HPLC测定咽炎片中哈巴苷和哈巴俄苷的含量

李怀伟 仝桂平 马昌豪 张朋 马海春

【摘 要】目的：建立双波长法测定咽炎片中哈巴苷和哈巴俄苷的含量。方法：色谱柱为Welch Ultimate XB-C18（250 mm×4.6 mm，3 ?m），柱温30 ℃。采用梯度洗脱，以乙腈为流动相A，0.05 %磷酸为流动相B，流速0.6 mL/min，检测波长210 nm（哈巴苷）、276 nm（哈巴俄苷）。结果：哈巴苷和哈巴俄苷分别在浓度5.47～164.13 ?g/ml（r=0.9998）、2.00～60.06 ?g/ml（r=0.9993）的范围内，呈良好的线性关系。哈巴苷和哈巴俄苷平均回收率分别为98.55%、98.40%（n=6），RSD分别为0.80%、0.57%。结论：该方法简便，准确，重复性好，可用于咽炎片的质量控制。

【关键词】HPLC;咽炎片;哈巴苷;哈巴俄苷

【中图分类号】R286【文献标识码】A【文章编号】1005-0019（2019）10-0-02

咽炎片由玄参、百部（制）、天冬、牡丹皮、麦冬、款冬花（制）、木蝴蝶、地黄、板蓝根等十二味药材组成。具有养阴润肺，清热解毒，清利咽喉，镇咳止痒的功效。临床常用于慢性咽炎引起的咽干，咽痒，刺激性咳嗽等症[1]。玄参为咽炎片的君药，具有清热凉血、滋阴降火、解毒散结等功效[2]。哈巴苷和哈巴俄苷是玄参的两种主要生物活性成分，我们采用高效液相色谱法测定了咽炎片中两种成分的含量，为科学、规范的控制咽炎片的内在质量提供参考依据。

1材料与方法

1.1 仪器与试药 （1）仪器：Agilent1260高效液相色谱仪（美国安捷伦）;XS105 DualRange型十万分之一天平（METTLER TOLEDO）。

（2）药品与试剂：乙腈、甲醇、磷酸（色谱纯）;哈巴苷（中国食品药品检定研究院，批号：111729-201707）;哈巴俄苷（中国食品药品检定研究院，批号：111730-201709）;咽炎片（市售，批号1709020Z，1804005Z，1804006Z）。

1.2 方法 （1）色谱条件 色谱柱为Welch Ultimate XB-C18（250 mm×4.6 mm，3 ?m）;柱温：30 ℃;进样体积20 ?L，检测波长为210 nm（哈巴苷）、276 nm（哈巴俄苷）;以乙腈为流动相A，0.05 %磷酸为流动相B，进行梯度洗脱（0～10min，3%→20% A;10～30min，20%→50%A;30～31min，50%→3%A;31～45，3%A）。

（2）对照品溶液的制備 精密称取哈巴苷和哈巴俄苷对照品各适量，制成每1ml含哈巴苷0.5471 mg、哈巴俄苷0.2002 mg的贮备液;将贮备液稀释10倍作为混合对照品溶液。

（3）供试品和阴性样品溶液的制备 取本品20片，除去包衣，研细，取约2.0 g，精密称取，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 ml，称定重量，超声处理30 min，冷却至室温，用甲醇补足失重，滤过，精密量取续滤液25ml，加在大孔树脂柱上（10g，100～200目，内径1 cm），30%甲醇50 ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用30 %甲醇溶解，转移至10 ml容量瓶中，定容，即得。同法处理制备不含玄参的阴性对照溶液。

2结果

2.1 专属性考察 结果表明，表明哈巴苷、哈巴俄苷为玄参特有成分，其它成分对其测定无干扰。

2.2 线性关系考察 精密吸取上述对照品贮备液0.10、0.30、0.50、1.00、2.00、3.00ml置10ml容量瓶中，30%甲醇定容至刻度，摇匀;进样测定，以峰面积为纵坐标（y），浓度（μg/ml）为横坐标（x）进行线性回归。哈巴苷和哈巴俄苷的回归方程分别为y = 13.137 x +10.764（r=0.9999）和y = 92.081x-7.0756（r=0.9992）;分别在5.47～164.13 μg/ml和2.00～60.06 μg/ml范围内呈良好的线性关系。

2.3 精密度试验 取混合对照品溶液，连续进样6次，结果哈巴苷和哈巴俄苷峰面积的RSD分别为0.05%和0.02%，表明仪器具有良好的精密度。

2.4 重复性试验 取咽炎片6份，按“1.2”项下（3）方法制备6份供试品溶液，结果哈巴苷和哈巴俄苷峰面积的RSD分别为0.22%和0.58%。

2.5 稳定性试验 取同一供试品溶液，于0，4，8，16，24 h时进样，结果哈巴苷和哈巴俄苷峰面积的RSD分别为1.42%和1.05%。

2.6 加样回收率试验 精密称取含有量已知的咽炎片1.0 g，共6份，精密加入混合对照品溶液（哈巴苷0.7521mg/ml，哈巴俄苷0.1302mg/ml）1.00 ml，按供试品溶液制备方法进行处理，测定回收率，结果哈巴苷和哈巴俄苷平均回收率分别为98.55%和98.40%;RSD分别为0.80和0.57。

2.7 含量测定 取3批样品，按上述色谱条件测定，计算哈巴苷和哈巴俄苷的含量。

3讨论

玄参具有抗炎、调节心脑血管功能、免疫调节功能等药理活性[3]，作为咽炎片处方中的主药，其含量直接影响咽炎片的功效。本研究采用DAD检测器双波长检测法，同时测定哈巴苷和哈巴俄苷的含量，该方法专属性、稳定性较好，简便，准确，可为咽炎片的质量控制提供参考依据。

参考文献

《卫生部药品标准》中药成方制剂第二册，咽炎片[S].1990：161.

尹辉.中药玄参化学成分研究概况[J]山东农业工程学院学报，2016，33（10）：138-139.

王锋，王胜男，朱小燕.中药玄参研究进展[J]饮食保健，2018，5（42）：87-88.