某免洗手消毒凝胶的消毒性能及毒性观察

俞秋华，付喜梅，刘莉莉，杨宁

（四川省疾病预防控制中心，四川成都 610000）

手部消毒是预防致病菌传播的简单又有效的方法，因此，研究者们积极研发各种不同配方成分和含量的相关消毒剂，其中，三氯羟基二苯醚（2,4,4'-三氯-2'-羟基二苯醚，又称三氯生）是一种高效的广谱抗菌剂。手部消毒剂的形式多种多样，随着时代的进步，使用要求的全面提高，免洗手凝胶逐渐出现。某免洗消毒凝胶为无色透明凝胶状液体，其中乙醇平均含量为61.6%（V/V），三氯羟基二苯醚平均含量为0.88%（V/V），pH均值为6.0。本研究经由实验室消毒试验和现场试验，全面评价该免洗消毒凝胶的消毒效果、安全性和使用舒适度，研究结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 消毒液

某品牌免洗手消毒凝胶，原液备用。

1.1.2 试验菌株

大肠杆菌（8099）、金黄色葡萄球菌（ATCC6538）、白色念珠菌（ATCC10231），由中国普通微生物菌种保藏中心提供。

1.1.3 培养基

胰蛋白胨大豆琼脂、胰蛋白胨大豆肉汤（TSB）、沙氏琼脂。

1.1.4 中和剂

含0.5%硫代硫酸钠、0.5%卵磷脂、1.0%甘氨酸、3.0%吐温-80的PBS溶液。

1.1.5 采样液

含0.1%吐温-80的PBS缓冲液。

1.1.6 实验动物

昆明种小鼠，四川省中医药科学院实验动物中心提供，生产许可证号：SCXK（川）2013-19.SPF级；健康大耳白兔，四川省实验动物专委会养殖场提供，动物生产许可证号：SCXK[川]2013-14.普通级。

1.2 试验方法

1.2.1 杀菌试验方法[1]1.2.1.1 菌悬液的制备

用TSB分别洗下大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌在营养琼脂斜面上经过18 h培养的菌苔，混匀成菌悬液。用菌悬液制作菌片，晾干后使每片含菌量为 5.0×105～ 5.0×106。

1.2.1.2 中和剂载体定量鉴定试验

按载体浸泡定量杀菌试验的程序进行试验。试验3次重复均符合《消毒技术规范》（2002年版）的要求，则中和剂的成分及其浓度都合格。

1.2.1.3 载体浸泡定量杀菌试验

将各菌片投入5.0 mL消毒液中（阳性对照组用PBS代替消毒液），分别作用至0.5 min、1.0 min、1.5 min时，无菌操作取出菌片投入中和剂试管内，用手振敲80次，等待10 min，再混匀后，分别接种平皿，计数。试验中使用的中和剂等试剂、培养基，接种平皿做阴性对照，分别计算各菌在各作用时间的杀灭对数值。

1.2.1.4 现场消毒试验

选择30名手部未经处理的同事为受试者，双手互相揉搓以均匀所带自然菌的数量，左手手指并拢，用无菌棉签蘸取稀释液，挤干，往返涂擦所有手指部位2遍，期间转动1次棉签，无菌条件下将棉签前段剪入中和剂管，充分混匀后接种平皿，计数，做阳性对照。按免洗手凝胶的说明书上的使用方法对右手消毒1.0 min后，用无菌棉签蘸取中和剂进行采样，接种平皿，计数，做试验组。

1.2.2 毒性试验[1]

1.2.2.1 小鼠急性经口毒性试验

取小鼠雌雄各半，禁食一晚，不禁水。采用一次最大限度试验，剂量为5 000 mg/kg，称取5.0 g样品加蒸馏水至20 mL混匀后备用，给药量按20 mL/kg体重计算，用灌胃方式将样品一次给予动物。观察小鼠的中毒症状，死亡只数，连续14天，计算半数致死剂量LD50。

1.2.2.2 家兔多次完整皮肤刺激试验

取兔子雌雄各两只，试验前在实验室适应3天。提前24 h将背毛剃掉，将凝胶0.5 mL涂于脊柱一侧2.5 cm×2.5 cm范围的皮肤上，另一侧作空白对照。涂抹4 h后除静凝胶的残留。重复涂抹14天，每天1次，观察结果。

1.2.2.3 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验

取小鼠雌雄各半，分为样品1 250 mg/kg、2 500 mg/kg、5 000 mg/kg三个剂量组，以及阳性对照组和阴性对照组。分别称取1.25 g、2.5 g、5.0 g样品和40 mg环磷酰胺，分别加蒸馏水至20 mL混匀后备用，经口灌胃。两次染毒间隔24 h，第二次染毒后6 h处死小鼠，取胸骨髓涂片，姬姆萨应用液染色。每只小鼠在油镜下选择细胞着色适当的区域，计数1 000个嗜多染红细胞中出现的含有微核的细胞的个数，计算嗜多染红细胞与正染红细胞的比例（PCE/NCE）。

