肾移植围术期红细胞免疫功能变化探讨

周结学，刘东，吴家清，蒙善东，申升，朱春丽，邓庚国，马娟，郑克立（广东省第二人民医院器官移植科，广东 广州 510317）

自1981年Siegle提出红细胞免疫之后，国内外对此进行了广泛研究，认为在自身免疫性疾病、肿瘤、器官移植等免疫病理方面红细胞免疫功能有其临床价值。本文选取2013年1月—2017年3月期间肾移植围术期患者的临床资料，进行了肾移植围术期红细胞免疫功能变化探讨。

1 材料和方法

1.1 研究对象及分组：回顾性分析2013年1月—2017年3月在本院接受首次同种异体肾移植手术的肾移植受者资料，术前接受血液透析治疗13例〔平均透析时间22（2～70）个月〕，腹膜透析12例〔平均透析时间25（4～72）个月〕，术后3个月内使血肌酐维持在45～103 μmol/L，24 h排尿约1 800 ml，比重为1.010～1.040。移植组：B超检查显示移植肾体积、结构和血流均正常，其中男性19例，女性6例，平均年龄（42.4±11.7）岁。对照组：同期健康体检人员25例，其中男性14例，女性11例，平均年龄 （49.8±15.5）岁。两组的性别、年龄比较差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2 免疫抑制治疗方案：移植组采用三联免疫抑制方案,应用激素+霉酚酸酯+环孢素A方案9例,应用激素+霉酚酸酯+他克莫司方案16例。健康对照组不服药。

1.3 试剂和方法

1.3.1 红细胞免疫功能测定：红细胞C3b受体花环率（RBC-C3b receptor rosette rate，RCRR）、红细胞免疫复合物花环率（red cell immune complex wreath rate，RICR）、肿瘤红细胞花环率（tumor red cell rosette，TRR）的测定依照郭峰方法［1］。每个红细胞结出2个或2个以上酵母菌为花环试验阳性,各自计算出花环结合率。

1.3.2 淋巴细胞亚群测定：使用荧光显微镜，收集外周血分离单个核细胞之后按常规进行间接免疫荧光法检测［2］。测定成熟的T淋巴细胞（CD3）、辅助性T细胞 （CD4） 及抑制性T细胞（CD8）比例，计算CD4/CD8比值,试剂由武汉生物制品研究所提供。

1.4 伦理学：本研究符合医学伦理学标准，得到医院伦理委员会审批（2018-YZKWZ-013）。

1.5 统计学分析：所有数据使用均数±标准差 （±s）表示，经方差齐性检验和正态性检验之后，组间比较采取t检验，多组间比较采取重复测量方差分析，P＜0.05具有统计学意义。

2 结 果

2.1 术前RCRR、RICR、TRR较正常对照组低，术后呈下降趋势，至第七天下降至最低，随后逐步上升，至术后3个月基本恢复至术前水平，差异无统计学意义（表1）。

2.2 术前CD3、CD4、CD8与正对照组相比，稍有下降，但差异无统计学意义，术后CD3、CD4、CD8呈一过性下降，至第三天为最低，以后逐步恢复致术前水平（表2）。

2.3 CD35、CD58、CD59较正常对照组稍低，术后CD35呈下降趋势，术后14 d降至最低，之后逐步恢复，术后3个月基本恢复正常，CD58、CD59术后稍有升高，术后3 d达高峰，与术前相比，差异无统计学意义，随后逐步恢复至正常（表3）。

表1 两组红细胞免疫功能动态变化比较（%，±s）

表1 两组红细胞免疫功能动态变化比较（%，±s）

移植组 25 RCRR 13.71±3.20 13.12±2.89 12.28±3.12 13.35±2.45 13.56±2,54 13.60±2.36 RICR 6.25±2.12 6.03±2.45 5.89±2.76 6.13±2.41 6.17±2.24 6.30±2.10 TRR 45.12±7.50 43.69±8.45 43.20±9.23 44.08±8.56 45.06±8.21 45.20±7.32对照组 25 RCRR 15.60±2.56 15.55±2.31 15.48±2.68 15.59±2.56 15.61±2.62 16.01±2.76 RICR 7.67±2.03 7.48±2.13 7.75±2.09 7.71±2.01 7.59±2.05 7.66±2.21 TRR 46.27±7.89 46.23±7.54 46.30±7.54 46.40±7.68 46.57±7.25 46.34±7.76

