miRNA-329和Tiam1在胃癌中的表达及其临床意义*

田 衍，舒 若，曾玉剑，王昆华，罗华友

(昆明医科大学第一附属医院胃肠与疝外科，昆明 650032)

胃癌是最常见的癌症之一，主要发生在亚洲国家，包括韩国、日本和中国[1]。胃癌的发生受到多种因素的影响，包括高盐食物、硝化食品和酒精摄入过量，水果和蔬菜摄入过少，吸烟和幽门螺旋杆菌感染等[2]。与其他恶性肿瘤一样，遗传和表观遗传因素均参与了胃癌的发病机制[3]。如果在发病早期诊断出胃癌，其病死率会大大降低[4]，因此寻找发病早期的特异性肿瘤标记物来筛选高风险人群具有重要作用。但是，由于肿瘤标记物的低敏感度和特异度，检测胃癌的标记物较为有限[5]。因此，发现诊断胃癌的新的标记物是学界目前亟待解决的重大问题。

表1 RT-qPCR检测基因的引物序列

miRNA是一类片段大小为21～25 bp的非编码RNA，它们能够通过抑制mRNA的翻译或者绑定mRNA的3′-UTR区减少mRNA分子，从而沉默它们同源的靶基因,在不同的细胞过程中发挥重要作用，维持正常的生理环境[6-8]。在癌症中，特别的miRNA能够作为抑癌因子或致癌因子，因此被认为是癌症早期诊断和判断预后的生物标记物[9]，能够控制肿瘤的多种功能，包括细胞增殖、转移、入侵、分化、凋亡和代谢过程等[10]。研究发现，miRNA-329(miR-329)在胃癌中低表达，而其靶基因T淋巴瘤浸润转移诱导因子1(Tiam1)在胃癌中高表达[11-12]。但目前综合分析miR-329和Tiam1在胃癌中的表达及其临床意义的文献较少，本研究通过检测胃癌组织和癌旁组织中miR-329、Tiam1 mRNA表达，分析两者相关性，并且观察它们与胃癌病理特征的关系，以探讨胃癌的发病机制和潜在的药物治疗靶点。

1 资料与方法

1.1一般资料 在取得患者知情同意后，收集本院2015年6月至2017年3月手术切除的胃癌组织标本及正常的癌旁组织(距离癌组织大于3 cm)，手术切除的新鲜标本置于-80 ℃冰箱保存。标本共计36例，其中男23例，女13例；年龄40～79岁，平均(67.89±8.19)岁。参考2010年国际抗癌联盟/美国癌症联合委员会(UJCC/AICC)的TNM分期标准对胃癌组织进行临床分期[13]。

1.2方法

1.2.1检测方法 按照Trizol试剂说明书取约50 mg组织提取总RNA，RNase-Free H2O溶解RNA，微量分光光度计检测RNA浓度及纯度，然后反转录合成cDNA，-80 ℃保存备用。采用Taqman RT-PCR kit进行PCR扩增，检测miR-329以U6为内参基因，检测Tiam1 mRNA表达水平以甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)为内参基因，引物序列见表1。反应在ABIQ6型实时荧光定量PCR仪上进行，测定每个样品的Ct值，相对含量为2-△△Ct。

1.2.2观察指标 记录并统计所有患者标本的临床分期及是否出现淋巴结转移情况。

2 结 果

2.1miR-329与Tiam1 mRNA在胃癌组织和癌旁组织中的相对表达量分析 胃癌组织的miR-329水平比癌旁组织低，差异有统计学意义(P<0.05)；胃癌组织Tiam1 mRNA水平比癌旁组织高，差异有统计学意义(P<0.05)，见表2。

表2 miR-329、Tiam1 mRNA在胃癌组织和癌旁组织中的水平比较

2.2miR-329与Tiam1 mRNA的相关性分析 将miR-329与Tiam1 mRNA在胃癌组织与癌旁组织中的相对表达量进行相关分析，结果显示二者表达呈明显负相关(r=-0.854，P<0.01)，见图1。

图1 miR-329与Tiam1 mRNA表达的相关性

2.3miR-329、Tiam1表达与胃癌主要临床病理特征的关系 在不同临床分期中，miR-329和Tiam1 mRNA水平表现出不同的趋势。随着临床分期的进展，miR-329水平下降，其中Ⅲ期和Ⅳ期胃癌组织中miR-329水平明显低于Ⅰ期和Ⅱ期胃癌组织(P<0.05)。随着临床分期的进展，Tiam1 mRNA表达上升，其中Ⅲ期和Ⅳ期胃癌组织中Tiam1 mRNA水平明显高于Ⅰ期和Ⅱ期胃癌组织(P<0.05)。miR-329在有淋巴结转移的胃癌组织中的表达明显低于无淋巴结转移者(P<0.05)，而有淋巴结转移的胃癌组织中Tiam1 mRNA的水平明显高于无淋巴结转移者(P<0.05)，见表3。

表3 miR-329、Tiam1 mRNA水平与胃癌临床病理特征的关系

3 讨 论

胃癌是一种恶性上皮肿瘤疾病，具有高发病率和病死率[14-16]。研究表明，miRNA在多种癌症中异常表达，并且参与癌症的发生和发展[17-19]。miR-329在许多癌症中低表达，如神经母细胞瘤、多形性胶质细胞瘤和胰腺癌等[20-22]。miR-329通过绑定KDM1A能够抑制神经母细胞瘤细胞的生长和运动[20]。而在胃癌中，通过下调Tiam1、miR-329能够抑制细胞的入侵和生长[11]。

本研究发现，胃癌组织中miR-329表达下降，同时Tiam1过表达，两者呈明显负相关。结合相关文献报道及生物信息学分析，猜测肠道正常组织miR-329对Tiam1的表达负向调控。在各种致瘤因子的刺激下，miR-329对Tiam1的负向调控相对较弱，从而使Tiam1的表达在病理状态下增加，影响肿瘤的微环境，从而进一步诱导和促进肿瘤细胞的转移。本研究发现，与癌旁正常组织相比，Tiam1在胃癌组织中的表达升高，且TNM分期为Ⅰ、Ⅱ期胃癌组织中miR-329的表达水平明显高于Ⅲ、Ⅳ期胃癌组织(P<0.05)，而Ⅰ、Ⅱ期胃癌组织中Tiam1 mRNA的表达水平明显低于Ⅲ、Ⅳ期胃癌(P<0.05)，因此推测miR-329和Tiam1 mRNA可能成为胃癌临床分期的指标。另外，miR-329在有淋巴结转移的胃癌组织中的表达明显低于无淋巴结转移者，Tiam1 mRNA表达则与其相反。曹苏娟等[23]研究发现，与正常胃黏膜组织相比，Tiam1在胃癌组织中高表达，且随着TNM分期的升高和淋巴结转移的发生，Tiam1蛋白染色阳性率逐渐升高。LIU等[24]研究发现Tiam1在转移性结肠癌细胞系(LoVo和SW620)中的表达明显高于原发性结肠癌细胞系(LS174T、SW480、HCT116、LST、HRT和Hee8693)的表达，这说明Tiam1基因与癌症转移性相关。上述结果均证明，Tiam1的表达与癌症的侵袭、转移密切相关。而本文结果提示，胃癌中miR-329表达下降，Tiam1表达上调可能是胃癌的发病机制之一，miR-329和Tiam1可能是胃癌潜在的诊断标志物。