黄连等6味中草药对耐药性鲍曼不动杆菌的抑菌作用研究

杨娟

【摘要】 目的 研究黄连等6味中草药对耐药性鲍曼不动杆菌的抑菌作用。方法 选择黄连、黄芩、黄柏、千里光、白头翁和金银花， 通过水煎法和醇提法对有效成分进行提取， 之后采用K-B法进行上述6味中草药提取物的测定， 比较三种不同浓度的菌液在不同提取方法下的6味中草药的抑菌直径。结果 当菌液浓度达到1.0g/L的时候， 6味中草药均存在有一定的抑菌作用。与菌液浓度为1.00 g/L时， 当菌液浓度为0.25、0.50 g/L时， 6味中药物的抑菌直径较大， 差异具有统计学意义（P<0.05）;黄连、黄芩的抑菌直径均大于其余4味中草药， 差异具有统计学意义（P<0.05）。结论 黄连等6味中草药对于耐药性鲍曼不动杆菌均有不同程度的抑菌作用， 而菌液浓度升高其抑菌作用会存在不同程度的降低， 黄连和黄芩通过水煎法和醇提法提取的有效成分对耐药性不动杆菌的抑菌作用最强。

【关键词】 黄连;中草药;耐药性鲍曼不动杆菌

鲍曼不动杆菌是一种较为严重的获得性耐药性的条件致病菌， 均会在各个自然角落存在， 这种病菌容易导致患者出现感染， 在现如今是引起院内感染的主要病菌。近年来， 抗生素的滥用导致患者出现耐药不动杆菌率逐年提高， 所以临床上有存在多重耐药的鲍曼不动杆菌， 甚至会存在完全耐药的鲍曼不动杆菌， 给临床的干预工作带来较大的影响， 加重患者的病情和炎症反应[1]。在这种背景下， 为防止患者的病毒耐药性加重， 为临床工作提供有效的治疗， 已开始成为一个重要的课题。本文从中药角度分析黄连、黄芩、黄柏、千里光、白头翁和金银花6味中草药通过不同方法进行提取所得的提取物对于耐药性鲍曼不动杆菌的抑菌作用进行分析， 并将研究情况报告如下。

1 材料与方法

1. 1 材料 本研究的鲍曼不动杆菌菌株种本院检验科通过细菌分离式进行分离、鉴定和保存的菌种。而黄连、黄芩、黄柏、千里光、白头翁和金银花6味中草药均为本院的药房提供。其余材料包括M-H培养基、生物安全柜、培养皿、酒精灯、试管、镊子、无菌纱布、烧杯、无菌棉签、滤纸和卡尺等。

1. 2 方法

1. 2. 1 中药药液提取 分别采用水煎方法和醇提方法提取中药药液。采用水煎方法对药液进行提取时， 选择黄连30 g首先进行研磨处理， 并且加入到300 ml蒸馏水中浸泡大约1 h， 再选择文火煎煮2 h， 对枝叶进行收取。选择无菌纱布进行过滤， 再加入水300 ml， 进行加热， 直到水分收缩到30 ml为止， 进行装瓶加盖， 采用高压灭菌0.5 h后取出备用。选择同样的方法对其余的5味药材进行水煎提取。

采用醇提方法进行提取时， 对黄连等6味中草药需要先进行干燥， 之后再次进行研磨。通过75%的酒精6倍回流处理， 然后进行2次的提取， 将酒精的浓度进行减压， 并且缩成1∶1的药液。

1. 2. 2 藥敏纸制作 应用打孔器对定性滤纸进行打孔， 保证滤纸形成直径为6 mm的圆形小纸片， 通过30 min的高压灭菌处理后， 将小纸片放入烘烤箱中进行烘干处理， 当完全干燥后， 则制备的滤纸片浸泡在中草药中进行相关处置， 使滤纸片完全吸收药液以后， 再次进行烘干， 将两种提取液的滤纸片均进行无菌保存。

1. 2. 3 菌液制作 需要将相关菌株接种在琼脂平板上， 然后将其放在37℃的温度下进行24 h的孕育， 对单个菌落需要接种在培养基里， 同时在37℃的温度下， 进行24 h的培 养， 分别接种无菌生理盐水， 试管中将浓度校正为0.25、0.50、1.00 g/L三档备用。

1. 2. 4 体外抑菌试验 采用K-B法进行体外抑菌试验。根据M-H琼脂粉38 g配备1000 ml蒸馏水， 制成琼脂培养基， 并且将其放在三角烧瓶中进行高压灭菌， 每个平板大约25 ml 分配。之后通过对无菌棉拭子的应用， 对相关菌液进行选择， 试管内壁通过无菌棉拭子旋转， 将多余菌液挤出， 在琼脂平板表面均匀进行反复3次的涂抹进行接种处理， 然后旋转平板60°/次， 沿着平板内壁， 再均匀地进行1周的涂抹， 对 3种梯度， 分别需要制作相关的平板。并且保证在室温环境下进行5 min的干燥， 放置在酒精灯前或者生物安全柜中， 通过无菌镊子将制好的药敏纸片贴在平板的琼脂表面进行压实， 在培养箱37℃的温度中进行抚育， 时间大约为24 h， 对于抑菌直径进行测量和记录。为确保实验数据的准确性， 进行3次抑菌试验， 取平均值作为最终结果[2]。

1. 3 观察指标 对三种不同浓度的菌液在不同提取方法下的6味中草药的抑菌直径进行比较。

1. 4 统计学方法 采用SPSS25.0统计学软件对研究数据进行统计分析。计量资料以均数±标准差（ x-±s）表示， 采用t检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

对于水煎方法所提取的药液， 黄连、黄芩、黄柏、千里光、白头翁和金银花等中草药在0.25、0.50、1.00 g/L浓度下的抑菌直径分别为（13.41±4.20）、（13.32±5.03）、（11.66± 5.02）mm， （11.42±2.83）、（10.41±4.67）、（9.07±6.01）mm， （7.01±1.84）、（6.80±1.04）、（6.85±1.75）mm， （7.41±3.08）、（8.25±3.12）、（6.91±1.68）mm， （9.41±3.41）、（9.32±3.67）、（8.82±3.27）mm， （7.91±2.18）、（7.82±2.85）、（6.91±1.43）mm; 对于醇提方法所提取的药液， 黄连、黄芩、黄柏、千里光、白头翁和金银花等中草药在0.25、0.50、1.00 g/L的浓度下抑菌直径分别为（13.51±4.37）、（13.40±4.93）、（11.74± 4.98）mm， （11.42±2.83）、（10.91±3.67）、（9.17±6.02）mm， （7.07±1.82）、（6.82±1.02）、（6.82±1.74）mm， （7.91±2.10）、（8.32±3.15）、（7.01±1.66）mm， （9.51±3.08）、（9.42±3.59）、（8.81±3.25）mm， （8.01±2.21）、（7.91±2.80）、（7.07±1.37）mm。