武汉地区新生儿α-地中海贫血筛查及影响因素分析

周斌 熊乾 蔡文倩 沈姗姗 胡晞江

华中科技大学同济医学院附属武汉儿童医院（武汉市妇幼保健院）（武汉430014）

地中海贫血是我国发病率较高的单基因遗传病之一，其中α-地中海贫血是最常见的一种类型［1］，据文献报道，广西、广东、海南和福建等都是α-地中海贫血高发地区［2-3］。新生儿α-地中海贫血筛查敏感指标是γ-珠蛋白形成的γ4（Hb Bart′s）的百分含量，其含量变异程度在一定程度可指示其基因类型，Hb Bart′s 含量不仅与携带的基因类型相关，可能还受其他因素影响［4，5］。目前我国中部地区对α-地中海贫血报道较少，其Hb Bart′s 水平对新生儿α-地中海贫血基因类型预测也很少涉及。

1 资料与方法

1.1 一 般资 料 2016年11月1 至2017年10月20日武汉市各助产机构采集的新生儿滤纸干血斑标本99 333 例，排除各种不合格标本58 例，共收集合格标本99 275 例。新生儿滤纸干血斑通过采集新生儿足跟血获得，血斑直径＞8 mm。产妇及新生儿人口学特征见表1。产妇平均年龄29.0 岁，大多数产妇孕周大于37 周，新生儿男296 例，女250例。Hb Bart′s 平均值为1.49%，Hb Bart′s 含量不成正态分布，且未找到合适的方法将其转换成正态分布的变量，所以本研究中的统计方法均为非参数检验。

表1 产妇及新生儿人口学特征Tab.1 Demographic characteristics of pregnant woman and newborns

1.2 方法

1.2.1 筛查方法 运用Sebia 公司Capillarys 2 neonat fast 毛细管电泳仪系统，检测新生儿滤纸干血斑中血红蛋白A（Hb A）、抗碱血红蛋白（Hb F）、血红蛋白A2（Hb A2），γ 四聚体（Hb Bart′s）及其他常见的血红蛋白变异体，Hb Bart′s 含量大于0 或Hb Bart′s 出峰区域检出血红蛋白即判断为筛查阳性。

1.2.2 确诊方法 采用LUMINEX MAGPIX 液相芯片悬浮技术，检测中国人常见的3 种α 珠蛋白基因缺失突变［--（--SEA）、-α（3.7）、-α（4.2）］，3 种α 珠蛋白基因点突变（CS142、QS125、WS122）；一种或多种基因突变同时发生的新生儿即可确诊为基因突变携带者或患者。

1.3 统计学方法 用SPSS 18.0 软件进行统计分析。采用描述性统计方法对研究对象的人口学特征，Hb Bart′s 水平分布特征进行分析。采用非参数检验来分析单个因素对Hb Bart′s 含量的影响。

2 结果

2.1 α-地贫筛查和基因检测结果 在99 275 例新生儿滤纸干血斑标本中，筛出含Hb Bart′s 新生儿1 263 例，筛查阳性率为1.27%，在筛查阳性新生儿中Hb Bart′s 含量最大值为14.5%，最小值为0.1%，均数1.4%；筛查阳性者召回1 233 例，召回率97.6%，召回新生儿中有671 例（男375 例，女296例）与新生儿疾病筛查系统进行了全面信息匹配，使其基因检测结果与新生儿筛查结果对应，其余新生儿因家属未提供产妇个人信息未能匹配新生儿筛查结果。671 例经α-地中海贫血相关基因检测，共检出546 例新生儿有α-地中海贫血基因突变，其Hb Bart′s 含量最小值0.1%，最大值11.6%，男296 例，女250 例，α-地贫筛查阳性预测值为81.4%。随机抽取100 例筛查阴性的标本，经α-地中海贫血相关基因检测检测后发现1 例-α3.7/αα，假阴性率1%。

