p53蛋白共同参与了胸腺上皮瘤的发生与发展。EGFR与IGF-1R的阳性表达呈正相关的机制可能是因为IGF-1R的异常表达能够促进血管内皮生长因子的合成与释放，促进肿瘤新生血管的生成，进而使EGFR的表达水平也随之升高，共同促进了肿瘤的发展；EGFR与p53的阳性表达呈正相关的机制主要是因为EGFR通过结合其配体，使自身酪氨酸残基发生磷酸化，引起细胞过度增殖，而p53基因是细胞生长的监控器，其阻碍了因EGFR磷酸化作用而引发的细胞过度增殖，但是突变的p53基因失去了该功能，导致EGFR磷酸化作用加强，引发细胞过度增殖，进而共同促进肿瘤的进展。综上所述，IGF-1R、EGFR、p53蛋白在胸腺上皮瘤组织中的表达水平较高，共同参与了胸腺上皮瘤的发生、浸润及转移，对胸腺上皮瘤患者的生存情况也造成了一定的影响，在一定程度上可以作为评估胸腺上皮瘤恶性程度及预后的有效指标。本研究的不足之处在于样本例数较少，研究结果还需在今后的研究中进一步证实。