麦草畏原药高效液相色谱分析方法试验

2019-06-20李玉君钟楚欣陈家豪张宏涛

广东蚕业 2019年4期

李玉君　钟楚欣　陈家豪　吴　妍　张宏涛

麦草畏原药高效液相色谱分析方法试验

李玉君钟楚欣陈家豪吴妍张宏涛

（中科英海科技有限公司广东佛山 528000）

麦草畏是一种安息香酸系列除草剂。采用高效液相色谱法，以乙腈＋0.1%磷酸（60:40）为流动相，使用ACEExcel 5 SUPERC18不锈钢柱，流速为1.0 mL/min，紫外检测器，检测波长为220 nm。结果表明，该分析方法的线性相关系数为0.9 999，标准偏差为0.210，平均回收率为99.2%。结果表明，麦草畏保留时间为4.963 min，线性相关系数为0.999 987和0.999 971。在10个添加水平范围内，回收率分别为98.5～100.5 %和100.3～100.7 %，相对标准偏差( RSD）分别为1.05 %和0.178 %，方法检出限为0.00 704 mga.i./L。该方法简单、快速、灵敏度高、准确度好，能够满足蔬菜中麦草畏残留量的检测要求。

麦草畏；原药；高效液相色谱；分析

麦草畏（dicamba），化学名称为3,6-二氯-2-甲氧基苯甲酸，商品名为百草敌、麦草威，由美国维尔斯科尔化学公司（VelsicolChemicalCorp）于1961年创制，1963年在加拿大取得登记，1967年首次作为除草剂报道并取得美国登记，20世纪90年代传入我国[1]。麦草畏属安息香酸系列除草剂，作用机理属于激素型除草剂[3]。据统计，2016年全球麦草畏市场规模可达2.9亿美元，美国是麦草畏应用第一市场，中国是全球第二应用市场，主要登记于转基因种子（大豆、玉米）[2]。

麦草畏，纯品为白色结晶，分子量为221.04 ，易溶于水，在农田生态系统中容易发生迁移而引起土壤和地下水等污染，对水质安全和人类健康造成危害[3-4]。因此，高效的、准确的测定方法是研究水中麦草畏的残留的关键。

1 试验部分

1.1 试剂与仪器

麦草畏标准品，乙腈：色谱纯；磷酸：色谱纯；实验用水为超纯水。AllianceE2695 型高效液相色谱仪（Waters，具紫外检测器和自动进样器）；Empower色谱工作站；色谱柱：ACEExcel 5 SuperC18 ，250 mm×4.6mm（5μm），电子分析天平：型号CPA225 D，赛多利斯，精度0.00001。

1.2 液相色谱操作条件

流动相制备：吸取1.00 mL磷酸，用水定容至1000 mL，摇匀，配制得到0.1%磷酸溶液，过滤膜过滤脱气后备用。流速：1.00 mL/min；柱温：35 ℃；检测波长：220 nm；进样体积：20.0 μL，流动相：乙腈：0.1 %磷酸溶液（60:40），保留时间：约4.9 min。

麦草畏标样的高效液相色谱图见图1。

图1 麦草畏标样高效液相色谱图

1.3 测定步骤

1.3.1 溶液的配制

分别准确称取麦草畏标样（98 %）0.01 g（精确至0.0002 g），置于10 mL容量瓶中，用乙腈溶解定容，摇匀，配制成母液1000 mg/L。

1.3.2 标准曲线设计

用乙腈水溶液（V乙腈∶V超纯水=1∶1）将母药进行稀释，配制一系列标准工作溶液，分别为：0.0100 mg /L，0.0200 mg/L，0.0500 mg /L，0.100 mg /L，0.200 mg/L，0.500 mg/L，1.00 mg/L，2.00 mg/L，5.00 mg/L，10.0 mg /L。按1.2方法每个浓度采集3针。

2 结果与讨论

2.1 色谱柱的选择

HPLC检测麦草畏需要用到0.1%磷酸溶液作为流动相。ACEExcel 5 SuperC18 色谱柱具有扩展pH稳定性的超惰性色谱柱，可用于pH1.5~11.5 之间的LC/MS兼容缓冲液，用于麦草畏的测定时，稳定性高，重现性好。

2.2 色谱条件的选择

通过HPLC的紫外检测器（UV）进行全波长扫描，得到麦草畏的紫外波长扫描图。麦草畏在200～400 nm间有较大的吸收。考虑到杂质响应值的影响，将检测波长定220 nm。

根据麦草畏的理化性质，选择以乙腈＋0.01 %磷酸溶液为流动相，以ACEExcel 5 SuperC18 为色谱柱，柱温35 ℃，将不同体积比的流动相在色谱柱上进行试验。当乙腈与0.01 %磷酸溶液以60∶40 的比例作流动相，流速为1.000 mL/min时，麦草畏响应值较高，且基线平稳，峰形对称。

2.3 分析方法的线性相关性试验与检出限

在设定的色谱条件下，对不同浓度的麦草畏标准溶液进行HPLC测定。使用Empower 3软件采集并处理图谱数据，以麦草畏有效成分浓度为横坐标，峰响应值为纵坐标绘制标准曲线。

表1 　麦草畏线性结果

结果表明，在0.0100 mg/L~10.0mg/L范围内，麦草畏含量与色谱峰面积呈良好的线性关系。以3倍的信噪比确定麦草畏的最低检出限为0.00704 mg/L。

2.4 分析方法的专属性试验

取空白溶剂（乙腈水溶液（V乙腈：V超纯水=1：1））、标准溶液（10.0 mg/L）和供试品试验溶液（10.0 mg/L）经0.22 μm滤膜过滤后进样测试，各采集1针。按1.2的方法进行测定麦草畏的含量。

2.5 分析方法的精密度试验

取浓度0.01 mg/L和10.0 mg/L分别连续进样6针，测得麦草畏的标准偏差分别为1.864 和0.210 。

表2　精密度试验结果

2.6 分析方法的添加回收与重复性试验

麦草畏在25 ℃条件下在水中的溶解度为6.5 g/L，本实验设计1个空白对照组和2档试验组，每档浓度5个重复。对空白对照组与2档试验浓度组一共11 个前处理后得到的样品各采集1针。基质为曝气自来水。分别往两个两个试验组添加一定量的麦草畏标样。前处理方法：取1~2 mL试验溶液经0.22 um过滤膜过滤后，按1.3方法进行测定麦草畏的含量。测得麦草畏的平均回收率分别是98.5~100.5 %和100.3~100.7 %，相对标准偏差分别为1.05 %和0.178 %。如表3所示。