治疗母猪子宫内膜炎中药组合物的体外抑菌效果研究

刘洪明，郭 峰，周灵芝，杨 磊，孙汝江

（1.烟台市农业综合执法支队，山东 烟台 264000；2.栖霞市动物疫病预防与控制中心，栖霞 265300；3.烟台开发区农业与海洋渔业局，烟台 264006；4.烟台海纳生物技术研究所，烟台 264000；5.中国农业大学烟台研究院，烟台 264000）

母猪子宫内膜炎是指母猪在配种、分娩及难产助产过程中因操作不当，导致细菌入侵引起子宫内膜感染的一种常见产科疾病，是母猪繁殖障碍综合征的一种主要类型。本病的病因极为复杂，国内外学者将其大致归结为原发的细菌感染、母猪患疾继发细菌感染、公猪患疾引发母猪感染以及饲养过程中不严格执行操作规程等几个方面。目前，各地均投入大量人力物力用于本病的防治，但发病率仍居高不下，归根结底是因为本病病原繁多，且抗生素和消毒药的不规范使用，极易导致耐药性的产生，难以达到预期治疗效果，即使能够抑制细菌、病毒的繁殖，也无法清除病猪体内的毒素，使病猪出现病情反复、休克甚至昏迷死亡。本试验研究一种治疗母猪子宫内膜炎的中药组合物体外抑菌效果，旨在为治疗母猪子宫内膜炎提供一种新思路。

1 试验材料

1.1 试验时间与地点

试验于2018年3—11月在烟台海纳生物技术研究所进行。

1.2 试验菌液

大肠杆菌10株、金黄色葡萄球菌10株、无乳链球菌10株，均从已确诊患子宫内膜炎的病猪分离制得。

将保存于斜面的大肠杆菌、金黄色葡萄球菌接种于普通琼脂平板，无乳链球菌接种于血平板，37℃培养24 h；挑取数个大肠肝菌、金黄色葡萄球菌的菌落接种于MH肉汤，无乳链球菌接种于血清肉汤，37℃培养24 h，分别用灭菌生理盐水稀释，以0.5麦氏比浊管比浊，调其含菌量为1×108CFU/mL。然后再用灭菌生理盐水将大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、无乳链球菌稀释1 000倍，使其浓度为1×105～1×106CFU/mL备用。

1.3 中药组合物

中药组合物由以下成分混合均匀制备而成：海桐皮水提物4 g、老鹤草水提物1 g、透骨草水提物3 g、海风藤水提物1 g。中药原药材均购自烟台市药材公司。

海桐皮水提物、老鹤草水提物、透骨草水提物和海风藤水提物制备方法相同，具体为：将传统煎煮法略作改进，生药粉碎，颗粒度为20～200目，得生药粉末，按药水比 1∶15～25，得到浸膏，并制成粉末。

1.4 试验动物

健康、清洁级昆明小鼠（20±2）g，雌雄各半，由山东省实验动物中心提供，合格证号SYXK（鲁）20140010。试验开始前，于实验室饲养7 d以了解其正常活动情况和健康状况，适应本试验环境。

2 试验方法

2.1 小鼠致病性试验

将大肠杆菌菌株、金黄色葡萄球菌菌株及无乳链球菌菌株分别接种于肉汤培养基，37℃培养24 h后作为供试菌液。每株菌的菌液通过腹腔途径接种昆明鼠，0.5 mL/只，观察结果。

2.2 抑菌作用测定

在表面均匀涂布供试菌液的琼脂平板上打孔，每板3孔，孔径6 mm，孔间距＞20 mm。将浓度为1 g/mL的单药提取物和中药组合物提取物溶液分别加于孔中，将接种大肠肝菌、金黄色葡萄球菌的琼脂平板在37℃恒温培养箱中培养18 h，无乳链球菌培养24 h，观察结果，试验重复3次。抑菌效果按照《中药药理学》的标准判定，抑菌圈直径≥20 mm为极度敏感，14 mm≤抑菌圈直径＜20 mm为高度敏感，10 mm≤抑菌圈直径＜14 mm为中度敏感，10 mm以下为低度敏感[1-3]。

