MUC6基因多态性与幽门螺旋杆菌感染的关联性研究

高 芳，秦金东，马立聪，2，刘得利，李晶晶，贾彦彬,2△

(1.包头医学院,内蒙古包头 014040；2.包头医学院第二附属医院内蒙古消化病研究所，内蒙古包头 014030;3.包钢第三职工医院检验科，内蒙古包头 014010)

幽门螺旋杆菌(H.pylori)是一革兰阴性菌，选择性地寄居在胃黏膜层，引起浅表性胃炎，增加人体发生萎缩性胃炎、肠上皮化生及胃癌的风险[1]。1994年，世界卫生组织把H.pylori定为胃的Ⅰ类致癌原。大量的研究表明:H.pylori感染引发的慢性炎症与胃癌的发生和发展关系密切[2-3]。

黏蛋白是一种在黏膜黏液层分布的高度糖基化的蛋白，覆盖于上皮组织表面[4]，对正常的胃黏膜起润滑和保护作用。研究表明，正常胃黏膜的胃体颈黏液细胞和腺体主要表达黏蛋白MUC6[5]。同时研究显示：H.pylori感染还能够改变MUC6基因表达[6]。而且，在胃癌的发生过程中MUC6基因异常表达[7]。然而，这一相关性是否是MUC6基因多态性通过影响H.pylori感染引起的未见报道。本研究主要采用标记单核苷酸多态性(tag-single nucleotide polymorphism,Tag-SNP)途径，研究在内蒙古包头地区汉族人群中，MUC6基因多态性与H.pylori感染的关联性。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2008年9月至2010年6月包头医学院第一附属医院体检者281例，其中女61例，男220例，年龄26～85岁，平均(59.10±11.57)岁。所有研究样本情况：在包头生活5年以上，汉族，互无血缘关系。排除高血压、糖尿病、萎缩性胃炎、不完全肠转化、胃及十二指肠溃疡等疾病，均无癌症病史。未做过H.pylori清除治疗及胃部手术。所有样本均提供2 mL血和知情同意书，经包头医学院伦理委员会批准。

1.2方法

1.2.1H.pylori感染检测 采用ELISA检测血清抗HP-CSAs IgG抗体(H.pyloriIgG试剂盒购自芬兰BIOHIT公司)。H.pylori感染阳性：血清H.pyloriIgG抗体滴度大于或等于30 EIU。

1.2.2SNP的选择 根据HapMap数据库(http://hapmap.ncbi.nlm.nih.gov)中中国人的数据，使用Agorithm-Tagger-pairwise Tagging软件筛选Tag-SNP，其中参数MAF>5%、r2>0.8用于选择。

1.2.3基因分型 基因组DNA从外周血白细胞中提取：蛋白酶K起消化作用，酚/氯仿提取，最后用乙醇沉淀。采用TaqMan法对筛选到的6个SNP进行基因分型，基因分型在北京诺赛基因组有限公司完成，操作按照生产厂商的说明进行(美国Applied Biosystems公司)。6个SNP的基因分型的成功率达到90%以上，实验设阴性和阳性对照，并随机抽取5%DNA结果好的样本进行重复检测基因型，结果100%一致。

1.3统计学处理 采用SPSS13.0统计软件进行分析。对同一染色体上的不同位点进行连锁不平衡分析时，使用Haploview软件；单体型块的划分采用D′置信区间法。用非条件性Logistic回归计算比值比(odds ratio,OR)及其95%可信区间(confidence interval,CI)，评价各等位基因、基因型及单体型与H.pylori感染的关联性。

2 结 果

2.1MUC6各SNP位点等位基因与H.pylori感染的关系 在281例样本中，SNP rs10794282、rs10794279、rs11246386、rs10751638、rs11826309、rs10794359的基因型频率分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律(P>0.05)。研究结果显示，所有检测SNP位点的等位基因在H.pylori感染阳性和阴性人群中的分布差异无统计学意义(P>0.05)，见表1。由于有缺失的数据，因此列之和不及样本的等位基因总数。

