中国黄羽鹌鹑哈德氏腺发育的增龄变化及形态组织学观察

赵 飘， 何 敏， 吕莹莹， 韦靖婧， 宋坤达， 陈小梅

(四川农业大学 动物医学院，四川 成都 611130)

哈德氏腺(Harderian gland，HG)，亦称瞬膜腺、第三眼睑腺、副泪腺，属于眶腺的一种，是禽类眼窝内的外分泌腺体之一[1-2]，在两栖动物[3]、爬行动物[4]、鸟类[5]和哺乳动物[6]等动物体内均有报道。不同动物哈德氏腺的解剖学结构特征存在明显的种属差异，这些差异与动物系统进化水平相适应。

鹌鹑简称鹑，在我国又名早秋、罗鹑、赤喉鹑等[7]，饲养量仅次于鸡。我国对鹌鹑的研究主要集中在营养[8]、羽色[9]、抗性[10]、遗传[11]及生产性能[12]等方面，对鹌鹑哈德氏腺的研究则是在胚胎期[13]，对哈德氏腺组织结构的全发育过程报道较少。本研究通过观察不同周龄中国黄羽鹌鹑哈德氏腺生长指标和形态组织结构，旨在多角度阐明哈德氏腺发育的变化，丰富形态学资料，为鹌鹑临床生产提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料

选用0、1、2、3、4、5、6、10、14、18、22、26、30、34、38周龄健康黄羽鹌鹑90只，随机分为15组，每组6只，购自成都市邛崃市彭氏鹌鹑养殖场。

1.2 方法

1.2.1 形态学观察

将黄羽鹌鹑称重后麻醉，解剖并取出哈德氏腺，观察哈德氏腺的大小及形态。

1.2.2 宏观生长指标测定

测量哈德氏腺长、宽及质量，计算哈德氏腺生长指数。

1.2.3 哈德氏腺组织学观察

将取出的哈德氏腺立即放入Bouin’s固定液中24 h，流水冲洗24 h，常规脱水透明，石蜡包埋，制作4～6 μm厚石蜡切片，HE染色，显微镜观察，用江苏捷达图像分析软件测量腺体、导管、小叶和小梁的平均面积与平均直径。

1.2.4 哈德氏腺超微结构观察

将取出的哈德氏腺置于2.5%戊二醛中固定，随后经取材、前固定、漂洗、后固定、漂洗、脱水、浸透、包埋、聚合、切片、染色和干燥，在透射电镜下进行组织超微结构观察，并摄片。

2 结果与分析

2.1 中国黄羽鹌鹑哈德氏腺的位置与形态

中国黄羽鹌鹑出生时就具备完整的哈德氏腺，位于眼眶内、眼球的腹侧和后内侧，在视神经区呈喙状延伸，一端游离，另一端由腺体导管开口于第三眼睑弯窿的内角，腺体呈不规则带状，一端小，一端大，浅粉色，左右对称(图1)。

2.2 宏观生长指标

如表1所示，鹌鹑体质量随周龄逐渐增加，在14周龄达到最大，为(156.58±2.42) g。哈德氏腺的绝对质量随周龄逐渐增加，22周龄达到最大，为(23.21±6.23) mg；哈德氏腺的绝对质量在0～22周龄保持上升趋势，22周龄与0～1周龄相比差异显著(P<0.05)，22周龄与26～38周龄相比差异不显著(P>0.05)。哈德氏腺指数呈下降趋势，在0周龄达到最大；4周龄与0～38周龄相比，差异不显著(P>0.05)。哈德氏腺的左、右长径、宽径随周龄增加逐渐增加，6周龄时达到最大。

2.3 哈德氏腺组织学观察

中国黄羽鹌鹑哈德氏腺为复管泡状腺，腺体外有结缔组织被膜，被膜延伸至腺体实质中，将腺体分为多个大小不等的小叶(图2-a、b)。小叶由腺泡和腺管组成，腺泡腔汇集成次级收集管，次级收集管汇成三级收集管，最后汇成一条几乎纵贯腺体全长的主导管，主导管位于整个腺体的中心(图2-c、d、e)。哈德氏腺的腺泡呈球形，由柱状上皮细胞排列而成，细胞核位于细胞的基底部，腺泡间有结缔组织填充(图3-a)，在各级导管周围，富含淋巴细胞，细胞间隙明显，形成弥散淋巴组织(图3-c、d)，各级导管间隙能见到散在的红细胞或聚集成团的红细胞(图3-b)。

