海南地区规模猪场猪伪狂犬血清流行病学调查

代 蕾

（海南省动物疫病预防控制中心，海南 海口571100）

伪狂犬病（pseudorabies，PR）是由伪狂犬病毒（pseudorabies virus，PRV）引起的一种可感染家畜以及其他多种野生动物的烈性传染病[1]， 猪是PRV 的主要宿主。临床上PRV 可引起妊娠母猪流产、产死胎、木乃伊胎及弱仔，仔猪出现腹泻以及神经症状[1]，是危害养猪业最严重的传染病之一。我国自1947 年首次报道该病以来，已经有20多个省市报道发生了该病，给我国养猪业造成了巨大的经济损失[2]。伪狂犬野毒包括Ge、gB、gI、gG、TK 等基因，其中gE 基因是PRV 的主要毒力相关基因[3]。gE 基因缺失疫苗是我国用于预防猪伪狂犬病的疫苗， 免疫该疫苗的猪不会产生gE基因抗体[4]。因此使用gE 基因抗体检测试剂盒能够检测出PRV 野毒抗体，使用gB 抗体检测试剂盒可以了解接种PRV 疫苗免疫保护情况。

为了调查海南地区规模化猪场伪狂犬病毒野毒感染情况，本试验在2018 年1月-5月选取了10 个猪伪狂犬gE 基因缺失疫苗免疫的规模化养猪场采集猪血清样品600 份，进行猪伪狂犬病病毒gB、gE 抗体检测，以期为海南各猪场猪伪狂犬病净化提供帮助。

1 材料与方法

1.1 样品来源

2018年1月-5月采集我省10 个(A、B、C、D、E、F、G、H、I、J) 规模化猪场(均免疫的是Bartha．gE 基因缺失疫苗， 未曾免疫过gE 基因未缺失疫苗)共600 份血清样品，每个场随机抽取采集10 份公猪血清、10 份母猪血清、30 份仔猪血清、10 份育肥猪血清。

1.2 检测试剂

IDEXX PRV-gE 检测试剂盒(批号：130312，美国IDEXX 公司)和IDEXX PRV-gB 抗体检测试剂盒(批号：130118，美国IDEXX 公司)。

1.3 主要仪器设备

离心机、微量加样器，购自德国Eppendorf 公司；iMARK 型酶标仪，购自美国BIO-RAD；自动洗板机，购自美国BIO-RAD。

1.4 检测方法

利用阻断ELISA（酶联免疫吸附试验）的方法，具体操作步骤详见说明书。

1.5 结果判定

检测每孔OD650的值，OD650阴性对照平均值减去OD650阳性对照平均值差必须≥0.30，否则结果不成立。

每孔OD650的值用S 表示，N 为阴性对照OD650的平均值。

如果S/N〉0.70 判定gB 或者gE 抗体结果为阴性；S/N≤0.60 为阳性。

2 结果与分析

2.1 10 个规模化猪场猪伪狂犬gE 和gB 抗体总体检测结果

10 个规模化猪场600 份血清PRV-gE 抗体、PRV-gB 抗体ELISA 检测结果见表1。由表1 可知，600 份样品中PRV-gE 抗体阳性样品有81份，PRV-gE 抗体阳性率为13.5%，说明猪场中存在野毒感染；600 份样品中PRV-gB 抗体阳性样品有444 份，PRV-gB 抗体阳性率为74%，说明猪场中PRV 免疫合格率基本达标， 猪场对PRV 病一定保护力。由表1 可知，A、F、G、H、I 场PRV-gE抗体阳性率均低于10%以下， 尤其是H 场PRV-gE 抗体阳性率为0，这些场开展猪伪狂犬净化工作具有很好的基础。

表1 10 个规模化猪场猪伪狂犬gE 和gB 抗体检测结果

2.2 不同阶段猪群猪伪狂犬血清学检测结果

从表2 可知，PRV gE 抗体阳性率最高的是育肥猪群（37%），其次是仔猪群（27%）和公猪群（12%），最低是母猪群（4%）；PRV gB 抗体阳性率最高为公猪（100%），其次是母猪（97%），育肥猪（63%）和仔猪（60.7%）较低。

表2 不同阶段猪群猪伪狂犬gE 和gB 抗体检测结果汇总

3 小结与讨论

本调查10 个集约化猪场的600 份猪血清检测的结果显示，伪狂犬病毒野毒(gE 基因)抗体平均阳性率为13.33%， 其中猪场野毒抗体最低为0%， 最高为51.66%， 而群体阳性率中母猪为4%，公猪为12%，仔猪为9%，保育猪为37%；伪狂犬中和(gB 基因)抗体平均阳性率为73.67%，其中猪场中和抗体最低为51.7%， 最高为90%，而群体阳性率中母猪为97%，公猪为100%，仔猪为60.7%，保育猪为63%。我省猪场存在野毒感染情况，PR 免疫效果在养殖场之间和群体间存在差异，规模化猪场要增加抗体检测频率，针对抗体水平较低的猪群，要尽快补免，及时淘汰感染PRV 的猪和免疫耐受猪， 逐步实现PRV 的净化。

2012年国务院办公厅印发《国家中长期动物疫病防治规划（2012-2020 年）》[国办发（2013）31号]要求，到2020 年全国所有种猪场猪伪狂犬要达到净化标准[5]。然而，由于PRV 出现变异、毒力返强等情况，PR 频发和PR 野毒感染居高不下[6]。通过本次调查已发现猪伪狂犬野毒感染的普遍性，因此应提高重视，加强防治。