无硫党参饮片质量标准的制定与提高

刘国秀　翟华强　钱忠直　李丝雨　李宁宁　戴莹　王宁宁　李红燕　单晓松

摘要：目的 研究无硫党参饮片的安全性、有效性质量标准，为其质量监控和临床应用提供参考。方法 分别采用薄层色谱法、气相色谱法测定来自5个产区的21批无硫党参饮片的水分、总灰分、二氧化硫残留量、浸出物，分别采用原子吸收分光光度法和气相色谱法测定其重金属及有害元素、农药残留量，并采用HPLC建立党参中党参炔苷的含量测定方法。结果 21批党参饮片的二氧化硫残留不超过7 mg/kg，铅含量不超过1.124 mg/kg，砷含量不超过0.067 mg/kg，镉含量不超过0.058 mg/kg，汞含量不超过0.003 mg/kg，铜含量不超过14.121 mg/kg，总六六六含量不超过0.03 mg/kg，总滴滴涕含量不超过0.031 mg/kg，五氯硝基苯含量不超过0.008 mg/kg。党参炔苷含量测定平均加样回收率为97.71%，RSD=1.32%，平均质量分数为0.138%。结论 无硫党参饮片的安全性指标限量为二氧化硫残留不超过10 mg/kg，重金属和农药残留标准符合药典对党参饮片的限量标准，有效性指标含量测定方法可靠，可为党参的质量监控及临床使用提供依据。

关键词：党参；质量标准；安全性；有效性；含量测定

中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2019）03-0071-06

Abstract： Objective To study the safety and effectiveness of quality standards of sulfur-free Codonopsis Radix Decoction Pieces； To provide references for the quality monitoring and clinical application of sulfur-free Codonopsis Radix Decoction Pieces. Methods The check items （water， total ash， sulphur dioxide， and ethanol-soluble extractives） of 21 batches of sulfur-free Codonopsis Radix Decoction Pieces from five producing areas were determined by TLC and GC. Heavy metals， harmful elements and pesticide residues were detected by atomic absorption spectrophotometry and GC. The method for content determination of Lobetyolin in Codonopsis Radix was established by HPLC. Results Safety index check items of 21 batches of Codonopsis Radix Decoction Pieces showed： Sulfur dioxide residue ≤ 7 mg/kg， Pb content ≤ 1.124 mg/kg， As content ≤ 0.067 mg/kg， Cd content ≤ 0.058 mg/kg， Hg content ≤ 0.003 mg/kg， Cu content ≤ 14.121 mg/kg. total BHC ≤ 0.03 mg/kg， total DDT ≤ 0.031 mg/kg， and pentachloronitrobenzene （PCNB） ≤ 0.008 mg/kg. The average sample recovery rate of Lobetyolin content was 97.71%， RSD was 1.32%， and the average fraction was 0.138%. Conclusion The safety index of sulfur-free Codonopsis Radix Decoction Pieces is sulfur dioxide residue ≤ 10 mg/kg. The heavy metal and pesticide residue standards meet the limit standard for Codonopsis Radix in pharmacopoeia. The method for determining the effectiveness index is reliable， which can provide a basis for the quality control and clinical use of Codonopsis Radix.

Keywords： Codonopsis Radix； quality standards； safety； effectiveness； content determination

党参为桔梗科植物党参Codonopsis pilosula （Franch.）Nannf.、素花党参Codonopsis pilosula Nannf. var. modesta（Nannf.）L. T. Shen或川党参Codonopsis tangshen Oliv.的干燥根[1]，为临床常用补气药，功效近似人参而稍弱，能健脾益肺、养血生津，主产于山西、甘肃、陕西、四川等地，市场上有潞党、白条党、纹党、板桥党、西党、川党等品种[2]。党参为传统的熏硫加工中药材[3]。近年来，随着无硫加工技术的兴起，可以在不使用二氧化硫熏蒸的条件下使党参干燥而达到防腐烂、防霉变、防虫蛀等效果，其质量也得以提高[4]。然而，目前尚缺少无硫党参饮片重金属及有害元素限量、有机农药残留限量、指标含量测定等评价标准，使其临床应用缺乏一定的有效性和安全性保障。基于以上现状，本试验从党参安全性指标如二氧化硫、重金属及有害元素、有机农藥等方面对党参的质量标准进行提高，以党参中具有显著生理活性的主要成分党参炔苷为有效性指标成分，建立其含量测定方法，为无硫加工党参饮片的质量监控和临床应用提供参考依据。

