一例仔猪流行性腹泻病毒的诊断与分析

贾青龙/康地饲料中国集团

猪流行性腹泻是由猪流行性腹泻病毒引起的消化道疾病，具有急性、接触性、高度传染性；以哺乳仔猪、断奶仔猪和育肥猪发病率最高，主要症状为呕吐、水样腹泻和脱水，其中，以哺乳仔猪受害最为严重。猪流行性腹泻（PED）与猪传染性胃肠炎（TGE）、猪轮状病毒病是目前危害我国猪群最严重的三种病毒性腹泻病，临床症状都是以腹泻为主，很难区分。本研究以河南某暴发仔猪腹泻的猪场为例，分析猪流行性腹泻病毒（PEDV）毒株特性，对其与近些年的流行毒株进行了比对，旨在为猪流行性腹泻的防控及免疫机理的研究提供理论依据。

一、发病情况

2018年1月份，河南某猪场初生仔猪2日龄开始出现呕吐、水样腹泻，发病仔猪食欲下降，精神状态差，腹泻24 h之后脱水，出现死亡。患病仔猪严重行走不便，采食量较低，病程持续时间7日龄，耐受的或经过治疗存活的仔猪后续发育受阻。母猪、保育、育肥等阶段未见任何症状。

二、临床表现

病畜体表被毛粗乱发暗、有结痂物，腹下和鼻镜出现紫绀，个别发病仔猪有体温上升现象，体温39.5～40.2℃。尾部及后部被粪便污染，排出粪便呈水样（图1）。猪群怕冷，挤堆，发病仔猪死亡率达85%。病情严重的仔猪，精神沉郁，卧地不起，粪便自行流出，初步确诊为腹泻。同批次母猪所产仔猪发病率达35%。

三、临床诊断

剖检病猪，可见胃黏膜潮红、水肿，小肠肠壁变薄、透明，肠内充满气体和黄色水样物，肠黏膜脱落，据此判断疑似猪流行性腹泻。

图1 病猪体表及水样粪便

四、实验室检查

1.RT-PCR检测。收集病死猪肠内容物和肠系膜淋巴结等具有代表性的组织病料3份，送武汉某疾病诊疗中心实验室，采用RT-PCR方法分别检测猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）、猪流行性腹泻病毒（PEDV）和猪德尔塔冠状病毒（PDCOV），结果如图2。

图2 猪流行性腹泻病毒（PEDV）PCR检测结果

图2从阳性模板中扩增出283 bp的片段，如果样品中有猪流行性腹泻病毒存在，能够扩增出283 bp大小的条带。图3从阳性模板中扩增出415 bp的片段，如果样品中有猪传染性胃肠炎病毒存在，能够扩增出415 bp大小的条带。图4从阳性模板中扩增出266 bp的片段，如果样品中有猪传染性胃肠炎病毒存在，能够扩增出266 bp大小的条带。通过检测扩增片段，检测到送检样本中存在PEDV，没有检测到TEGV和PDCOV。

图3 猪传染性胃肠炎（TEGV）PCR检测结果

图4 猪德尔塔冠状病毒（PDCOV）PCR检测结果

2.基因序列分析。通过RT-PCR扩增PEDV S1基因片段，与该毒株的全基因组序列GenBank登录号KF761675.1的PEDV基因序列97%的相似度，证明扩增的片段是PEDV病毒，如图5。

3.同源性分析。同源性分析显示，送检毒株的基因组序列与我国AJ1102的同源关系最近，相似性为97.5%， 而 AJ1102、CH-HNZZ47-2016、CH-LNC-2012S、PEDV4-S-3这几支毒株是国内最新的流行毒株，送检毒株与他们相似性较高。送检毒株与韩国毒株South Korea-2008、美国毒株USA2014的序列相似性均为96.8%，而与CV777疫苗毒株的相似性较低，为87%（表 1）。

图5 所送样品PEDV基因测序结果

表1 PEDV毒株和常见毒株的同源性比对结果

4.PEDV S1基因进化树。进化树分析显示PEDV S1基因属于变异毒株（G2群）。

图6 PEDV S1基因进化树

五、结论与讨论

通过对送检样本病例猪体的肠样本病毒的分离鉴定，确认送检群体中存在猪流行性腹泻病毒，序列进化树分析表明该毒株和我国新近毒株、韩国及美国的变异毒株进化关系较近，而与我国之前流行的PEDV毒株以及疫苗毒株CV777处于不同分支，揭示中国流行的PEDV已经发生了变异。PEDV毒株呈现快速变异和进化趋势，现有的基于经典毒株CV777所产生的活疫苗和灭活苗不能有效的防控流行的PEDV疾病。开展猪传染性胃肠炎病原检测，进行猪腹泻病的鉴别诊断，并采用疫苗免疫与药物相结合的防治措施，才能有效控制猪流行性腹泻病的发生与流行。研究结果解释了PED疫苗免疫失败的原因，为有效地制订PEDV的防控措施提供理论依据。