门氏芪元颗粒的制备工艺研究

1.山西中医药大学中药学院，山西 晋中 030619; 2.山西中医药大学中西医结合临床学院，山西 晋中 030619

门氏芪元颗粒来源于山西名医门九章教授的经验方门氏芪元汤，由黄芪、当归、玄参、金银花等中药组成。门氏芪元汤临床使用多年，具有益气养阴，化瘀解毒的功效，用于气阴两虚证。方中的金银花具有抗内毒素、解热、抗炎作用[1]，玄参、当归含有多糖[2]、黄酮类化合物[3]、挥发油[4]等多种化学成分，具有抗肿瘤、抗氧化等生理活性[5-7]，黄芪主要有效成分为黄芪甲苷，具有免疫调节、降糖、抗病毒等药理作用[8]。本方在临床上疗效明确，为满足临床用药需求，将其由传统汤剂研发成为医院颗粒制剂。门氏芪元颗粒欲申报医院制剂，中试生产已经完成，质量标准也已经确定，本研究通过L9(34)正交设计试验法优选门氏芪元颗粒的最佳提取工艺，然后通过考察不同辅料配比、润湿剂用量，以颗粒成型性、溶化性、吸湿率、堆密度及休止角为指标，筛选处方中加入辅料配比及最佳成型工艺，为门氏芪元颗粒的制备工艺研究提供科学依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Waters-e2695高效液相色谱仪及Waters-2424蒸发光散射检测器(美国Waters公司)；BGZ-76型烘箱(上海博讯实业有限公司医疗设备厂)；TDZ5-WS型离心机(湖南湘立科学仪器有限公司)；DiamonsilC18色谱柱(4.6 mm×200 mm，5 μm)；微量进样器(批号：113048；上海高鸽工贸有限公司)；SB-5200DTDN超声清洗器(新芝生物科技股份有限公司)；AB-135型十万分之一电子天平(瑞士METTLER公司)；FA2014型万分之一天平(上海科技有限公司)；FW100型万能粉碎机(北京市永光明医疗仪器有限公司)；定性滤纸(杭州富阳北木浆纸有限公司)，蒸锅，烧杯，量筒，砝码，培养皿，蒸发皿，玻璃棒，漏斗，纱布，塑料布，药匙，筛网，5 mL离心管，分液漏斗，玻璃干燥器，称量瓶。

1.2 试药 黄芪药材(太谷县广源堂药业有限公司，市售，1.0 kg/袋，批号：1607001)；玄参药材(河北全泰药业有限公司，市售，1.0 kg/袋，批号1608003)；当归药材(郑州瑞龙制药股份有限公司，市售，1.0 kg/袋，16120102)；金银花药材(河北全泰药业有限公司，市售，1.0 kg/袋，批号：1608201)；糊精(天津市科密欧化学试剂有限公司，500 g/瓶)；可溶性淀粉；氯化钠。

2 方法与结果

2.1 门氏芪元颗粒提取工艺

2.1.1 单因素考察 分别对溶剂倍量、提取时间、提取次数进行了考察，结果表明溶剂倍量为14倍、提取次数为3次，每次1.0 h时，综合评分达到最大；提取次数不断增加，综合评分也随之增加。

2.1.2 正交试验设计 以出膏率、黄芪甲苷的提出量作为考察指标，以水为提取溶剂，进行L9(34)正交试验[9]选择三个影响因素分别为加水量(A)，提取时间(B)和提取次数(D)，确定提取的最佳条件。

2.1.3 按照处方称取各药材，共9份，按表1正交试验设计方案进行提取，计算出膏率。

表1 因素水平表

2.2 黄芪甲苷含量测定

2.2.1 色谱条件 Diamonsil C18色谱柱(200 mm×4.6 mm，5.0 μm)；以乙腈-水(32∶68)为流动相，流速为1.00 mL/min；柱温：30 ℃;蒸发光散射检测器参数；载气流速2.1 L/min，漂移管温度为100 ℃。

2.2.2 对照品溶液的制备[10]精密称取黄芪甲苷对照品加甲醇制备0.314 mg/mL的对照品溶液。

2.2.3 供试品溶液的制备[11]精密称取样品干膏2.0 g，置锥形瓶中并精密加入甲醇100 mL，加热回流1 h，冷却，过滤。用甲醇少量多次洗涤药渣，合并滤液，蒸干，残渣加水20 mL使其溶解。加水饱和正丁醇液40 mL，振摇提取3次，合并正丁醇液，加氨水40 mL，洗涤3次。弃去氨液，蒸干正丁醇液，残渣用甲醇溶解，作为供试品溶液。

2.2.4 标准曲线的绘制 分别精密吸取黄芪甲苷对照品储备溶液4、8、10、12、16、20 μL，注入高效液相色谱仪，以黄芪甲苷进样质量的对数为横坐标，峰面积的对数为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程为Y=1.6442X+5.3244，r=0.9999，在1.256～9.420 μg范围内线性关系良好。结果见表2和图1。

表2 黄芪甲苷线性关系考察

2.2.5 测定法 采用高效液相色谱法，精密吸取供试品溶液20 μL，记录峰面积，计算黄芪甲苷的提出量。

2.2.6 测定结果 见表3。

表3 正交试验设计结果

表4 方差分析结果

查方差分析表，α=0.05F0.05(2，2)=19.00。

通过表3极差r可知，三个影响因素的影响大小是：D>A>B，即提取次数影响最大，而提取时间影响最小。直观分析可得，较佳提取工艺条件为：A3B2D3，即14倍量水，提取3次，每次1.0 h。从表4方差分析可知，B和A因素没有显著性影响，D因素有显著性影响。综合考虑经济效益等因素，得出门氏芪元颗粒的最佳提取工艺为：A1B1D3，即10倍量水，提取3次，每次0.5 h。