1 仪器与试药

Agilent1200高效液相色谱仪（G131513二极管阵列检测器），安捷伦科技有限公司；Clarus600气相色谱-质谱联用仪，美国PE公司；AA240Z、AA240原子吸收分光光度计，美国瓦里安；AFS-3100双通道原子荧光光度计，北京科创海光仪器有限公司；BS 224 S型电子天平，北京赛多利斯仪器系统有限公司；METTLER AL204型电子天平，瑞士梅特勒公司；Ethos T型微波消解仪，意大利Milestone公司；KQ-250高频数控超声波清洗仪，昆山市超声仪器有限公司。

对照品党参炔苷（批号111732-200904），中国食品药品检定研究院；铅（批号GBW08619 9031，500 mg/L）、砷（批号GBW08611 8114，100 mg/L）、镉（批号GBW0612 8112，100 mg/L）、汞（批号GBW08619 9041，100 mg/L）、铜（批号GBW08615 7064，500 mg/L），五氯硝基苯（PCNB）、α-六六六、β-六六六、γ-六六六、δ-六六六、pp'-DDE、PP'-DDD、OP'-DDT、PP'-DDT对照品溶液（浓度均为0.05 mg/mL），亚硫酸钠，国家标准物质中心。乙腈（色谱纯），天津市光复精细化工研究所；硝酸（优级纯）、甲醇（分析纯）、丙酮（色谱纯）、石油醚（沸程60～90 ℃，色谱纯）、二氯甲烷（色谱纯），天津市大茂化学试剂厂；其余试劑均为分析纯，水为纯净水和重蒸水。

21批党参饮片由甘肃神农文峰药业有限公司（神农药业）、陇西保和堂药业有限责任公司（保和堂药业）生产并提供，由国康本草生物科技有限公司认证。样品来源和生产信息见表1。

2 方法与结果

2.1 饮片鉴别

2.1.1 性状鉴别

呈圆柱形不规则的小段（长0.5～1 cm，直径0.4～2 cm）、小节（长3～5 cm，直径0.4～2 cm）。其余性状符合2015年版《中华人民共和国药典》（一部）党参药材的性状特征。

2.1.2 横断面显微特征

符合2015年版《中华人民共和国药典》（一部）党参药材横断面显微特征：木栓细胞数列至10数列，外侧有石细胞，单个或成群。栓内层窄。韧皮部宽广，外侧常现裂隙，散有淡黄色乳管群，并常与筛管群交互排列。形成层成环。木质部导管单个散在或数个相聚，呈放射状排列。薄壁细胞含菊糖。

2.1.3 薄层色谱鉴别

按2015年版《中华人民共和国药典》（一部）规定，党参以党参炔苷作为对照进行鉴别。取10批样品进行薄层色谱试验。供试品色谱中，在与党参炔苷对照品相应位置上显相同颜色的斑点。

2.2 检查项和浸出物测定

分别按2015年版《中华人民共和国药典》（四部）通则0832水分测定法第二法、通则2302灰分测定法、通则2331二氧化硫残留量测定法、通则2201醇溶性浸出物测定法（热浸法）对21批党参样品的水分、总灰分、二氧化硫残留量和浸出物进行考察。结果见表2。

由检测结果可以看出，不同时间、不同生产企业加工的党参饮片水分含量介于8%～12.5%，平均9.638%；总灰分介于2.6%～4.8%，平均3.662%；二氧化硫残留量介于2～7 mg/kg，平均3.81 mg/kg；浸出物介于57.2%～71.6%，平均64.314%。以上各项均在2015年版《中华人民共和国药典》（一部）对党参药材规定的限度之内。

2015年版《中华人民共和国药典》（一部）增补规定了中药材及其饮片二氧化硫残留限量，山药、牛膝、粉葛、甘遂、天冬、天麻、天花粉、白及、白芍、白术、党参等13种传统习用硫黄熏蒸的中药材及其饮片的二氧化硫残留量不得超过400 mg/kg，其余不得超过150 mg/kg。因传统加工、储存过程中存在硫磺熏蒸习惯，而无硫党参饮片采用党参段、党参节鲜货直接加工，没有经过硫磺熏蒸，所以，可以考虑将非硫磺熏蒸的二氧化硫残留限量作为无硫加工党参的标准，也可考虑对无硫加工党参饮片的二氧化硫残留量标准做进一步提高。

