六种常用渔药对宽体金线蛭的急性毒性试验

2019-05-21吴荣华孙龙龙唐红霞安小平沈财祥

淡水渔业 2019年3期

唐毅，吴荣华，袁渊，孙龙龙，唐红霞，安小平，沈财祥

(1.淡水鱼类资源与生殖发育教育部重点实验室，重庆400715；2.西南大学动物科技学院，重庆生态渔业产业技术研究院，重庆 400715；3.重庆多普泰制药股份有限公司，重庆400800；4.重庆铭实农业科技开发有限责任公司，重庆400800；5.天津农学院水产学院，300384)

宽体金线蛭(Whitmaniapigra)俗称蚂蟥，属环节动物门蛭纲颚蛭目水蛭科。宽体金线蛭在陆地淡水环境生长繁殖,主要分布于我国南方地区的淡水水域中，在北方部分地区也有少量存在。宽体金线蛭主要应用于医药上，是当今国内外紧俏的医用价值较高的名贵中药材，既可供中药处方配伍使用，也是许多制药厂生产的多种中成药(丸剂和胶囊等)中的重要成分[1]。据有关研究结果显示，宽体金线蛭的干体和鲜体均含有高抗凝活性物质，具有显著的抗凝活性[2]。主要用于防治心脑血管疾病，并具有较好的抗癌和保健功能。随着医药行业对宽体金线蛭需求量的逐年增多，受利益驱动，人们过度捕捉野生资源现象严重，从而导致自然资源量严重下降，甚至枯竭，因而其价格也随之成倍增长。基于此，近几年来，宽体金线蛭人工集约化养殖发展较为迅速，随之而来的有关病害也在逐年增多[3]，人们采用多种药物对病害进行防治，但因对药物的种类选择或用法用量不当，甚至滥用等，导致宽体金线蛭大量死亡。为了更好地了解宽体金线蛭对常用渔药的敏感性，实验选择二氧化氯、高锰酸钾、苯扎溴铵、戊二醛、伊维菌素和聚维酮碘作为研究对象，进行宽体金线蛭幼蛭的急性毒性试验，以期探讨对宽体金线蛭的用药剂量，为宽体金线蛭的自然保护和疾病防治提供一定的科学依据。

1 材料与方法

1.1 试验水蛭

试验水蛭来自重庆铭实农业科技开发有限责任公司水蛭养殖基地人工繁殖培育的宽体金线蛭幼蛭。随机选取规格相近，无病无伤、体质健壮的个体(平均体质量为(0.11±0.05)g/条)作为试验对象。试验前将宽体金线蛭置于塑料箱中暂养1周，暂养期间，每天换新水量占总水体的10%左右。

1.2 试验条件

试验在西南大学水产创新实验室进行。试验所用容器为50 L的长方形塑料箱，箱内放置用于防止水蛭外逃的筛绢网袋，并加入10 L经曝气24 h以上的自来水作为试验用水，其pH为6.5～7.0，溶解氧7.0～8.5 mg/L，水温26.5～28.5 ℃。为减少光照对水蛭的影响，试验在室内弱光条件下进行。

1.3 试验药品

二氧化氯：含40 %稳定性白色粉末二氧化氯(山西运城益康药业有限公司)；苯扎溴铵：含1.1%苯扎溴铵，浅黄色液体(山西运城益康药业有限公司)；聚维酮碘：含10 %聚维酮碘(运城春蕾药业有限公司生产)，红棕色晶状粉末；高锰酸钾：分析纯，含99.9 %高锰酸钾(成都市科龙化工试剂厂)，红褐色晶体；伊维菌素：含0.4 %伊维菌素(成都市科龙化工试剂厂)，白色晶状粉末；戊二醛：含50 %戊二醛(成都市科龙化工试剂厂)，无色透明油状液体。

1.4 试验方法

采用静水生物毒性试验法进行试验[4-5]。为排除残饵粪便对实验结果的影响,试验期间不投饵，每天测定水温。试验分为预试验和正式试验。预试验以取得24 h使水蛭全致死的最低质量浓度值及96 h无死亡的最高质量浓度值，并根据预试验结果确定出各试验药物浓度区间，然后按等对数间距设置5个浓度梯度组(表1)和1个空白组，每组设2个平行，每个平行随机放15条水蛭。试验前先用蒸馏水将试验药物配成母液，再根据各试验浓度梯度组的质量浓度吸取母液加入试验容器中，配成所需浓度的试验药液，药液现配现用。对具有较大挥发性的二氧化氯药物，在试验开始后每隔24 h更换1次试验液，以保证试验药物的浓度及药效，其余5种药品均不更换。药液配好后，将装有15条水蛭的筛绢网袋，放入试验箱并使其淹没试验液中。试验开始后连续8 h观察并记录水蛭的活动状况、中毒症状、死亡情况等，之后每8 h观测一次,并记录各质量浓度组水蛭24、48、72、96 h的死亡数和存活数，对死亡的水蛭及时捞除，放入曝气24 h的清水中。死亡判断标准为水蛭卷曲、蛭体僵硬，5 min内多次针刺无任何反应则判定为死亡。