在546 例α-地中海贫血基因突变新生儿中，检出14种基因型，其中--SEA/αα，299 例，占54.8%；-α3.7/αα，150 例，占27.5%；-α4.2/αα，24 例，占4.4%；ααCS142/αα，18 例，占3.3%；ααQS125/αα，16 例，占2.9%；-α3.7/-α3.7，4 例，占0.7%；ααWS122/αα1 例，占0.2%；--SEA/-α3.7，2 例，占0.4%；其他基因型26 例，主要是α 复合β 地中海贫血，占4.8%；由此可知武汉地区新生儿α-地中海贫血基因突变主要以--SEA/αα和-α3.7/αα为主。

2.2 Hb Bart′s 含量的阳性预测值 召回的671例初筛阳性标本中，有125 例经基因检测后无α-地中海贫血常见的6 种突变。按Hb Bart′s 含量分为4 组，0.1% ～0.5%组，0.6% ～1%组，1.1% ～2%组，≥2.1%组。其Hb Bart′s 含量在0.1～0.5%之间的新生儿未检出6 种α-地中海贫血常见基因突变者96 例，检出基因突变者230 例，阳性预测值71%；0.6% ～1.0%之间未检出基因突变者10 例，检出基因突变者45 例，阳性预测值为78%；1.1% ～2%之间检出基因突变者89 例，未检出基因突变者8 例，阳性预测值91.8%；≥2.1%以上的检出基因突变者192例，未检出基因突变者11例，阳性预测值94.6%；经卡方检验发现不同含量Hb Bart′s 组间在阳性预测值中存在统计学差异。提示Hb Bart′s 含量越高阳性预测值越高。见表2。

2.3 Hb Bart′s 含量的影响因素分析

2.3.1 基因类型对新生儿Hb Bart′s 含量的影响 在检出的α-地中海贫血患儿中，不区分产妇年龄，孕周和新生儿性别时，比较不同基因突变类型新生儿检出的Hb Bart′s 含量是否有统计学意义，由于ααWS122/αα，-α3.7/-α3.7，--SEA/-α3.7基因突变类型的例数较少，所以分析过程中仅包含--SEA/αα，-α3.7/αα，-α4.2/αα，ααCS142/αα，和ααQS125/αα 这5种基因型。--SEA/αα，-α3.7/αα，-α4.2/αα，ααCS142/αα，ααQS125/αα这5 种基因型对应的Hb Bart′s 含量分别为2.50±0.97%，0.36±0.1%，0.36±0.18%，0.82±0.29%，0.45±0.22%，经非参数检验，认为不同基因突变型α-地中海贫血的新生儿Hb Bart′s 含量不同。见表3。

表2 Hb Bart′s 含量的分布Tab.2 Distribution of Hb Bart′s例（%）

表3 不同基因型地中海贫血患者Hb Bart′s（%）含量分析Tab.3 Analysis of Hb Bart′s(%)for thalassemia

2.3.2 新生儿性别、孕周对Hb Bart′s 含量的影响 在检出的α-地中海贫血患儿中，男296 例，女250 例，检出Hb Bart′s 含量的均值分别为1.55%和1.42%。经非参数检验发现男性和女性新生儿α-地中海贫血患儿Hb Bart′s 含量无统计学意义（P＞0.05）。在检出的α-地中海贫血患儿中，根据孕周分为早产儿（孕周＜37 周）和正常孕周（孕周≥37周）组两组，检出Hb Bart′s 含量的均值分别为1.68%和1.61%。经非参数检验发现早产儿和正常孕周新生儿Hb Bart′s 百分含量无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

3 讨论

地中海贫血（thalassemia），又称海洋性贫血和珠蛋白合成障碍性贫血，简称地贫。它是一种单基因隐性遗传病，也是全球分布最广，累计人群最多的一种单基因病之一。地中海贫血有α、β、γ、δ四种类型，前两种最常见，其诊断主要依靠基因检测和血红蛋白鉴定，目前毛细管血红蛋白电泳是血红蛋白成分分类主要手段之一［6-8］。