2.3 重金属及有害物质残留量测定

按2015年版《中华人民共和国药典》（四部）通则0406原子吸收分光光度法测定21批党参样品的重金属及有害元素含量。按2015年版《中华人民共和国药典》（四部）通则2341有机氯类农药残留量测定法，采用气相色谱法测定有机氯残留。结果见表3。

测定结果显示，不同时间、不同生产企业加工的党参饮片中铅含量不超过1.124 mg/kg，砷含量不超过0.067 mg/kg，镉含量不超过0.058 mg/kg，汞含量不超过0.003 mg/kg，铜含量不超过14.121 mg/kg；总六六六（总BHC）含量不超过0.03 mg/kg，总滴滴涕（总DDT）含量不超过0.031 mg/kg，PCNB含量不超过0.008 mg/kg。2015年版《中华人民共和国药典》（一部）对甘草、黄芪等部分中药重金属及有害元素、有机农药残留的限量规定：铅不得过5 mg/kg，砷不得过2 mg/kg，镉不得过0.3 mg/kg，汞不得过0.2 mg/kg，铜不得过20 mg/kg；总BHC不得过0.2 mg/kg，总DDT不得过0.2 mg/kg，PCNB不得过0.1 mg/kg。按此规定，所检测的21批党参样品全部符合标准。可以考虑将甘草、黄芪等重金属、有机农药残留限量标准作为党参的标准。

2.4 党参炔苷含量测定

2.4.1 色谱条件

色谱柱：ZORBAX SB-C18（250 mm×4.6 mm，5 ?m）；流动相：乙腈-水溶液（28∶72，V/V）；流速：1.0 mL/min；进样量：10 ?L；柱温：30 ℃；检测波长：269 nm。理论塔板数大于4000，党参炔苷与相邻峰分离度均大于1.5，分离度良好[5]。色谱图见图1。

2.4.2 对照品溶液的制备

将党参炔苷对照品置于干燥器中，用五氧化二磷减压干燥12 h以上，精密称取党参炔苷对照品4.82 mg，置10 mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，作为对照品贮备液（0.482 mg/mL），精密移取此溶液5.0 mL，置于10 mL棕色容量瓶，定容至刻度，即得0.241 mg/mL的对照品溶液。

2.4.3 供试品溶液的制备

取党参粉末（过4号筛）约2 g，精密称定，置150 mL具塞三角瓶中，精密加入甲醇25 mL，称定质量，超声提取（功率150 W，频率40 kHz）30 min，放至室温，称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，过滤，过0.45 ?m微孔滤膜，取续滤液，即得。

2.4.4 线性关系考察

精密移取浓度为0.241 mg/mL的党参炔苷对照品溶液1、2、4、6、8、10、12 ?L，按上述色谱条件进样，以进样量（?g）为横坐标、峰面积（mAU）为纵坐标绘制标准曲线，得线性方程Y=435.56X+17.491（r=0.999 2）。结果表明，党参炔苷进样量在0.241～2.892 ?g范围内与峰面积呈良好线性关系。

2.4.5 重复性试验

取党参细粉6份，每份2.0 g，分别精密称定，按“2.4.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.4.1”项下色谱条件测定，连续进样6次，计算得党参炔苷含量RSD=1.56%，表明该方法重复性较好。

2.4.6 精密度试验

精密吸取浓度为0.241 mg/mL的党参炔苷对照品溶液10 ?L，按“2.4.1”项下色谱条件下连续进样6次，计算得党参炔苷峰面积RSD=0.07%，表明该仪器精密度良好。

2.4.7 稳定性考察

称取党参药材细粉约2 g，精密称定，按“2.4.3”项下方法制备供试品溶液，分别于制备后0、2、4、6、8、10、16、24 h进样测定，计算得峰面积RSD=2.79%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.4.8 加样回收率试验

取已知党参炔苷含量（0.812 mg/g）的党参样品约1 g，共6份，精密称定，置150 mL具塞三角瓶中，各加浓度为0.832 mg/mL党参炔苷对照品溶液1 mL，按“2.4.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.4.1”项下色谱条件测定党参炔苷含量，结果平均加样回收率为97.71%，RSD=1.32%，见表4。