A，解剖图，示哈德氏腺位置(箭头)，5周龄；B，鹌鹑哈德氏腺的具体形态。A， Anatomical image showed the location of the harderian gland (arrow)， at 5 weeks old; B， The specific morphology of quail Harderian gland.图1 黄羽鹌鹑哈德氏腺的形态观察Fig.1 The morphological observation of Harderian gland of the yellow quail

表1不同周龄黄羽鹌鹑哈德氏腺的常规形态学

Table1The morphological measurement in the Harderian gland of the different-week old yellow quail

周龄Week-old体质量Body weight/g绝对质量Absolute weight/mg哈德氏腺指数Organ index/g·mg-1左侧长径Length of left/mm左侧宽径Width of left/mm右侧长径Length of right/mm右侧宽径Width of right/mm08.66±0.58 j2.81±0.61 b0.32±0.06 a3.78±1.02 e1.13±0.08 c3.86±1.03 c0.98±0.11 e121.90±2.91 i6.56±1.62 b0.31±0.09 ab4.75±0.70 e1.66±0.46 bc4.50±0.44 c1.96±0.64 d256.43±2.41 h15.48±3.30 a0.27±0.06 ab5.86±0.90 d2.18±0.27 ab6.95±1.16 ab2.40±0.65 cd373.45±1.36 g17.83±4.42 a0.24±0.06 ab6.66±0.97 cd2.41±0.42 ab6.33±0.76 b2.55±0.29 bc4102.85±2.13 f18.08±4.75 a0.17±0.04 ab7.30±1.03 abc3.01±0.45 a7.16±0.93 ab2.56±0.52 abc5117.90±2.23 e18.96±3.13 a0.16±0.02 b6.76±0.79 cd2.45±0.22 ab7.01±1.17 ab2.38±0.39 cd6139.25±1.57 d21.30±2.31 a0.15±0.01 b8.10±0.68 a2.76±0.22 ab8.28±0.30 a3.05±0.08 a10153.65±3.03 abc21.74±2.11 a0.14±0.01 b8.03±1.32 a2.34±0.23 ab8.13±0.90 ab2.90±0.49 ab14156.58±2.42 a22.06±3.35 a0.14±0.02 b7.93±0.22 ab2.68±0.32 ab7.02±0.84 ab2.50±0.53 bc18154.30±2.33 ab22.70±2.46 a0.14±0.01 b6.95±1.06 bc2.48±0.14 ab6.50±0.31 b2.75±0.32 abc22152.15±2.46 abc23.21±6.23 a0.15±0.04 b6.82±0.77 cd2.81±0.44 a6.90±1.10 ab2.51±0.38 bc26150.31±3.26 abc21.56±4.48 a0.14±0.03 b7.10±0.58 abc 2.50±0.17 ab7.30±0.50 ab2.86±0.30 abc30147.28±1.80 c21.41±2.62 a0.14±0.01 b7.40±1.42 abc3.00±0.62 a7.38±0.76 ab2.60±0.51 abc34148.83±1.97 bc21.06±2.58 a0.14±0.01 b7.40±0.63 abc2.80±0.37 a6.44±0.46 b2.80±0.27 abc38146.70±2.58 c20.56±2.44 a0.14±0.01 b6.98±0.65 bc2.98±0.30 a6.95±1.53 ab2.85±0.41 abc

同列数据后无相同字母表示差异显著(P<0.05)。下同。

Data marked without the same letters within the same row indicated significant difference atP<0.05. The same as below.