本研究是将新生儿滤纸干血斑全血进行血红蛋白毛细管电泳来筛查地中海贫血，研究结果显示：99 275 例新生儿干血斑标本中，检出Hb Bart′s新生儿1 263 例，筛查阳性率为1.27%，召回1 233例，其中671 例能匹配地中海贫血筛查结果，此部分初筛阳性新生儿共检出546 例α-地中海贫血基因突变新生儿，基因突变率81.3%，比广东省台山梁逸敏等［9］报道的通过毛细管电泳仪筛查阳性率87.80%的基因突变率略低，这是因为本实验室考虑到湖北武汉地区重型和中间型α-地中海贫血基因突变患儿可能比广东等高发区占比少，而轻型和静止型占比相对较多，因此，在制定判读标准时，将Hb Bart′s 含量大于0 或Hb Bart′s 出峰区域检出血红蛋白均以α-地中海贫血初筛阳性结果报告，所以初筛阳性的标本中可能包含部分异常血红蛋白病患儿。另外81.3%的筛查符合率比部分使用HPLC 技术检测α-地中海贫血的符合率要高［10］，说明毛细管电泳筛查新生儿α-地中海贫血效果好。武汉地区主要检出--SEA/αα，-α3.7/αα，-α4.2/αα，ααCS142/αα 和ααQS125/αα 五种基 因 突变型，分别 占54.8%，27.5%，4.4%，3.3%，2.9%。与贵州，云南，广东，广西等地区α-地中海贫血分布有少许差异［11-14］，本次未检出中间型α-地中海贫血患儿可能是收集标本例数较少而中间型α-地中海贫血患儿患儿发病率较低。

对671 例初筛阳性标本的Hb Bart′s 分组，经卡方检验认为不同含量Hb Bart′s 组间在阳性预测值中存在统计学差异，Hb Bart′s 含量越高阳性预测值越高。这可能是因为新生儿α-地中海贫血初筛是通过滤纸干血片溶脱全血后再进行检测，检测前滤纸干血片已放置了3 ～10 d，溶脱的血红蛋白标本在保存过程中很可能发生不同降解，小的降解碎片可能导致基线不平，若发生在Hb Bart′s 出峰区域就容易被毛细血管电泳仪系统判续为Hb Bart′s，即少量降解片段通常导致较低百分含量假性Hb Bart′s，且不容易与真正Hb Bart′s 峰型相区别，导致假阳性发生。因此当Hb Bart′s 含量越高其阳性预测值越高［15］。

由表3可见，不同基因突变型地中海贫血新生儿Hb Bart′s 含量有统计学意义，说明Hb Bart′s 含量随着基因突变型不同发生变化。其中Hb Bart′s含量水平由高至低依次为三个α 基因缺陷的--SEA/-α3.7型，两个α 基因缺失的--SEA/αα 基因型、一个α 基因突变的ααCS142/αα 和ααQS125/αα 基因型，一个α 基因缺失的-α4.2/αα 和-α3.7/αα，所以可根据Hb Bart′s 含量大致预测基因缺陷程度。检测结果还发现-α3.7/-α3.7基因突变型Hb Bart′s 含量变化跨度大，4 例-α3.7/-α3.7基因突变的新生儿，其含量分别为1.2%，11.2%，2.6%，1.7%，提示-α3.7/-α3.7基因突变型可能存在较大个体差异，还需要更多的数据和跟踪观察。在检出的α-地中海贫血患儿中，根据孕周和性别分组均无统计学意义，说明孕周和性别对Hb Bart′s 含量没有影响。

因此，通过新生儿Hb Bart′s 含量分析筛查α-地中海贫血具有简单、高效、准确等优势，并且能实现早期初步判断基因突变类型，值得广泛推广，孕周和性别不影响Hb Bart′s 含量，其主要受基因突变类型影响。