核酸检测在血液筛选中的应用研究

(濮阳市红十字中心血站，河南 濮阳 457000)

核酸检测技术(Nucleic acid technology，NAT)可缩短丙型肝炎抗体(抗-HCV)、抗人类免疫缺陷病毒(抗-HIV-1/2)病毒检测窗口期，提高血液制品的使用安全[1]。国外大多数国家早已将NAT检测列入献血者筛查，我国自2011年全国范围展开核酸检验技术检验，NAT检测已逐渐应用于血液中心的血液安全筛查中[2]。卫生部于2012年颁布实施的《血站技术操作规程》指出可使用一种核酸试剂和一种ELISA试剂共同完成筛查血液，进一步规范了NAT检测[3]。本研究在不同试剂不同仪器上进行两遍ELISA检测，随后对无反应性和一种试剂有反应性标本进行NAT测定，观察NAT在血液筛查中的应用效果。

1 材料与方法

1.1 样本来源与血液处理

2017年2月～2018年2月采集的无偿献血者血液标本共32 756份，使用负压真空采血管EDTA-K2抗凝管留取标本两管，一管为不含分离胶管留5mL标本用于酶联免疫吸附试验(ELISA)检测，一管为含分离胶管留8mL标本用于核酸检测。核酸管需在血液采集后4h内，以1 006 g离心力离心20 min，置于2～6℃冰箱内待检。

1.2 血清学检测

瑞士TECAN公司生产的Freedom evoclinical全自动加样仪；瑞士 Hamil-ton公司生产的Hamilton Microlab FAME；上海科华和北京万泰提供的抗-HCV ELISA检测试剂；珠海丽珠提供的抗HIV-1/2 ELISA 检测试剂。

1.3 核酸检测

使用美国诺华公司提供的Procleix Tigris核酸检测系统；丙型肝炎病毒核酸(HCV RNA)鉴别试剂(Procleix HCV Discriminatory Probe Reagents)；人类免疫缺陷病毒核酸(HIV-1 RNA)鉴别试剂(Procleix HIV-1 Discriminatory Probe Reagents)。

1.4 核酸反应确证系统

美国罗氏公司提供的Cobas AmpliPrep/Cobas TaqMan 核酸检测系统，鉴别试剂(Cobas AmpliPrep/CobasTaqMan HCV test; Cobas AmpliPrep/Cobas TaqMan HIV test)。

1.5 血清学检测

采血后次日由不同检验人员利用两种试剂在不同仪器上检验两遍抗-HCV，抗-HIV等项目，仪器使用及试剂操作均严格按照说明书进行，由计算机软件分析结果。

1.6 核酸检测

由检验人员筛选核酸管，将ELISA反应性阴性标本筛出，ELISA反应阴性采用诺华核酸诊断系统运用三联检试剂(Procleix Ultrio Assay)进行单人次NAT检测，结果反应性标本则使用鉴别试剂进行进一步测定，明确病毒类型。

1.7 核酸反应性标本确证

将NAT检出反应性标本送至卫生部临检中心行Cobas AmpliPrep/Cobas TaqMan 核酸检测系统，进行、 HCV RNA 和 HIV RNA的分项确证和病毒载量测定。

1.8 统计学方法

选用统计学软件SPSS19.0 处理研究数据，计数资料采取%表示，组间对比进行χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

32 756例无偿献血标本中，通过ELISA筛查抗-HCV、抗HIV-1/2均无反应和存在一种试剂有反应性的标本共30 735份。NAT检测结果 30 735份NAT检测标本中，共检出39例阳性标本，阳性率为0.13%。39例NAT检测阳性的标本进行HCV RNA和HIV RNA两项定量确证，卫生部临检中心检出32例乙型肝炎病毒核酸(HBV RNA)阳性标本，阳性率为82.05%(32/39)，未检出HCV RNA和HIV RNA阳性。见表1。HBV RNA检出患者性别，年龄分布，差异无统计学差异(P>0.05)。见表2。

表2 三种病毒NAT确证结果

3 讨论

在临床实践中，大型综合性医院已将输血前常规检查方法有ELISA法逐渐改为化学发光法，但化学发光法检测原仍为抗原或抗体，针对窗口期、病毒变异和病毒数量等导致HCV、HIV等漏检因素仍然存在，尽管检验技术在不断进步，但仍然无法避免漏检的发生，对献血者血液的筛查和受血者输血前检查，均不能仅检测抗原或抗体[8]。本研究将所采集的无偿献血者血液标本进行ELISA筛查无反应性和一种试剂有反应性标本，后经NAT检测出阳性率为1.27%，随后进行NAT确证检测，未检出HCV RNA和HIV RNA阳性标本。经NAT确证检出HBV RNA阳性标本性别、年龄分布，差异无统计学意义(P<0.05)。证实核酸检测可降低ELISA检测漏检造成的输血后感染病毒传播疾病风险，NAT检测联合ELISA检测可有效地提高病毒感染者的检出率。

综上所述，ELISA检测血液中的抗原或抗体，NAT检测病毒核酸，两种检测方法优势结合可明显降低ELISA漏检几率，减少输血后病毒感染疾病的发生，提高临床输血安全，保障血液制品的用血安全。