青海省共和县藏羊住肉孢子虫感染情况调查

(青海大学农牧学院,青海西宁 810016)

住肉孢子虫病是由肉孢子虫科肉孢子虫属(Sarcocystis)原虫引起的一种食源性人兽共患寄生虫病,呈现世界性分布,感染率较高[1]。住肉孢子虫具有致病性,寄生在宿主肌肉中形成包囊,可引起贫血、厌食、消瘦、发热、肌肉炎症、乳产量下降、流产,甚至死亡。虫体包囊在肌肉中寄生使大量肉品废弃,造成畜牧业经济损失,同时也危及到人类肉食品安全。青海地区住肉孢子虫病流行情况较为严重,感染率为53.7%～100%,每0.1 g 肉样中包囊感染强度为1～997 个[2];共和县为青海省海南藏族自治州州属五县之一,是青海藏区人口较多、地域辽阔、畜牧业经济比重较大的一个县,为了解共和县藏羊住肉孢子虫感染情况,为今后共和县藏羊住肉孢子虫病的防控、肉品质量安全工程及防治工作提供基础数据。

1 材料与方法

1.1 材料 2017 年10 -12 月,随机采集共和县屠宰场藏羊食道肌、膈肌、心肌3 个部位肉样各10 g,共收集食道肌512 份,膈肌32 份,心肌32 份。编号分装于自封袋中,-20 ℃保存待检。

1.2 方法

1.2.1 压片镜检 剥离肉样(膈肌、心肌、食道肌)表面肌膜、脂肪,肉眼观察肌肉表面是否存在白色米粒状或点状疑似虫体存在。随机称取各肉样1 g,顺肌纤维方向剪碎,用载玻片压至半透明状态,光学显微镜下进行住肉孢子虫包囊检查,计数。任何肉样中发现住肉孢子虫包囊则判定为阳性,未发现包囊则判定为阴性。

1.2.2 染色切片 根据压片镜检结果,选择感染率较高的肉样进行H.E.染色,切片观察虫体形态,大小。

甲醛固定→组织修块→50%乙醇溶液脱水→75%乙醇溶液过夜→梯度乙醇溶液脱水→二甲苯脱乙醇→样品浸蜡→组织包埋→切片→摊片→烘片→二甲苯脱蜡→梯度乙醇溶液二甲苯→自来水脱乙醇→苏木素浸染→流水冲洗→伊红染色→梯度乙醇脱水→二甲苯脱乙醇→封片。

1.2.3 数据统计 感染率=(样品阳性数/受检样品总数) ×100%

2 结果

2.1 压片镜检结果 本次调查的青海省共和县藏羊食道肌512 份,膈肌32 份,心肌32 份。肉眼可发现食道肌中存在明显的住肉孢子虫包囊,如中插彩版图1 中箭头所示;虫体包囊压较大(平均大小4.47 mm×2.59 mm),为白色椭圆状或米粒状。压片镜检藏羊膈肌、心肌中住肉孢子虫包囊,如中插彩版图2、图3 中箭头所示,视野中住肉孢子虫包囊顺肌纤维寄生,大多呈长梭形、柳叶形,颜色呈乳白色或者灰白色,内部为颗粒状。

图1 食道住肉孢子虫(肉眼观察)

图2 膈肌住肉孢子虫 (100 ×)

图3 心肌中住肉孢子虫 (100 ×)

2.2 藏羊住肉孢子虫感染情况 青海省和县藏羊住肉孢子虫感染情况如表1 所示。此次随机抽样调查的576 份肉样中172 份判断为阳性,感染率为29.86%。不同部位感染率由高到低依次为心肌(96.88%)、膈肌(87.5%)、食道肌(22.07%); 172份样品中123 份轻度感染(包囊数<200),占检出总数的71.51%;48 份为中度感染(包囊数为200～500),占检出总数的27.91%;仅有1 份为重度感染(包囊数>500),占检出总数的0.58%。说明共和县屠宰藏羊的住肉孢子虫感染普遍,多为轻度与中度感染。

表1 食道肌、膈肌、心肌住肉孢子虫感染情况

2.3 膈肌、心肌H.E.染色结果 阳性样品膈肌、心肌经H.E.染色,结果如中插彩版图4、5 所示。图中肌肉呈红色,虫体为蓝色,虫体呈椭圆形或柳叶状,与肌肉纤维方向平行,外部包被肌肉纤维,内部呈颗粒状。中插彩版图4 所示为藏羊膈肌住肉孢子虫包囊,平均大小150 mm ×30 μm。中插彩版图5 所示为藏羊心肌住肉孢子虫包囊;平均大小120 mm×35 μm。

图4 膈肌住肉孢子虫 (40 ×)

图5 心肌中住肉孢子虫 (40 ×)

3 讨论

此次调查结果显示,青海省共和县藏羊住肉孢子虫感染率高,感染情况严重,阳性检出率为29.86%;不同部位感染率由高到低依次为心肌(96.88%)、膈肌(87.5%)、食道肌(22.07%);韩乐等[3]对青海六县绵羊住肉孢子虫感染情况调查结果(共和县感染率55%、感染强度35 个/g)比较发现感染率下降;冯成兰等[4]对共和地区屠宰牲畜住肉孢子虫感染情况调查结果心肌(69.76%)、膈肌(68.90%)、食道肌(76.79%)相比较,发现心肌与膈肌的感染率增高,食道肌感染率下降。刘永兰等[5]调查发现共和地区羊住肉孢子虫感染率为13.24%,感染强度40 个/g,与之相比感染率升高。巨金玲等[6]对青海部分地区藏羊膈肌住肉孢子虫检测结果(感染率70.73%、感染强度31 个/g)相比感染率下降。本调查被检的172 份样品中轻度感染占71.51%;中度感染为27.91%;重度感染为0.58%。从多个调查研究结果可分析得出,共和县屠宰藏羊的住肉孢子虫感染普遍,藏羊或绵羊感染率并不相同;不同时间、不同部位感染率出现波动,此情况为正常现象;其调查结果与被检饲养羊群是否投喂驱虫药物,中间宿主数目的变化等有关。

本次调查仅通过肉眼及光学显微镜观察肉样中虫体形态,测量虫体由大到小分别为食道肌(4.47 mm×2.59 mm)、膈肌(150 mm ×30 μm)、心肌(120 mm ×35 μm)。该方法只适于虫体形态结构的初步观察,无法根据其特点鉴定种属;需通过组织学方法结合分子生物学对虫体进行鉴定。2016年Damboriaenna[7]发现绵羊食道中有大量白色椭圆形巨型住肉孢子虫包囊,与本次调查的藏羊食道住肉孢子虫形态、大小相似,但本次试验仅通过肉眼观察虫体形态,无法以此为依据判定该虫为巨型住肉孢子虫。膈肌、心肌中住肉孢子虫在光学显微镜下观察,视野中虫体形态呈纺锤形、圆柱形、卵圆形等,颜色呈灰白色、乳白色,且膈肌虫体较大于心肌(150mm×30 μm>120mm×35 μm)。

目前,住肉孢子虫病无特效治疗药物,因此该病的防治主要依靠预防。青海共和地区牛羊住肉孢子虫感染率高与当地农牧民生活习惯和饮食习惯有关;如食用开锅肉、将屠宰牛羊脏器直接喂终末宿主犬,终末宿主与中间宿主牛羊接触,使住肉孢子虫形成完整的生活史,进行传播,造成恶性循环。所以生活卫生和饮食卫生方面应引起足重视并加强对牧场的管理。