表2 两组T细胞亚群动态变化比较（%，±s）

表2 两组T细胞亚群动态变化比较（%，±s）

移植组 25 CD3 750.17±25.80 712.12±24.45 721.87±25.12 735.12±24.98 745.45±25.23 754.89±42.79 CD4 488.20±24.67 424.90±23.47 435.23±23.45 436.12±23.12 438.25±24.67 486.12±24.38 CD8 221.50±12.90 198.43±12.67 210.42±12.89 218.10±12.54 220.23±12.65 222.75±12.89 CD4/CD8 2.20 2.14 2.07 2.00 1.99 2.18对照组 25 CD3 852.30±24.56 850..35±21.41 851.51±24.56 853.31±23.78 854.87±20.86 853.52±22.06 CD4 518.12±24.56 516.53±22.79 518.12±24.56 518.92±20.54 517.63±20.85 518.52±23.45 CD8 243.30±13.32 240.56±14.56 241.98±12.56 242.65±10.62 242.45±15.54 243.89±12.75 CD4/CD8 2.12 2.15 2.14 2.14 2.13 2.14

表3 两组红细胞CD35、CD58、CD59的表达比较（%，±s）

表3 两组红细胞CD35、CD58、CD59的表达比较（%，±s）

移植组 25 CD35 28.76±10.03 28.30±9.12 24.20±8.23 23.12±7.23 27.34±11.23 28.12±10.56 CD58 91.20±14.34 93.34±12.32 92.23±11.87 91.51±12.21 92.02±14.42 92.45±15.03 CD59 85.78±23.56 92.12±16.23 87.10±17.10 85.32±23.45 86.23±23.65 87.45±24.60对照组 25 CD35 35.23±3.45 35.32±3.35 35.41±3.18 36.01±3.21 35.68±3.45 35.76±4.58 CD58 92.89±8.59 91.76±8.45 91.96±8.63 92.89±7.86 93.02±7.50 93.23±6.89 CD59 113.32±13.62 112.21±12.98 112.26±14.26 114.12±12.54 114.22±13.52 114.54±14.12

3 讨 论

肾移植是治疗终末期肾病的有效方法之一,但移植术后免疫功能失衡,则是导致移植器官功能障碍的主要原因,有效的调整肾移植受者免疫状态,是提高移植器官存活率的重要手段［3-4］。既往调整受者免疫状态多集中于白细胞和淋巴细胞，近年来人们逐步注意到红细胞免疫可能也参与其中，并且红细朐免疫与白细胞和淋巴细胞免疫功能相互联系。红细胞占血液有形成分的99%以上,表面与胞质中含有多种与免疫相关的分子（CD35、CD58、CR3、CD59、CD44）,具有免疫黏附、促吞噬、抗原传递等各种免疫功能,并且参与调控T、B淋巴细胞免疫活性，构建了维持机体免疫平衡状态的免疫细胞网络是机体免疫调节系统不可或缺的重要组成部分［5］。

有研究表明［6］围术期红细胞免疫功能变化，不仅影响了红细胞免疫黏附、促吞噬及抗原传递功能，同时也影响了淋巴细胞的活化，造成机体自身免疫调节紊乱，免疫反应平衡失调，导致肾组织受损害。本文结果显示：慢性肾功能不全患者的RCRR、RICR及TRR较正常健康人群要低，存在红细胞免疫功能低下的状况，即使是血透患者其红细胞膜免疫分子表达也无明显改善，与既往研究相类似［7-8］。肾移植围术期受者的RCRR、RICR、TRR较术前均有下降，于1周内下降最明显，其后逐步回升，于术后1个月左右回升至术前水平，但较正常健康人低。至术后3个月左右，随着贫血改善、肾功能好转及全身情况改善，RCRR、RICR、TRR等逐步恢复正常人水平。其发生可能与围术期处理、手术中失血和术后抗排斥药物的使用等多种因素有关，如何减少手术和围手期处理对红细胞免疫功能影响需进一步研究。

既往研究显示红细胞通过其表面的多种免疫分子（CD58、CD59等）调控，指导白细胞的天然免疫与获得性免疫。在移植肾脏疾病发生、发展过程中，红细胞免疫功能变化，会引起T、B淋巴细胞的功能也出现一定程度的变化［9-11］，本研究显示红细胞表面CD35于术后14 d内进行性下降，之后逐步恢复，至术后3个月尚未能恢复到术前水平。而CD58、CD59的表达在术后呈现一个先轻微上升，后逐步恢复正常的现象，围术期无明显下降趋势，这可能与手术后机体形成许多免疫复合物,与红细胞CD35表面的C3b结合，导致其低表达。而移植术后早期缺血/再灌注损伤,产生大量的炎性因子,造成机体的免疫应激状态导致CD58、CD59的表达先升高后恢复。在红细胞免疫功能变化同时，T、B淋巴细胞也呈现先下降，后逐步恢复过程，于术后3 d CD4、CD8下降最明显，其后逐步上升，至术后3个月左右基本恢复正常水平，但其恢复的程度和水平与红细胞免疫功能恢复并不平行，CD4、CD8的完全恢复较红细胞免疫要慢，可能与术后免疫抑制剂的大量使用有关。

由此可见，在肾移植围术期、红细胞介导的天然免疫与T、B淋巴细胞介导的获得性免疫均参与了肾脏移植的恢复过程，红细胞免疫功能及T、B淋巴细胞免疫功能的变化与移植肾脏疾病的发生、发展及预后可能有关。