采用生防菌YN48早期防控烟草黑胫病

刘剑金，刘子仪，罗 山，罗永才，王学坚，张 艳，申宴斌，何月秋*

(1.云南省烟草公司 普洱市公司，云南 普洱 665000；2.云南农业大学 农学与生物技术学院，云南 昆明 650201)

生物防治是一种绿色、环保、持久的防治方法，针对烟草黑胫病菌的生防制剂已备受关注[1]。据文献报道，烟草黑胫病菌的拮抗微生物主要是从根围分离的真菌、细菌，在实验室条件下的防治效果较好，但大田应用的防效不佳[2]。王静等[3]制备的放线菌F8的生防制剂，对烟草黑胫病的防治效果达到了70.3%。吴秉奇等[4]将多粘类芽孢杆菌YC0573和YC0136应用于烟草，对黑胫病的防治效果分别达到90.9%和95.4%。方敦煌等[5]发现生防菌GP13对烟草黑胫病的防效达52.2%以上。周向平等[2]在烟草黑胫病发生严重的田块，分离出8株对烟草黑胫病菌有较强拮抗作用的内生菌，其中55y、NN-3、YN-4、 YN-10等菌株经室内测定，对烟草黑胫病菌的抑制效果均达到了66%以上。韩伟[6]研究共获得186株烟草内生真菌，经过多种方法诱导产孢，鉴定出10个烟草内生真菌菌种。马冠华等[7]从K326、K346、RG1l、G28、NC89、红大、云烟85等主栽烟草品种中共分离出7个属的内生细菌。祝明亮等[8]从30个白肋烟样品中分离出33株内生细菌。利用生物防治不但效果好，而且安全性高、持效性长，已经成为植物病害防治的一个热点。YN48是从烟草体内筛选出的内生解淀粉芽孢杆菌，在温室盆栽试验中对烟草黑胫病的防效达69.12%[9]，且对多种作物具有促生长作用[10]。本研究的目的是为了验证YN48大田用于防治烟草黑胫病的可能性，为今后将其开发成产品提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验地点

1.1.1 地理位置 试验地点为景东县文井镇者后村外文甲小组。土壤肥力中等，地势平坦，地力均匀，田烟，试验田施药前未施用过其他防黑胫病药剂。地处东经101.04236°、北纬24.12806°,海拔：1320 m。土壤理化指标：pH值5.87，有机质24.3 g/kg，水解氮120.2 mg/kg，有效磷3.6 mg/kg，速效钾117 mg/kg，全氮0.133%，全磷0.060%，全钾2.44%，氯离子33.25 mg/kg。

1.1.2 试验材料 云烟87小苗由普洱烟草公司提供；YN201448(下称YN48)生防菌由云南农业大学植保学院提供。

1.2 试验方法

1.2.1 苗期试验处理 将菌剂用水稀释500倍(5.1×107CFU/mL)后做以下处理，CK：不喷施菌剂；处理1：播种前基质施入菌剂；处理2：间苗结束喷施1次；处理3：间苗结束和第二次剪叶后各喷施1次；处理4：间苗结束、第一次剪叶后和第二次剪叶后各喷施1次。每个处理喷施4棚，即4个重复。

1.2.2 大田期试验处理 将苗期试验效果最好的处理(处理4)作为大田试验用苗(即菌苗)，大田期设4个处理：即对照组(CK)，只浇清水；处理1用500倍(5.1×107CFU/mL)的YN48喷淋；处理2用800倍(3.2×107CFU/mL)的YN48喷淋；处理3用1000倍(2.6×107CFU/mL)的YN48喷淋。分别于移栽后10 d和30 d时喷施，各处理用菌液量按50 L/667m2计。每个处理小区80株为1个重复，重复3次。

1.2.3 调查方法 在移栽前，每个重复选择5株测量各处理各重复的烟苗素质，分别测量烟苗的茎高、茎围、叶数，评价烟苗的整齐度、叶色。

在施菌剂后每隔10 d或11 d调查黑胫病的病情。采用GB/T 23222─2008分级标准调查各小区全部烟株的病情并计算防效。于打顶期时在每个小区选择4株有代表性烟株测量株高、有效叶数、茎围、叶长、叶宽。在收获期，各处理按烟草分级标准和价格分别计算经济效益。

1.3 统计分析

运用SPSS 16.0和Excel 2010等软件对各项试验数据进行处理。

2 结果与分析

2.1 YN48大田防治黑胫病的效果

将苗期处理4的烟苗于5月2日移栽至大田。在移栽后10 d和30 d喷淋YN48菌剂2次，在第一次施菌剂后每隔10 d或11 d调查黑胫病的病情。结果(表1)表明：YN48对烟草黑胫病有很好的防治效果，总体表现出随着菌剂浓度的提高而防效增加，随着喷施后时间的延长，防效逐渐下降。如在喷淋YN48菌剂后10 d的防效，500倍(5.1×107CFU/mL，处理1)、800倍(3.2×107CFU/mL，处理2)和1000倍(2.6×107CFU/mL，处理3)的防效分别为100.00%、82.69%和50.00%；在第一次喷淋后的20 d再喷施一次YN48(6月2日)，于第二次喷淋后10 d(6月22日)，3个处理的防效分别达96.87%、77.31%、63.67%；第一次喷淋YN48后82 d的8月2日，对烟草黑胫病仍有一定的防效，其中处理1、处理2和处理3的防效分别达65.74%、52.29%、34.70%。

