深圳市3～7岁健康儿童EV71疫苗接种及免疫状况研究

伦琼琼，刘渠，刘凤仁，王德全

(1. 广东药科大学公共卫生学院，广东 广州 510310； 2.深圳市龙岗区疾病预防控制中心，广东 深圳 518172)

肠道病毒71型(enterovirus71,EV71)是引起手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)的常见病毒之一，主要侵犯学龄前儿童，可引起手掌、足部、口腔、臀部等部位的疱疹，具有嗜神经毒性，可引发神经系统并发症，严重可致命，是引起手足口病重症和死亡病例的主要病毒类型[1-2]，而且在以往的手足口病流行中，EV71占据着优势地位，是我国严重的公共卫生问题，也是卫生部门关注的重点。我国自主研发的肠道病毒71型灭活疫苗(EV71疫苗)于2015年底获食品药品监督管理局批准上市，2016年下半年在全国范围内投入使用，但学龄前儿童EV71抗体阳性情况报告较少。为了解深圳市学龄前健康儿童EV71抗体产生状况及接种EV71疫苗的情况，为规划EV71疫苗接种方案和防制手足口病提供依据开展了此次研究工作。

1 材料与方法

1.1 调查对象

采用横断面调查方法，利用方便抽样方法对参加2018年春季龙岗区中心城幼儿园体检的健康儿童采集静脉血。本研究已获得广东药科大学伦理委员会的批准。根据2012年深圳市龙岗区肠道病毒71型抗体水平调查所得儿童EV71 IgG抗体阳性率为50%为基础，按照样本量计算公式n=400×q/p，计算得到样本量为400人，另外增加10%样本量，样本总量为440人。

1.2 血清标本

来源于龙岗区妇幼保健院在龙岗中心城幼儿园开展春季体检所采的血样标本，于2018年4月采集儿童静脉血，每管3～5 mL，4 ℃条件下保存尽快送实验室，实验室离心后取上清液，存放于-20 ℃低温条件下待检。

1.3 实验方法

采用北京万泰生物药业股份有限公司的肠道病毒71型IgM抗体检测试剂盒(产品批号：EI20180502A、EI20180201A )、北京贝尔生物工程有限公司的肠道病毒71型抗体(IgG)检测试剂盒(产品批号：20180301)，使用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测方法分别检测EV71-IgM抗体、EV71-IgG抗体。在试剂盒有效期之内严格按照试剂盒说明书指导规范操作。按要求进行配液，稀释样品，设立阴性、阳性和空白对照，温浴，洗板，加酶，显色，测定。

1.4 判断标准

设定酶标仪波长于450 nm处，用空白孔凋零后测定各孔吸光度值A450,标本吸光度值≥临界值为阳性,标本吸光度值<临界值为阴性。EV71-IgM抗体临界值=0.10+阴性对照孔A450,均值(当阴性对照孔低于0.05者按0.05计算)；EV71-IgG抗体临界值=0.10+阴性对照孔A450,均值(当阴性对照孔低于0.07者按0.07计算)。

1.5 统计方法

用Excel 软件录入实验数据，用SPSS 21.0软件进行数据分析，采用描述性方法进行数据的统计分析，采用χ2检验、多因素Logistic回归分析方法进行统计学检验，检验水准为α=0.05。

2 结果

2.1 一般情况

2018年4月，龙岗区妇幼保健院对龙岗区中心城多家幼儿园的儿童进行年度体检，共采集445人的静脉血，研究对象年龄3～7岁，男童238名，女童207名。经检测，438份血清的EV71-IgM抗体阳性率为7.31%(32/438)，445份血清的EV71-IgG抗体阳性率为80.90%(360/445)。

2.2 不同性别抗体阳性率情况

实验结果显示，男童EV71-IgM抗体阳性率为8.94%，EV71-IgG抗体阳性率为79.83%；女童EV71-IgM抗体阳性率为5.42%，EV71-IgG抗体阳性率为82.13%。男女童之间EV71-IgM抗体(χ2=4.29，P=0.830)和EV71-IgG抗体(χ2=0.71，P=0.951)差异均无统计学意义，见表1。

2.3 不同年龄抗体阳性率情况

实验结果显示，<5岁和≥6岁的儿童EV71-IgM抗体阳性率均比5～6岁的儿童高，随着年龄增长，各年龄层儿童体内EV71-IgG抗体阳性率逐渐升高，其中5～6岁年龄段的儿童增幅最大。χ2检验结果显示，3～7岁各年龄段儿童EV71-IgM抗体(χ2=24.68，P=0.002)差异有统计学意义，而EV71-IgG抗体(χ2=3.37，P=0.498)差异无统计学意义，见表1。

2.4 不同学校抗体阳性率情况

本实验血样标本来自14所幼儿园，实验结果显示，EV71-IgM阳性率排列前3位是家和盛世、城市立方、深中二幼3所幼儿园；EV71-IgG阳性率排列前3位是喜福汇、黄阁翠苑、里兹3所幼儿园。不同学校之间EV71-IgM阳性率(χ2=13.90，P=0.381)和EV71-IgG阳性率(χ2=10.69，P=0.637)差异均无统计学意义，见表2。