2.2.7 工艺验证 按处方比例称取药材3份，按最佳提取工艺进行提取，按照供试品溶液的制备方法进行制备，记录峰面积，计算出膏率和黄芪甲苷的提出量，结果见表5。

表5 工艺验证结果

2.3 制剂成型工艺研究

2.3.1 制粒方法选择 湿法制粒[12]是当前最为广泛应用的制粒方法，在制粒之前将粘合剂或者湿润剂等添加到药粉中，将药粉制成湿润颗粒，其制粒效果较高。通过湿法制粒增强了颗粒的粘合性且颗粒容易成型。采用稠浸膏干燥，粉碎后以相应比例的辅料补足至处方量，混匀，制成颗粒。本制剂采用药粉∶辅料=1∶1。

2.3.2 润湿剂的选择 本复方在经过水煎煮浓缩后发现稠膏黏性较强，而且含糖量高。颗粒制剂过程中以一定浓度的乙醇为润湿剂，降低粘性和吸湿性便于颗粒成型。以手捏成团，轻压则散为原则筛选乙醇的浓度。结果见表6和图2～4。

表6 不同浓度乙醇对制粒的影响

图2 80%乙醇

图3 95%乙醇

图4 100%乙醇

因此，选择95%的乙醇做为润湿剂进行制粒。

2.3.3 吸收剂淀粉、糊精用量的选择 选择糊精和可溶性淀粉作为辅料进行处方筛选。结果见表7。

表7 不同辅料比与干浸膏粉的配比处方

2.3.4 颗粒成型性比较 将干浸膏粉按表表六中方法与相应辅料混匀，95%乙醇制粒。以筛分法[13]对颗粒进行测定，取平均值。结果见表8。

成型率=(过筛后颗粒的质量/过筛前颗粒的质量)×100% 。

表8 成型率测定

2.3.5 颗粒溶化性比较 精密称定的颗粒0.2 g，加入干燥恒重的5 mL离心管中，精密加入沸水5 mL，振荡5 min，3000 r/min离心15 min，弃去上清液，80 ℃进行干燥，精密称定重量，计算溶化率。结果见表9。

溶化率=溶化颗粒质量/颗粒质量×100%。

表9 溶化率测定

2.3.6 颗粒吸湿率的比较 在玻璃干燥器装入过饱和室温氯化钠溶液，置于25 ℃的恒温培养箱24 h，干燥器内部相对湿度为75%，在已恒重的称量瓶底部放入各处方颗粒，准确称重后置于装有过饱和氯化钠溶液的玻璃干燥器内(称量瓶盖打开)，放于25 ℃恒温培养箱，72 h后称定重量，计算颗粒吸湿百分率[14]。结果见表10。

吸湿百分率(%)=(吸湿后颗粒质量-吸湿前颗粒质量)/吸湿前颗粒质量×100%。

表10 吸湿率测定

2.3.7 堆密度的测定 将过筛后的质量作为M(g)并装入干燥的量筒中，轻轻振动，记录体积(V)，两者的比值即为堆密度。结果见表11。

堆密度=M/V。

表11 堆密度测定

2.3.8 休止角的测定 采用固定漏斗法，计算休止角tga=H/R.重复做5次，计算平均值。结果见表12。

表12 休止角测定

2.3.9 综合评分 根据表中综合评分可知，处方3号92.23分为最高分，故筛选最优原辅料配比为浸膏粉∶糊精∶淀粉=4∶1∶3，95%的乙醇进行制粒。见表13。

2.4 门氏芪元颗粒样品 见图5。

图5 门氏芪元颗粒

表13 综合评分

3 讨论

提取工艺的确定 采用正交试验和高效液相色谱法，以出膏率和黄芪甲苷在复方中的提出量为评价指标进行评价。最后确定的提取工艺为：10倍量水，提取3次，每次0.5 h。

颗粒成型工艺的确定 按最优原辅料配比，即处方浸膏粉∶糊精∶可溶性淀粉=4∶1∶3，以95%乙醇为润湿剂制粒。

门氏芪元颗粒来源于名老中医门九章经验方门氏芪元汤，临床效果良好，中药汤剂作为中医临床用药的主要剂型，可以随证加减、灵活组方，但携带、煎煮不便，汤液味苦量大，不易被接受。中药配方颗粒与传统汤剂相比不需要煎煮，服用时温开水配成冲剂即可，便于携带、保存方便；解决了传统中药保质期短、中药饮片易潮易虫蛀的缺点。

本方为复方，所含成分较多，若使用紫外检测波长检测杂质对色谱峰的干扰较大。而ELSD检测器作为一种通用型的的检测器，可检测挥发性低于流动相的任何样品，不需要样品含有发色基团。基线稳定仅对不挥发性物质颗粒进行检测，不存在紫外末端吸收的问题，流动相低温雾化和蒸发，对热不稳定和挥发性化合物亦有较高灵敏度，对温度变化不敏感，即使在梯度洗脱时基线也很平稳，所以本文最终确定了用 HPLC-ELSD方法对门氏芪元颗粒中的黄芪甲苷进行含量测定。

中药颗粒剂是以中药汤剂为原料，经过提取、分离、制粒、干燥、制粒过程完成，且成分较为复杂，为充分发挥中药的各种成分，提高中药颗粒的疗效，在中药颗粒剂提取、纯化分离、制粒过程中需认真仔细，中药颗粒剂发展迅速，可取代传统中药汤剂，满足人们用药治病的需求。