表1 YN48防治大田烤烟黑胫病的效果

2.2 苗期处理对烤烟烟苗素质的影响

在烟苗处在5叶1心期调查其茎高、茎围、苗整齐度、苗色和黑胫病发病率(表2)。结果表明：各处理之间的烟苗素质存在差异，但烟苗整齐度、苗色无差异，均整齐一致、正绿色。处理4的烟苗茎高和茎围均最高，分别达14.60和2.47 cm。综合各烟苗素质来看，间苗结束、第一次剪叶后和第二次剪叶后各喷施1次的苗期生物菌剂处理4对烟苗的生长性状有较好的影响，为烟苗移栽大田提供了良好的生长基础，即喷施次数越多，对烟苗生长的促进效果越好。

表2 烟苗素质参数调查结果

注：不同小、大写字母分别表示在5%和1%水平上的差异显著性。字母相同则差异不显著，不同则显著。下同。

2.3 各处理对大田期烤烟植株素质的影响

在团棵期调查烟株的茎高、叶长和叶宽，结果表明(表3)：烤烟植株的生长性状在各处理间存在差异。处理1的烤烟植株平均株高、叶长和叶宽均最高，分别达21.17、39.22和18.38 cm，但各处理烟株的茎高和叶长差异未达极显著水平，处理1烟株的叶宽极显著大于处理2。

表3 团棵期烟株农艺性状 cm

打顶期烟株的农艺性状比较表明(表4)：处理1的植株平均株高、茎围、叶长和叶宽数量均最高，分别达126.77、10.80、69.35和25.49 cm，但各处理间的差异均未达显著水平。处理3的植株平均叶片数最多，达19.67片，极显著多于处理2和CK，但与处理1无显著差异。综合烟株生育期的各项农艺性状来看，处理1对烤烟植株的农艺性状有较好的影响。

2.4 各处理对烟叶经济效益的影响

收获时将各处理不同批次的烟草分别统计。结果表明(表5)：3个菌剂处理的烟叶产量、上等烟比例、均价和产值均高于空白对照。其中处理1的产量和产值最高，分别达2478.00 kg/hm2和72613.50元/hm2，比CK分别高9.91%和13.07%；处理2的产量和产值分别比CK高9.54%和11.57%；处理3的产量和产值分别比CK高2.06%和5.18%。

表4 烤烟打顶期农艺性状调查结果

表5 烤烟经济性状调查结果

3 讨论

黑胫病一直是烟草生产中的限制因子，特别是在大田期，高温高湿的天气条件下，发病特别严重，发病率甚至达100%[11]。但它在苗期，特别是在集中育苗的苗床上很少发病。防治烟草黑胫病的传统方法是在大田发病初期，主要以化学农药防治。本研究采用烟草内生解淀粉芽孢杆菌YN48提前介入，让内生菌先占领烟苗生态位和进入育苗基质及土壤中，即于间苗结束、第一次剪叶后和第二次剪叶后的苗床上各喷淋1次YN48的500倍(5.1×107CFU/mL)液，分别在移栽后10 d和30 d，于大田再各喷淋1次，在移栽后82 d时的防效仍达65.74%，在移栽后71 d时的防效达70.93%，在移栽后41 d(6月12日)时的防效达96.87%，这为烟草黑胫病的防治提供了一条有效途径，同时，它减少了化学农药的用量。杨珍福等[12]研究表明：YN48具有很好的烟草植株内定殖能力，这可能是它在本研究中能很好地防治黑胫病的缘故。YN48的3种不同剂量的防病效果随着用量的增加而更高和持效期更长，这表明该菌株在烟株体内定殖可能与防病效果有关。然而，由于长时间在田间植株上观察菌株的定殖能力较难，荧光标记菌株不可用于田间试验，致使本研究未能明确植株体内定殖的菌量与防效的关系，这有待于在限定可控的温室中进一步验证。

YN48在田间的防效是在一个较大样本的情况下取得的，即每个重复80株，每个处理达240株，相当于145 m2。由于前期各小区发病不均匀，且发病株数不够，在统计分析时，当病株数不够、发病率较低时，统计学意义不大，故将3个小区全部结果作为1个样本，构成了一个较大样本。在这个大样本里，随着所用YN48浓度的提高，防病效果越好，这一结果是符合逻辑的，即尽管防病数据未做统计分析，但所得结果仍然不失可靠性。

YN48有很好的促生长效果[9]，它能提高烟叶产量和品质，处理1的烟叶产量和产值分别提高了9.91%和13.07%，处理2的烟叶产量和产值则分别提高了9.54%和11.57%。这一方面与其可以促进烟株生长有关，如在打顶期，各处理的株高、叶长、叶宽和叶片数均优于空白对照；另一方面与其具有很好的防治黑胫病效果有关，从而减少了因病害所致损失。鉴于YN48具有很好的防病和促生长、增产增值效果，结合早期使用策略，它将具有替代化学农药用于田间控制烟草黑胫病的潜力。