2.2MUC6各SNP位点基因型与H.pylori感染的关系 SNP rs10794282、rs10794279、rs11246386、rs10751638、rs11826309、rs10794359位点的基因型与H.pylori感染无关联，见表2。

表1 各SNP位点等位基因与H.pylori感染的关联分析

#：平衡性别和年龄因素

表2 各SNP位点基因型与H.pylori感染的关联分析

续表2 各SNP位点基因型与H.pylori感染的关联分析

#:平衡了性别和年龄因素

2.3MUC6单体型与H.pylori感染的关系 对MUC6基因不同位点进行连锁不平衡分析，发现rs10794359-rs11826309(Block 1)之间存在强连锁不平衡，构成单体型区域。分析结果显示各单体型在H.pylori感染阳性和阴性人群中的分布差异无统计学意义(P>0.05)，见表3。

表3 MUC6基因单体型与H.pylori感染的关系

3 讨 论

目前，H.pylori感染是全球范围内一个严峻的公共卫生问题[8]。孙文峰等[9]的研究发现，丹东地区H.pylori感染率为68.61%，建立良好的饮食习惯可有效地预防。值得关注的是，绝大多数人感染了H.pylori，都不会出现恶心、胃胀、胃疼等不适症状，也不会发展成胃溃疡和胃癌。归其原因，主要从不同菌株的特异性、环境因素和宿主易感性三方面来解释[10]。BLASER[11]的研究表明：在胃癌的发生过程中，宿主遗传因素发挥了关键性的作用。但个体从感染H.pylori到胃癌的发生是一个多步骤的过程：经过了萎缩性胃炎，肠化生，胃十二指肠溃疡等阶段；人一旦发生了萎缩性胃炎，H.pylori就失去了定植的土壤，其感染率反而降低，肠化生、胃十二指肠溃疡亦之。除此之外，人们一旦有萎缩性胃炎等胃部炎症时，就滥用抗生素，间接使H.pylori感染率下降。为了避免结果的偏移，因此把萎缩性胃炎、肠化生和胃十二指肠溃疡患者排除在研究外。

黏蛋白是一组高分子量的糖蛋白，形成天然的保护屏障：“黏液-碳酸氢盐屏障”，可有效地保护胃黏膜。在生理条件下，黏蛋白存在组织特异性表达，其中MUC2、MUC3和MUC4主要在肠道中占优势，而MUC1、MUC5AC和MUC6主要在胃中表达。MUC6是正常胃黏液中的一种分泌性黏蛋白，H.pylori感染可改变胃黏膜上皮黏液的分泌，直接决定胃黏液屏障的保护效果。H.pylori定植宿主后，可产生许多有害物质如细胞毒素、黏附素、尿素酶等损害正常胃黏膜细胞，同时MUC6表达增加并伴随MUC5AC的水平下调，减弱了胃黏液蛋白的保护作用，加重了胃部炎性反应[12]。

H.pylori感染与基因单核苷酸多态性的关联性增加，值得关注[13-14]。大量的研究表明，在胃癌变的过程中，H.pylori感染后可导致MUC1、MUC5AC和MUC6等基因发生变异[15-17]。

MUC6基因位于11号染色体，短臂15区5带[18]，共33个外显子，是胃癌分子遗传学研究的重要候选基因之一。REIS等[19]研究显示在胃癌发生过程中MUC6基因表达异常，可能与胃癌有关。此外，汪荣泉等[20]的研究发现，胃癌患者H.pylori感染可导致胃黏膜组织中MUC6 黏蛋白表达下调，提示破坏胃黏膜的保护屏障。因此，在本研究中采用TaqMan法探讨了MUC6基因多态性与H.pylori感染的关系。结果显示：包头地区汉族人群中MUC6 SNP rs10794282、rs10794279、rs11246386、rs10751638、rs11826309、rs10794359与H.pylori感染无显著关联。同时，各单体型在H.pylori感染阳性和阴性人群中的分布差异无统计学意义(P>0.05)。在JIA等[21]的研究中，没有数据表明MUC6常见SNP与H.pylori感染相关，这与本研究是一致的。当然，还需扩大样本量进一步证实本研究。