桑寄生抗炎作用的初步实验研究

易春霞，洪正善，谭柳萍，李婉婷，曾春晖，杨柯

(1.广西中医药大学，广西 南宁530001；2.桂林市中医医院，广西 桂林 541002)

桑寄生作为我国传统常用中药材，主要在我国南部地区分布，为广西道地药材[1]。历代本草均有记载，具有祛风湿，补肝肾，强筋骨，安胎元功效，临床常用于风湿痹证、腰膝酸软、筋骨无力、崩漏经多、妊娠漏血、胎动不安、头痛目眩等证[2]。现代药理学研究主要集中在补肝肾、强筋骨等功效[3]，而祛风湿功效鲜有报道[4]。故本文对广西产的桑寄生抗炎作用进行初步研究，为后续深入研究其祛风湿功效提供一定的实验依据。

1 实验材料

1.1 药物及其制备 桑寄生：由本校药用植物教研室李永华研究员提供并鉴定为桑寄生科钝果寄生属广寄生[Taxilluschinensis(DC.) Danser]，采集于广西梧州。

桑寄生水提物(简称SJS)制备：称取桑寄生药材200 g，加水煎煮3次，3次的加水量依次为10倍、8倍、6倍水，3次煎煮时间依次为40、30、30 min，过滤，滤液合并浓缩至200 mL，4 ℃冰箱保存备用。

1.2 主要试剂 地塞米松(浙江仙琚制药股份有限公司，批号：1406113)；伊文思蓝(上海恒远生物科技有限公司，批号：821102)；冰醋酸(成都市科龙化工试剂厂，批号：2014111501)；二甲苯(天津市博迪化工有限公司，批号：20131006)；羧甲基纤维素(CMC，国药基团化学试剂有限公司，批号：20140619)；戊巴比妥钠(批号：530E032)。

1.3 主要仪器 PFB6000-1型电子天平(广州信沅仪器设备有限公司)；ST-360型全波长酶标仪(美国Epoch Biotek公司)；ST16R离心机(赛默飞世尔科技有限公司)。

1.4 实验动物 KM种小鼠：SPF级，6～8周龄，体重18～22 g，购自广西医科大学实验动物中心(动物合格证号：SCXK桂2009-0002)。

2 实验方法

2.1 对急性炎症的影响[5]

2.1.1 对冰醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增加的影响 取健康雄性KM种小鼠48只，18～22 g，按体重随机分为4组，即模型对照组(生理盐水)，阳性对照组(地塞米松，4.5 mg·kg-1)，SJS高、低剂量组(生药12、6 g·kg-1)，每组12只，各组小鼠均灌胃给药，按体重给药20 mL·kg-1，每天2次，连续3 d。末次给药l h后，按体重10 mL·kg-1，尾静脉注射0.5%伊文思蓝生理盐水溶液，并立即腹腔注射0.7%冰醋酸0.2 mL/只。致炎后30 min，颈椎脱臼处死小鼠，腹腔注入5 mL生理盐水，多次抖动小鼠腹腔，剪开腹腔，收集腹腔冲洗液。常温下3 000 rpm离心15 min，取上清液于波长590 nm处以生理盐水溶液为对照调零，比色测定吸光度OD值，以OD值表示伊文思蓝含量，反映腹腔毛细血管通透性。

2.1.2 对二甲苯致小鼠耳郭肿胀的影响 取健康雄性KM种小鼠48只，18～22 g，随机分为4组，每组12只，分组及给药按“2.1.1”项下方法进行。末次给药1 h后，用20 μL微量移液器将二甲苯以每只20 μL涂于小鼠右耳两面，左耳不涂作为空白对照，30 min后脱颈椎处死，剪下左右耳，用打孔器于两耳相同部位打下两圆耳片，称重，以左右耳片重量之差表示肿胀程度。按以下公式计算每只鼠耳郭肿胀率。

耳郭肿胀率(%)=(WR-WL)/WL×100%

其中，WR、WL分别代表每只鼠右、左耳片的重量。

2.2 对亚急性炎症的影响[6]取健康雄性KM种小鼠50只，随机分为5组，即假手术对照组(生理盐水)、模型对照组(生理盐水)、阳性对照组(地塞米松，4.5 mg·kg-1)，SJS高、低剂量组(生药12、6g·kg-1)，每组10只，各组均灌胃给药，给药容量为20 mL·kg-1，每天2次，连续给药3 d。于末次给药前一天，将各组小鼠背部剃毛，无菌操作下向小鼠背部皮下注入空气2 mL，形成圆形气囊。次日于末次给药后1 h，除假手术组用消毒针头及注射器向囊内注入无菌生理盐水2 mL 外，其余各组均注射无菌1.5%CMC溶液2 mL。于注射后6 h，抽取囊内CMC，精确吸取20 μL，稀释到0.4 mL 的生理盐水中，用微量移液器取10 μL 滴于血细胞计数板上，在光镜下计数白细胞数。