2 结果与分析

2.1 中和剂鉴定试验

试验表明，含0.5%硫代硫酸钠、0.5%卵磷脂、1.0%甘氨酸、3.0%吐温-80的PBS溶液可中和该消毒液原有液中含有的杀菌成分，且该中和剂及中和产物对大肠杆菌、白色念珠菌及培养基无明显影响，详见表1。

表1 中和剂鉴定结果

2.2 杀菌试验结果

该免洗手消毒凝胶对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌分别作用0.5 min，杀灭对数值均＞3.0，详见表2。

2.3 现场试验结果

该免洗手消毒凝胶对手作用1.0 min平均杀灭对数值为1.50，达到消毒合格要求。

2.4 毒性试验

2.4.1 急性经口毒性试验结果

小鼠无死亡发生，该免洗手消毒凝胶对小鼠雌、雄性口服LD50均大于5 000 mg/kg体重，属于实际无毒，详见表3。

2.4.2 多次完整皮肤刺激试验结果

试验中有4只兔皮肤出现红斑等炎性反应，平均每天每只兔刺激反应评分均值为0.89，分级结果定为轻刺激性，详见表4。

表2 免洗手消毒凝胶对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌的杀灭效果

表3 免洗手消毒凝胶对小鼠急性经口毒性试验结果

表4 免洗手消毒凝胶对兔多次完整皮肤刺激试验结果

2.4.3 小鼠骨髓多染红细胞微核试验结果

微核率差别无统计学意义，PCE/NCE大于0.1，阳性组显著高于阴性组。证实该免洗手消毒凝胶对小鼠无染色体损伤作用。详见表5。

3 讨论

本免洗手消毒凝胶对细菌的繁殖体以及真菌均具有很好的杀灭作用，对自然菌也有很好的杀灭作用，作用非常迅速，消毒效果好，达到消毒技术规范对消毒液消毒效果的要求，毒性属于实际无毒，轻皮肤刺激性，无染色体损伤作用。

经研究，三氯羟基二苯醚和乙醇含量分别为 0.24%、56%[2]，1 100 mg/L、52.8%[3]，1.55%、39.6%[4]，2 690 mg/L、78.7%[5]，12.20 g/L、39.70%[6]，2 690 mg/L、65.0%的手消毒剂[7]，进行载体浸泡定量杀菌试验，仅0.5 min对各菌就已能达到消毒合格的要求。但含3 750 mg/L三氯羟基二苯醚和体积分数33%乙醇的消毒液作用0.5 min时对铜绿假单胞菌的平均杀灭对数值仅达到2.41[8]，作用1 min时方可达到对其消毒合格；也有研究指出，含乙醇75.4%的消毒剂对铜绿假单胞菌的杀灭作用优于含0.18%的三氯生[9]；总结对比可以看出，虽然手消毒液所含三氯羟基二苯醚含量低于1 100 mg/L和乙醇的含量低于33%则会略微影响其进行杀菌的效果和速度，但是，在此含量之上，所含此两种成分的浓度高低不同并不会影响到消毒液实际的杀菌效果和杀菌速度。

表5 免洗手消毒凝胶对小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验结果

乙醇对皮肤有脱脂作用，会让大部分使用者觉得皮肤干燥，免洗手消毒液做成此研究中使用时感觉湿润的凝胶状，会让使用者更加舒适，人群接受度更高。其与聚六亚甲基双胍盐酸盐、葡萄糖酸洗必泰、醋酸氯已定、复合碘复配时均出现皮肤发红等不良反应的报告[10]，与三氯生复配则不容易出现皮肤过敏[11]。但有报告指出，三氯羟基二苯醚会使水生生物处于有潜在风险的环境中[12]，可以通过多种途径进入到环境介质中[13]，而且对生态环境、生物发育也具有潜在的毒性效应[14]，人体还是应避免大剂量的长期重复接触[15]。本试验研究结果也证实此配方对皮肤还是存在有轻度的刺激，且具有刺激性气味。

综上所述，建议研发者在可以在保证杀菌效果的前提下，尽量降低乙醇和三氯羟基二苯醚这两种主要有效消毒成分的含量，既减小其生产成本、降低对皮肤的刺激程度，使人群接受度更高，又降低对生态和环境可能造成的潜在影响和污染；或致力于研发比以上各配方成分对人体、皮肤刺激性更小，同时对环境影响也更小的新配方成分。