0～1周龄时，淋巴细胞呈分散状；2～3周龄时，淋巴细胞排列成不规则的团索状淋巴小结和淋巴索(图3)。如表2所示，哈德氏腺腺体直径随周龄增长而增大，到6周龄时达到最大；6周龄与0～5周龄和10～38周龄相比差异显著(P<0.05)。小叶直径在4周龄时达到最大；4周龄与0～2周龄相比差异显著(P<0.05)。导管直径在2周龄时达到最大，2周龄与0～1周龄和4～38周龄相比，差异显著(P<0.05)。小梁直径在6周龄达到最大；6周龄与0～2周龄和18～38周龄相比，差异显著(P<0.05)。

2.4 哈德氏腺超微结构观察

在电镜下可见，中国黄羽鹌鹑哈德氏腺在2周龄与26周龄时差异不大，为小管泡型，小叶间小梁含有成纤维细胞和血管，腺管内衬有柱状上皮细胞，细胞腔的顶端表面被微绒毛覆盖，富含淋巴细胞(图4-f)，含有丰富的线粒体和发达的内质网，大部分线粒体嵴清晰可见，内质网排列紧密，略为扩张。在细胞质中可见3种类型的囊泡：Ⅰ型囊泡电子密度较低，染色较浅，包括不同的均匀染色的类脂物质(图4-b)；Ⅱ型囊泡电子密度最高，染色最深，且通常出现在细胞质顶端(图4-b)；Ⅲ型囊泡电子密度介于Ⅰ型囊泡和Ⅱ型囊泡之间，通常位于内质网周围(图4-a)。

3 讨论

禽类与哺乳动物的哈德氏腺在形态学和组织学上存在较大差异。禽类哈德氏腺呈扁平型、椭圆形或者沙漏型，通常位于眼球的腹侧和后内侧[2]。在哺乳动物中，哈德氏腺是一种外分泌腺，一般呈弓形，凸面紧靠眶骨，凹面紧靠眼球，游离缘呈半月形，通常位于眶腔的后侧和鼻侧，有时比眼球本身更大，能与真正的泪腺区分开[14]，腺体分支的管状泡端部具有宽大的腔室，并且很少有管道系统，在组织切片中难以反映出来[15]。哺乳动物的哈德氏腺主要分泌脂质，其分泌的脂质可能转化为色素或作为脂蛋白复合物附着于色素上，以此来参与机体的脂质代谢过程[16]。不同禽类哈德氏腺的形态与大小有所不同，显微结构差异较小。鸡的哈德氏腺呈扁哑铃形，两端粗大钝圆(后端大于前端)，中间细小，淡红色或红褐色，表面可见大小不等的圆形或多边形凸起的分叶状结构[17]，为复管泡状腺，腺体外由一层薄的结缔组织包裹，结缔组织深入腺体，将其分成大小不等的小叶，其间的导管分为初级、次级和三级导管[18]。本研究发现，中国黄羽鹌鹑哈德氏腺腺体呈不规则带状，一端小，一端大，浅粉色，基本组织结构与鸡的哈德氏腺相似，结缔组织深入腺体，将其分成大小不等的小叶，含有初级、次级和三级导管，各级导管间及管腔可见大量淋巴细胞，在电镜下偶见脂质，电镜下内质网和线粒体发育良好，同时可观察到不同数量和颜色的分泌囊泡，细胞顶部有微绒毛，与已有报道一致[19]。已有研究表明，鹌鹑哈德氏腺管腔分泌物主要是中性黏蛋白、酸性黏蛋白与碱性黏蛋白，且存在大量浆细胞[20]，浆细胞主要由淋巴细胞发育而来[21]，并能在哈德氏腺中检测到IgG、IgM、IgA等相关因子[22]，与本研究发现哈德氏腺存在大量淋巴细胞的研究结果一致。

a～o 为0、1、2、3、4、5、6、10、14、18、22、26、30、34、38周龄黄羽鹌鹑哈德氏腺组织结构。Rc，红细胞；T，小梁；A，腺泡；L，小叶；Lu，管腔；Bv，血管；Pd，主导管；Sd，次级导管；Td，三级导管。a-o showed histological observation of 0， 1， 2， 3， 4， 5， 6， 10， 14， 18， 22， 26， 30， 34， 38 week-old yellow quail Harderian gland. Rc， Red blood; T， Trabecalae; A， Acini; L， Lobus; Lu， Lumen; Bv， Blood vessel; Pd， Primary duct; Sd， Secondary duct; Td， Tertiary duct.图2 不同周龄黄羽鹌鹑哈德氏腺的组织结构观察(100×)Fig.2 Histological observation of different week-old yellow quail Harderian gland(100×)

