肉桂油对马钱子总碱中马钱子碱和士的宁透皮吸收的影响

赵雪琪 齐笑 管庆霞 冯宇飞 关枫 王艳宏

摘要：目的  探讨肉桂油对马钱子总碱透皮吸收的影响，为马钱子相关制剂的开发和减毒增效研究奠定基础。方法  以体外SD大鼠皮肤为渗透屏障，Franz扩散池法考察不同浓度（0.5%、1%、3%、5%、10%）肉桂油对马钱子总碱中马钱子碱和士的宁透皮吸收的影响;采用饱和溶解度法测定马钱子总碱中马钱子碱和士的宁在不同浓度肉桂油中的平衡溶解度;采用HPLC测定马钱子总碱角质层/溶剂分配系数;采用傅里叶变换衰减全反射红外光谱技术测定肉桂油对皮肤角质层的作用。结果  不同浓度肉桂油促透马钱子总碱中马钱子碱的稳态渗透速率（Jss）和增渗比（ER）分别为5.84～19.65 ?g/（cm2·h）、0.23～3.54，促透马钱子总碱中士的宁的Jss和ER分别为1.36～18.38 ?g/（cm2·h）、0.19～2.55;马钱子总碱中马钱子碱、士的宁在不同浓度肉桂油中的平衡溶解度分别为6.10～10.97 g/L、4.10～6.58 g/L;马钱子总碱中马钱子碱和士的宁的角质层/溶剂分配系数分别为0.74～1.39、0.24～0.35。结论  不同浓度肉桂油对马钱子总碱中的马钱子碱及士的宁均有一定促透作用，以1%肉桂油作用最佳，其机制可能为通过影响角质层内角蛋白改变角质层结构而促透。

关键词：肉桂油;马钱子总碱;马钱子碱;士的宁;透皮吸收

中图分类号：R285.5    文献标识码：A    文章編号：1005-5304（2019）04-0078-07

马钱子为马钱子科植物马钱Strychnos nux-vomica L.的干燥成熟种子，具有通络止痛、散结消肿功效，用于治疗风湿痹痛、肌肤麻木、牙痛、防风、顽癣、恶性肿瘤、重症肌无力、截瘫、小儿麻痹后遗症等[1-4]。2015年版《中华人民共和国药典》中马钱子的含量测定指标为马钱子碱、士的宁，二者既是马钱子的主要有效成分，也是有毒成分。如何既保留或增强马钱子的药理活性又降低其毒性，是马钱子相关制剂开发需解决的关键问题。由于具有恒定的血药浓度，可降低药物毒性，经皮给药成为目前马钱子制剂开发的理想选择[5]。研究表明，肉桂与马钱子配伍可起到减毒作用[6-9]。肉桂油为肉桂的干燥枝、叶经水蒸气蒸馏提取的挥发油，是肉桂的主要成分，不仅具有驱风健胃、抗真菌、解热止痛作用，还可促进药物透皮吸收[5]。本试验以马钱子碱和士的宁为评价指标，测定马钱子总碱在不同浓度肉桂油中的饱和溶解度，采用Franz扩散池法探讨不同浓度肉桂油对马钱子总碱经皮渗透性的影响，进一步测定马钱子总碱角质层/溶剂分配系数，采用傅里叶变换衰减全反射红外光谱技术探讨肉桂油对皮肤角质层的作用，旨在通过探讨肉桂油对马钱子总碱透皮吸收的影响，为马钱子相关制剂的开发和减毒增效研究奠定基础。

1  仪器、试药与动物

AB265-S分析电子天平，上海梅特勒-托利多国际贸易有限公司;FA2004分析天平，上海良单仪器仪表有限公司;LC-20AD型高效液相色谱仪，日本岛津公司;HC-188透皮仪、MSE-1600 Franz扩散池，天津市矽新科技有限公司;SB-5200超声波清洗机，宁波新芝生物科技股份有限公司;IRTracer-100傅里叶变换红外光谱仪，SHIMADZO岛津制作所;HZS-HA水浴振荡器，哈尔滨市东联电子技术开发有限公司;TGL-16C台式离心机，上海安亭科学仪器厂;Vacucell真空干燥箱，德国MMM公司;V3 S025涡旋振荡器，德国IKA公司。

马钱子，哈尔滨市盛泰中药饮片厂，批号20090165，经黑龙江中医药大学药学院孙慧峰教授鉴定为马钱科植物马钱Strychnos nux-vomica L.的干燥成熟种子。马钱子碱对照品（纯度≥98%，批号B25064）、士的宁对照品（纯度≥98%，批号B25079）中国食品药品检定研究院;三乙胺（天津市博迪化工有限公司，批号HG3121394），冰乙酸（天津市富宇精细化工有限公司，批号20160524），色谱甲醇（美国DIKMA），1，2-丙二醇（天津市致远化学试剂有限公司），肉桂油（广西平南县六陈老谢肉桂场）。

清洁级雄性SD大鼠，体质量220 g，黑龙江中医药大学实验动物中心提供，动物许可证号SCXK（黑）2013-004。

2  方法与结果

2.1  马钱子总碱中马钱子碱和士的宁分析方法的建立

分别配制马钱子碱和士的宁对照品溶液、马钱子总碱提取物供试品溶液、体外透皮空白接受液及体外透皮试验接受液。考察方法的专属性、线性关系、精密度、稳定性、重复性及回收率。

马钱子总碱中马钱子碱和士的宁HPLC分析条件为：采用DIKMA Diamonsil C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 ?m），流动相为甲醇∶水=24∶76（水∶冰乙酸∶三乙胺=230∶2.40∶0.30），流速1.0 mL/min，检测波长254 nm，柱温30 ℃，进样量10 ?L。以浓度为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，进行线性回归，线性关系考察结果见表1，色谱图见图1。结果表明，马钱子碱和士的宁的精密度RSD分别为0.42%、0.27%，24 h稳定性RSD分别为0.87%、0.35%，重复性RSD分别为0.60%、0.33%，平均回收率分别为97.83%（RSD=0.28%）、98.65%（RSD=0.39%）。该分析方法的专属性、精密度、稳定性、重复性、准确性均良好。马钱子碱和士的宁在提取物中的质量浓度分别为0.04、0.10 g/L。

2.2  不同浓度肉桂油对马钱子碱和士的宁透皮吸收的影响

2.2.1  供给液的制备

用丙二醇-水（80∶20）[8]配制成不含肉桂油及含肉桂油0.5%、1%、3%、5%、10%（V/V）的溶液各50 mL，超声混匀，以3%氮酮作为阳性对照。为确保其具有最大的热力学活性和漏槽条件，分别取上述不同浓度肉桂油溶液配制成马钱子碱和士的宁的饱和溶液作为供给液，低温避光密闭保存备用。