2.3 对慢性炎症的影响[7]取健康雄性KM种小鼠60只，按20 mL·kg-1体重，腹腔注射0.4%戊巴比妥钠麻醉，背部碘酒消毒，切开约0.5 cm 长的小口，将2个灭菌棉球[每个棉球重(10±0.2)mg，高压灭菌后，50 ℃烘箱烤干]分别植入小鼠左右腋下，并缝合，取术后合格小鼠48只(要求无脓肿，不脱线，不移位)，随机分为4 组，即模型对照组(生理盐水)、阳性对照组(地塞米松4.5 mg·kg-1)、SJS高、低剂量组(生药12、6 g·kg-1)，每组12只。每天2次，连续给药7 d，给药容量为20 mL·kg-1。末次给药l h后处死动物，取出棉球，在70 ℃烘箱干燥至恒重后称重，减去原棉球重量即为肉芽肿净干重。按以下公式计算肉芽肿指数。取脾脏和胸腺称重，以观察连续给药后对免疫器官重量的影响。

肉芽肿指数(mg/g体重)=肉芽组织净干重/动物体重

3 实验结果

3.1 对急性炎症的影响

3.1.1 对冰醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增加的影响 结果表明，与模型对照组比较，地塞米松能明显降低冰醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增加(P<0.01)，表明实验设计和实验操作得当；SJS高、低剂量均能显著降低冰醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增加(P<0.05，0.01)，结果见表1。

表1 对冰醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增加的影响

注：与模型对照组比较，*P<0.05，**P<0.01；SJS高剂量组有1只小鼠由于灌胃操作死亡

3.1.2 对二甲苯致小鼠耳郭肿胀的影响 结果表明，与模型对照组比较，地塞米松能明显减轻二甲苯所致小鼠耳郭肿胀率(P<0.05)，表明实验设计和实验操作得当；SJS高剂量能显著减轻二甲苯致小鼠耳郭肿胀率(P<0.05)，结果见表2。

表2 对二甲苯致小鼠耳郭肿胀的影响

注：与模型对照组比较，*P<0.05；SJS高剂量组有1只小鼠由于灌胃操作死亡

3.2 对亚急性炎症的影响 结果表明，与模型对照组比较，假手术组小鼠CMC 囊中白细胞渗出明显少(P<0.001)，表明皮下注射操作无误，无感染现象；地塞米松能明显减少CMC 诱导白细胞游出(P<0.001)，表明实验设计和实验操作得当；SJS高剂量能显著减少CMC 诱导白细胞游出(P<0.001)，结果见表3。

注：与模型对照组比较，*P<0.001

3.3 对慢性炎症的影响 结果表明，与模型对照组比较，地塞米松能明显降低棉球肉芽肿指数(P<0.001)，表明实验设计和实验操作得当；桑寄生水提物高剂量能显著降低棉球肉芽肿指数(P<0.01)，结果见表4。

表4 对小鼠棉球肉芽肿的影响

注：与模型组比较，*P<0.01，**P<0.001；SJS高剂量组有1只小鼠在实验过程由于灌胃操作死亡，且在摘取肉芽棉球时有1只小鼠取棉球失误1个

3.4 对免疫器官重量的影响 结果表明，与模型对照组比较，地塞米松能明显减轻动物的脾脏和胸腺重量(P<0.001)，桑寄生水提物高、低剂量对脾脏和胸腺重量均无显著影响(P>0.05)，表明连续使用桑寄生水提物对小鼠免疫器官重量无影响，结果见表5。

表5 对免疫器官重量的影响

注：与模型组比较，*P<0.001；SJS高剂量组有1 只小鼠在实验过程由于灌胃操作死亡

4 讨论

炎症(inflammation)是指具有血管系统的活体组织对损伤因子所发生的防御反应，炎症反应是指机体损伤局部组织所呈现的反应，其中血管反应是炎症过程的中心环节[8]。在炎症过程中，一方面炎症是以防御为主的天然的局部反应，对机体是有利的；另一方面，炎症又是潜在有害的，许多疾病的发病基础都是炎症反应。炎症根据持续时间不同可分为急性和慢性。急性炎症以血管系统的反应为主，以发红、肿胀、疼痛等为主要特征的炎症。增生反应一般在炎症后期或慢性炎症时比较显著。炎症增生是一种重要的防御反应，具有限制炎症的扩散和弥漫，使受损组织得以再生修复的作用。但过度的组织增生又对机体不利，使原有的实质细胞遭受损害而影响器官功能。

本文进行的抗炎实验结果表明，与模型对照组比较，SJS水提物高、低剂量均能显著降低冰醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增加(P<0.05)，高剂量能显著减轻二甲苯致小鼠耳廓肿胀率(P<0.05)，表明桑寄生水提物对急性炎症有显著抑制作用；SJS水提物高剂量能显著减少CMC诱导白细胞游出(P<0.001)，表明桑寄生水提物对以白细胞渗出、游走为主要特征的亚急性炎症有显著抑制作用；SJS水提物高剂量能显著降低棉球肉芽肿指数(P<0.01)，同时，对脾脏和胸腺重量无显著影响(P>0.05)，表明桑寄生水提物对炎症后期肉芽组织增生也有显著的抑制作用。

综上所述，桑寄生水提物对急性、亚急性和慢性非感染性炎症具有良好的对抗作用，且对免疫器官的重量无明显影响，表明桑寄生在抗炎的同时未出现地塞米松等甾体激素类抗炎药抑制免疫系统的不良反应。