2.4.9 樣品含量测定

取21份党参样品，按“2.4.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.4.1”项下色谱条件进样测定，计算党参炔苷含量，结果见表5。可见，不同产区党参药材生产的党参饮片中党参炔苷的质量分数介于0.042%～0.318%，平均为0.138%。表明不同产地党参药材质量差异较大，导致党参饮片的质量也有较大的差异。

3 讨论

本试验对无硫党参饮片的二氧化硫残留量进行了研究。硫磺熏蒸能有效防腐、防霉、防虫蛀，并有利于中药材的干燥和增色，是一项传统的中药材贮藏养护加工技术。但硫磺熏蒸中药材导致的二氧化硫残留量超标严重危害患者的健康。代谢组学和健康风险评估分析计算认为，入汤剂煎煮1 h以上的中药饮片最大二氧化硫限量为750 mg/kg[6]，也有研究表明可以通过控制硫磺熏蒸时间来减少二氧化硫残留[7]。但熏硫过程不可避免会导致中药成分发生变化，进而影响其质量[8]。无硫党参饮片由于其特殊的加工工艺减少了二氧化硫残留量，在安全性方面有了很大提高，有更强的市场竞争力和更安全的临床疗效。2015年版《中华人民共和国药典》对党参药材的二氧化硫残留限量为400 mg/kg，一般不用硫熏的药材限量为150 mg/kg；WHO对草药含硫限量也为150 mg/kg；国际食品法典委员会建议，二氧化硫残留量>10 mg/kg的产品应该予以标识[9]。考虑到无硫党参饮片的含硫量低，建议无硫党参饮片的二氧化硫残留限量不超过10 mg/kg，以利于无硫党参饮片的国际化。

本试验还开展了无硫党参饮片的重金属及有害物质残留、有机农药残留等安全性指标的限量研究。对中药材及饮片中重金属及有害物质、农药残留的限定已成为行业趋势。土壤的重金属污染、过量使用有机农药，使中药材重金属及有害物质、农药残留量过大而严重影响了中药的安全性，各国药典均对这两项指标进行了限量要求[10]。2015年版《中华人民共和国药典》的重金属限量标准只对11种植物药、10种动物药和6种矿物药做了规定，其标准与国际ISO标准一致，符合中国绿色行业标准[11]。建议无硫党参饮片的重金属及有害物质残留限量与药典和中国绿色行业标准一致：铅不得过5 mg/kg，砷不得过2 mg/kg，镉不得过0.3 mg/kg，汞不得过0.2 mg/kg，铜不得过20 mg/kg。由于农药种类的复杂性以及检测方法的局限，目前药典只对少数中药品种上进行了农药残留量限定[12-13]。建议无硫党参饮片的有机农药残留限量与现有的甘草标准一致：总BHC不得过0.2 mg/kg，总DDT不得过0.2 mg/kg，PCNB不得过0.1 mg/kg。

本试验进行了党参中党参炔苷含量测定研究。党参炔苷具有抗炎、免疫调节及抗癌等多种生理活性，与其临床药效一致[14]。因此，开展党参炔苷含量测定对党参药材及饮片的质量控制和临床使用具有指导性意义。由测定结果可以看出，党参饮片中党参炔苷的质量分数介于0.042%～0.318%，波动范围较大。建议临床以所用批次党参饮片中党参炔苷的含量作为使用剂量的参考。

总之，新的干燥技术改善了传统中药材的加工方法和工艺，提高了药材安全指标，有效保持了药材的有用成分，进而提高了临床上中药饮片的等级。本试验通过研究现代加工工艺下的无硫党参饮片的安全性、有效性质量标准，为无硫党参饮片的临床安全、合理用药提供依据和保障，也为药典党参饮片的质量标准提高提供参考。2015年版《中华人民共和国药典》还收载了党参的炮制品米炒党参，此外，党参还有麸炒等炮制规格。党参通过米炒或麸炒后，其化学成分和药效作用均可能发生变化，临床应用也会有所差别。本试验也可作为党参炮制品标准提高的参考。

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（收稿日期：2018-05-10）

（修回日期：2018-07-19；编辑：陈静）