2.3 最小抑菌浓度测定

取灭菌试管10支，第1—9管中各加入无菌肉汤或血清肉汤培养基2 mL（大肠杆菌、金黄色葡萄球菌接种于肉汤培养基，无乳链球菌接种于血清肉汤），然后于第1管中加入1 g/mL的单药或组合物溶液2 mL，混匀后取出2 mL加入第2管，依此类推，直到第8管中取出2 mL弃去，第9管为肉汤对照组，第10管为药液对照组。分别于第1—9管加入供试菌液0.1 mL，摇匀，置37℃恒温箱中培养18 h，不出现浑浊的最高药物稀释倍数为该药的最小抑菌浓度（MIC）。

3 试验结果

3.1 小鼠致病性试验结果

小鼠接种后6～48 h全部死亡，剖检、涂片染色、镜检，从小鼠体内分离到与接种菌株相同的细菌，表明这3种菌为母猪子宫内膜炎的病原菌。

3.2 抑菌圈直径测定结果

中药组合物对大肠杆菌、无乳链球菌、金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径分别是（26.09±0.50）mm、（16.87±0.65）mm、（23.13±0.22）mm；4 种单药对大肠杆菌、无乳链球菌、金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径详见表1。

表1 3株细菌的抑菌圈直径测定结果 mm

3.3 最小抑菌浓度测定结果

中药组合物对大肠杆菌、无乳链球菌、金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度（MIC）分别是31.25 g/L、31.25 g/L和15.625 g/L；4种单药对大肠杆菌、无乳链球菌、金黄色葡萄球菌的MIC详见表2。

表2 3株细菌的最小抑菌浓度（MIC）测定结果 g/L

从试验结果可以看出，中药组合物对3种病原菌的抑菌圈直径显著大于4种单药中任何一种单药的抑菌圈直径，且其MIC显著小于3种单药中任何一种单药的MIC，由此可以证实中药组合物对母猪子宫内膜炎病原菌的抑制作用强于海桐皮水提物、老鹤草水提物、透骨草水提物和海风藤水提物四者单用对母猪子宫内膜炎病原菌的抑制能力。

4 讨论

本试验通过4种具有抑菌抗炎作用的中药联合用药，合理配伍、增效减毒，在体外对母猪子宫内膜炎致病菌有很好的抑制作用。试验所用的中药组合物包括海桐皮、老鹤草、透骨草、海风藤。方剂中的海桐皮，味苦、辛，性平，归肝、肾经，具有祛风湿、通经络、杀虫止痛等功效。现代药理研究表明，海桐皮有镇静镇痛、抗溃疡、抗缺氧等作用，主治胀满下疾、温病发热，热毒痈疡和肿瘤等症。老鹤草，味苦、微辛，性平，归肝、肾、大肠经，能祛除风湿，常用于风湿痹痛。老鹤草提取物的灭菌水溶液在体外对福氏痢疾杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌均有抑制作用。透骨草，味甘、辛，性温，入肺、肝二经，有活血化瘀、利尿解毒、通经透骨之功效，对于一身上下，心腹腰膝，内外各种疼痛，均可选用该品治之，取其辛温善走，活血利气之功，血气通则不痛。海风藤，味辛、苦，性微温，归肝经，能祛风湿、通经络、止痹痛，用于风寒湿痹，肢节疼痛，筋脉拘挛，屈伸不利。

本中药组合物的配伍原则是“增效减毒”，方中海桐皮、透骨草活血止痛，海风藤、老鹤草温经散寒，四药相伍，全方得以标本兼治、扶正祛邪，全面调整、平衡阴阳。各药相伍，共同达到活血止痛、温经散寒的作用，且调整体内气血运行，可以快速缓解病猪疼痛等症状，修复子宫内膜。中药组合物对母猪子宫内膜炎病原菌的抑菌圈直径大于4种单药中的任何一种，而最小抑菌浓度则小于4种单药中的任何一种，因而可证实中药组合物对母猪子宫内膜炎病原菌的抑制作用强于4种单药水提物分别对母猪子宫内膜炎病原菌的抑制作用之和。