表1 试验药物及其浓度

1.5 数据处理

采用改良寇氏法( Karber)计算半致死浓度(LC50)[6]，依据 Turubell公式计算安全浓度(SC)[7-8]。

2 结果

6种渔药对宽体金线蛭幼体急性毒性试验结果见表2。

表2 6种常用渔药对宽体金线蛭幼体急性毒性试验结果

通过6种渔药对宽体金线蛭幼蛭的急性毒性试验，结果表明(表2)，当二氧化氯浓度最低(5.600 mg/L)时，30 h后水蛭出现明显中毒症状，身体变软，反应迟钝，40 h开始出现死亡，96 h死亡率达15%左右；浓度为最高(13.44 mg/L)时，2 h开始出现死亡，72 h死亡率达到100%。当高锰酸钾浓度最低(1.6 mg/L)时，50 h后水蛭出现身体变形和乱晃症状，82 h开始出现死亡，死亡水蛭体表黏液增多，吸盘变白变肿，96 h死亡率约7%；浓度为最高(5.000 mg/L)时，4 h开始出现死亡，96 h死亡率达到100 %。当苯扎溴铵浓度最低(0.001 mg/L)时，58 h后水蛭身体中后部出现较明显肿胀，96 h内未出现死亡现象；浓度为最高(0.010 mg/L)时，4h开始出现死亡，72 h死亡率达到100%。当戊二醛浓度最低(0.036 mg/L)时，42 h后水蛭出现吸盘肿胀、活力减弱症状，56 h开始出现死亡，96 h死亡率达7%左右；浓度为最高(0.120 mg/L)时，10 h开始出现死亡，96 h死亡率达到70%左右。当伊维菌素浓度为最低(0.002 mg/L)时，90 h后水蛭出现身体变形、蜷缩症状，96 h内未出现死亡现象；浓度为最高(0.020 mg/L)时，9 h开始出现死亡，96 h死亡率达到90%左右。当聚维酮碘浓度为最低(1.800 mg/L)时，42 h后水蛭出现身体变形、蜷缩症状，68 h开始出现死亡，死亡水蛭体表黏液增多，96 h死亡率为5%左右；浓度为最高(5.600 mg/L)时，8 h开始出现死亡，96 h死亡率达到100%。6种渔药对宽体金线蛭的96 h半致死浓度最低者为伊维菌素(0.001 6 mg/L)，最高者为二氧化氯(8.627 8 mg/L)。安全质量浓度(LC)最高者为二氧化氯(1.559 3 mg/L)，最低者为伊维菌素(0.000 2mg/L)，其从大到小依次为：二氧化氯﹥聚维酮碘﹥高锰酸钾﹥戊二醛﹥苯扎溴铵﹥伊维菌素。

3 讨论

6种药物对宽体金线蛭急性毒性试验结果表明，宽体金线蛭在各个时间段内的死亡率和对药物的半致死浓度随药液浓度大小与作用时间长短的不同，即药物浓度的大小和作用时间的长短影响受试生物的死亡率及存活情况。由表2可知，二氧化氯等6种药物对宽体金线蛭幼蛭的半致死浓度(LC50)值随试验时间的延长而减小，表明该6种药物对宽体金线蛭的毒性作用随时间的增加而增强，因此药物的毒性具有累加效应。

在24～72 h内，二氧化氯对宽体金线蛭的半致死浓度(LC50)值由17.972 1 mg/L降低到8.924 8 mg/L，即随试验时间的延长LC50存在着显著变化；在72～96 h内，随着时间的延长半致死浓度(LC50)值(8.9248～8.6278 mg/L)则没有明显变化。结果表明,在24～48 h内宽体金线蛭对二氧化氯药物具有一定的抗药性，但当试验时间从48 h增加到72 h时抗药性则逐渐降低。

高锰酸钾、聚维酮碘、戊二醛、苯扎溴铵、伊维菌素等5种药在24～48 h内，对宽体金线蛭的半致死浓度(LC50)值随试验时间的延长存在着显著变化；但当试验时间从48 h增加到96 h时，随着时间的延长半致死浓度(LC50)值则没有明显的变化，表明在48 h之前宽体金线蛭对以上药物具有一定的抗药性，但随着时间的延长抗药性则逐渐减弱。

各试验时间段半致死浓度(LC50)值由高至低依次为：二氧化氯>聚维酮碘>高锰酸钾>戊二醛>苯扎溴铵>伊维菌素。6种药物对宽体金线蛭的96 h LC50分别为8.627 8、3.453 8、2.813 8、0.072 9、0.003 2、0.001 6 mg/L，属于一般毒性至高毒性药物；安全浓度(SC)分别为1.559 3、0.676 9、0.478 1、0.006 8、0.000 3和0.000 2 mg/L。其中，高锰酸钾对宽体金线蛭的安全浓度与对菲牛蛭的安全浓度(0.54 mg/L)相近[9]。结果表明,6种渔药对宽体金线蛭的毒性强弱依次为,伊维菌素>苯扎溴铵>戊二醛>高锰酸钾>聚维酮碘>二氧化氯。