2.5 不同学生接种EV71疫苗情况的比较

χ2检验结果显示，不同年龄学生EV71疫苗接种率的差异有统计学意义(P<0.001)；而不同性别(P>0.954)及不同学校(P>0.584)的学生EV71疫苗接种率的差异均无统计学意义。对学生接种EV71疫苗的影响因素，经多因素Logistic回归分析结果显示，与年龄不满5岁的儿童相比，对年龄满5岁的儿童来说，年龄增长是其EV71疫苗接种率低的影响因素，见表3。

表1 龙岗区不同年龄健康儿童血清学EV71抗体情况Table 1 Serum antibody against EV71 of healthy children in different ages in longgang district

表2 各体检幼儿园EV71-IgM/EV71-IgG阳性率情况Table 2 Positive rate of EV71-IgM/EV71-IgG in various kindergartens

表3 不同学童EV71疫苗接种率的多因素Logistic回归分析Table 3 Multiple logistic regression analysis of the EV71 vaccination rate in preschool children

3 讨论

本研究显示，深圳市3～7岁健康幼托儿童EV71-IgM抗体阳性率为7.31%，比张东晓[3]的结果(15.9%)低，比刘凤仁[4]的结果(1.51%)高，该差异可能与在不同年份与月份采血有关，因为每年的优势肠道病毒类型不同，且每个月手足口病的流行强度也有较大差异。EV71-IgG抗体阳性率为80.90%，与张东晓(79.7%)的结果相近，比周世力[5](50%)、李静媚[6](45.64%)、刘凤仁[4](46.12%)等的研究结果均高，这可能是经过最近几年手足口病的流行，人群中EV71-IgG抗体得到累积；再者，近两年来EV71疫苗的使用，使得部分儿童体内产生了EV71-IgG抗体。

性别和不同学校学生之间的抗体阳性率差异无统计学意义，可能与样本量不够大有关，研究对象都是幼托儿童，同在一个密集的环境里，面临的易感因素几乎一样，从而感染的几率也相近。随年龄增长，儿童EV71-IgG抗体阳性率逐渐上升，与李佳萌[7]、陈建华[8]的研究结果一致。EV71-IgM抗体阳性率<5岁组和≥6岁组相近(8.76%、8.82%)，5～6岁组则较低(3.82%)，可能由于<5岁的儿童体质较弱，卫生意识较差，不良卫生习惯较多，导致感染EV71的几率更大。由于人体接触EV71会发生重复感染，这与实验结果一致，体内有EV71-IgG抗体的≥6岁组儿童，其血清也检出EV71-IgM抗体。

本研究对象EV71疫苗接种率较低，为10.56%(47/445)，与龙遗芳[9]的研究提到深圳市EV71疫苗接种率(21.26%)位居广东省首位不一致。按年龄分层后统计显示各年龄组EV71疫苗接种率为<5岁组22.56%(30/133)、5～6岁组10.45%(14/134)、≥6岁组1.69%(3/178)，EV71疫苗接种率随着年龄的增长呈现明显的下降趋势，与Logistic多元回归分析结果一致，年龄增长是EV71疫苗接种率降低的影响因素。这可能与EV71疫苗有接种年龄要求有关，2016年9月深圳开始使用EV71疫苗，适用于6月龄～5岁的儿童，在2018年满6岁的儿童，2016年已大于4岁，临近接种适龄期上限可能会影响到家长的接种意愿。<5岁的儿童与≥6岁的儿童相比，前者EV71疫苗接种率较后者高，体内产生了一定的EV71-IgG抗体；后者经历过较多的手足口病流行期，体质也比前者强，体内累积了一定的EV71-IgG抗体，虽然EV71疫苗接种率较低，也对由EV71引起的手足口病有一定的预防作用，这可能是前者EV71-IgM抗体阳性率与后者相近的原因，说明EV71疫苗在一定程度上对预防手足口病感染发挥了积极的作用。

手足口病报告发病数连续多年居丙类传染病之首，目前没有特效治疗药，接种EV71疫苗是最有效的防控方法。面对影响因素复杂[10-11]的手足口病，要想更好地防制手足口病，除了落实常规防护措施，更要增强家长的EV71疫苗接种意愿，提高EV71疫苗接种率。高志英[12]、姜璎慈[13]、孙景異[14]等的研究中提到，大部分的家长听说过手足口病，仍有少数家长没听过，而很多家长还不知道EV71疫苗，家长即便知道该苗，也因为担心疫苗的安全性而不想接种。顾伟[15]、张量智[16]、白云骅[17]等研究表明，EV71疫苗安全性和保护效果良好。卫生部门及时公布该苗相关安全和效果数据，可以提高大众对EV71疫苗的信心，提高EV71疫苗的接种率，争取早日形成人群免疫屏障，改善我国手足口病高发的局面。

综上所述，深圳市健康幼托儿童对手足口病的易感性较高，使用EV71疫苗后，儿童群体中产生了EV71-IgG抗体，对由EV71引起的手足口病有积极的预防作用，但目前EV71疫苗接种率普遍偏低。防制手足口病需要双管齐下，除做好常规防护措施外还要提高EV71疫苗接种率，从而降低手足口病的发病率。