a～d为0、1、2、3周龄黄羽鹌鹑哈德氏腺组织结构。Rc，红细胞；Lc，淋巴细胞；A，腺泡。a-d showed histological observation of 0， 1， 2， 3 week-old yellow quail Harderian gland. Rc， Red blood；Lc， Lymphocyte；A， Acini.图3 0～3周龄黄羽鹌鹑哈德氏腺的组织结构观察(400×)Fig.3 Histological observation of 0-3 week-old yellow quail Harderian gland(400×)

表2不同周龄黄羽鹌鹑哈德氏腺的组织学显微测量

Table2The histology micrometric in the Harderian gland of the different-week old yellow quail

周龄Week-old腺体直径Gland diameter/mm小叶直径Lobule diameter/μm导管直径Catheter diameter/μm小梁直径Trabecular diameter/μm061.0±7.56 j286.12±29.37 e44.28±2.97 e5.83±0.35 e177.87±3.80 j490.63±34.88 cd77.46±5.88 bcd13.93±0.49 bcd2135.87±1.20 f628.39±68.52 ab95.83±2.33 a16.28±1.68 bc3152.93±2.33 e599.90±60.70 ab87.89±5.84 ab20.11±0.79 ab4206.35±7.15 bc696.83±44.75 a77.86±7.75 bcd20.37±1.43 ab5216.84±10.95 b610.16±49.57 ab84.24±3.54 b21.94±3.39 ab6253.23±4.34 a611.02±56.40 ab89.34±3.96 ab28.47±4.04 a10223.76±11.34 b596.72±20.65 ab81.66±6.15 bc20.39±2.16A ab14218.99±7.47 b618.19±39.24 ab84.12±2.86 b18.84±4.11 abc18205.56±7.01 bc603.34±58.95 ab73.27±3.71 cd16.93±3.04 bc22190.41±7.26 cd577.56±29.13 b67.39±5.71 cd15.85±2.47 bcd26169.43±12.79 de554.00±17.00 bc65.51±6.03 cd14.95±4.59 bcd30152.32±10.02 ef531.57±59.08 bcd70.07±13.77 cd14.50±3.3 bcd34148.62±6.46 ef493.01±33.57 bcd65.20±9.75 cde11.89±1.39 d38141.69±4.80 ef470.68±34.12 d60.74±7.81 de12.05±2.46 cd

a～c，2周龄；d～e ，26周龄。N，核仁；M，线粒体；ER，内质网；Ld，脂滴；TⅠ，Ⅰ型囊泡；TⅡ，Ⅱ型囊泡；TⅢ，Ⅲ型囊泡；Mi，微绒毛；Lu，管腔。a-c， 2 week-old; d-f， 26 week-old. M， Mitochondrion; ER， Endoplasmic reticulum; N， Nucleoli; Ld， Lipid drop; TⅠ， Type Ⅰ vesicles; TⅡ， Type Ⅱ vesicles; TⅢ， Type Ⅲ vesicles; Mi， Microvilli; Lu， Lumen.图4 哈德氏腺的超微结构变化Fig.4 Ultrastructural changes of Harderian gland

禽类哈德氏腺随年龄发育的变化稍有差异，如鸡的哈德氏腺从胚胎期的第11～12天结膜的上皮细胞发育而来。哈德氏腺的发育分为2个阶段：在上皮发育阶段(胚胎生活的第13～17天)，腺泡上皮分化为腺上皮附近的管腔，基底上皮细胞的分离层；在胚胎期的第17～18天，间质组织被嗜酸性粒细胞填充；在第17～20天，腺上皮经历分泌转化。在第21天，分泌功能得到充分发展[23]。Salah[13]研究发现，在胚胎期的第7天，鹌鹑的哈德氏腺首次出现，开始发育为长管，其近端具有狭窄的管腔并且在远端具有未分化的腔；随后几天，腺泡、导管逐渐形成，在孵化后期达到成熟，与本研究发现中国黄羽鹌鹑的哈德氏腺出生时就存在，且具备完整形态的研究结果一致。