宽叶打碗花全草的脂溶性化学成分研究

石舒雅，梁惠娴，尹永芹，陈艳芬，郭丽冰

(广东药科大学中药学院，广东广州 510006)

宽叶打碗花[Calystegiasepium(L.) R Br]为旋花科打碗花属多年生草本植物，又名旋花、狗狗秧、鼓子花、篱天剑、天剑草、篱打碗花、续筋根等，在全国范围广泛分布[1]。宽叶打碗花性凉、味甘，具有清热解毒之效；民间以其全草或根入药，可治疗小便不利、高血压，且外用可治丹毒和创伤等。《本草纲目》中记载，旋花全草甘滑微苦，利雄黄；其花可益气，去面皯黑色；其根可去腹中寒热邪气，亦利小便，续筋骨，合刀伤，治丹毒，补劳损，益精气。

目前，国内外对宽叶打碗花的报道很少，打碗花属植物的相关研究也较少[2-7]。为发掘宽叶打碗花的药用价值，并为今后其生物活性研究及质量标准建立提供物质基础，本课题组首次对其化学成分进行了系统研究，从中分离得到11个化合物，分别鉴定为东莨菪苷(1)、莨菪亭(2)、N-p-香豆酰酪胺(3)、伞形花内酯(4)、邻苯二甲酸二丁酯(5)、邻苯二甲酸二辛酯(6)、大豆脑苷Ⅰ(7)、去氢催吐萝芙木醇(8)、(6R,7aR)-表地芰普内酯(9)、绿原酸甲酯(10)以及β-谷甾醇(11)。以上所有化合物均为首次从该植物中分离得到。

1 仪器与材料

BrukerAV Ⅲ 500 MHz型核磁共振仪(瑞士布鲁克拜厄斯宾有限公司)；薄层色谱硅胶G、硅胶GF254板、柱色谱硅胶(青岛海洋化工厂)；LC-6AD半制备液相色谱仪(日本岛津公司)；Sephadex LH-20(美国GE公司)；RE-3000B旋转蒸发仪(上海亚荣化学仪器厂)；用于半制备液相和制备液相的试剂为色谱纯，其他均为分析纯。

宽叶打碗花药材于2015年8月采自吉林省磐石市烟筒山镇前山屯荒地，经广东药科大学李书渊教授鉴定为旋花科打碗花属植物宽叶打碗花[Calystegiasepium(L.) R Br]全草，标本(编号：Q-K201508001)存放于广东药科大学中药学院中药化学教研室。

2 提取与分离

宽叶打碗花药材干燥全草10 kg，体积分数95%乙醇加热回流提取3次，每次2 h，减压回收乙醇，得到粗浸膏853 g。依次用石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯及正丁醇萃取，减压回收各部位溶剂，得到石油醚萃取部位(150 g)、三氯甲烷萃取部位(76 g)、乙酸乙酯萃取部位(52 g)、正丁醇萃取部位(224 g)。

石油醚部位浸膏(150 g)采用硅胶柱色谱(200～300目)依次用石油醚-乙酸乙酯(体积比25∶1、15∶1、10∶1、5∶1、1∶1、0∶1)及纯甲醇洗脱，得到7个馏分(Fr.1-Fr.7)。Fr.1(3.5 g)反复经过硅胶柱色谱分离及重结晶得到化合物11(20 mg)。Fr.2(12.7 g)经中压反相ODS柱色谱(甲醇-水系统)分离，经TLC检测馏分并进行合并得3个亚馏分(Fr.2a-Fr.2c)，Fr.2c(5.2 g)利用ODS柱色谱(甲醇-水系统)分离纯化，并结合HPLC以及制备液相(流动相：体积分数88%甲醇)分离，得到化合物5(6 mg)和化合物6(8 mg)。Fr.3(128 mg)经半制备液相(流动相：体积分数90%甲醇)分离，得到化合物7(12 mg)。

三氯甲烷萃取部位76 g，用硅胶(200～300目)柱层析进行分离，以二氯甲烷-甲醇为系统梯度洗脱，得到7个馏分(Fr.1-Fr.7)。Fr.2(3.6 g)经SephadexLH-20柱色谱，甲醇洗脱，采用TLC检测跟踪合并，并结合HPLC以及制备液相(流动相：体积分数45%甲醇)分离，得到化合物8(5 mg)和化合物9(10 mg)。Fr.4(15.2 g)经ODS柱色谱(甲醇-水系统)分离，得3个亚馏分(Fr.4a-Fr.4c)，Fr.4b(283 mg)经半制备液相(流动相：体积分数35%甲醇)分离，得到化合物3(10 mg)和化合物10(13 mg)。Fr.5(2.4 g)经SephadexLH-20柱层析，甲醇洗脱，经TLC检测馏分并进行合并，得到3个亚馏分(Fr.5a-Fr.5c)，Fr.5a(124 mg)经制备薄层色谱，得到化合物1(12 mg)；Fr.5c(1.8 g)经反复重结晶，得到化合物2(18 mg)。Fr.6(2.8 g)经SephadexLH-20柱层析，甲醇洗脱，分离得到化合物4(10 mg)。

3 结构鉴定

化合物1：白色无定型粉末，mp 220～222 ℃，溶于甲醇。1H-NMR(500 MHz,DMSO)δ:3.83(s,-OCH3),6.32(1H,d,J=9.5 Hz,H-3),7.96(1H,d,J=9.5 Hz,H-4),7.15(1H,s,H-5),7.29(1H,s,H-8),5.36(1H,d,J=5.1 Hz,H-1′),3.29(1H,d,J=3.5 Hz,H-2′),3.44(1H,d,J=7.0 Hz,H-3′),3.70(1H,d,J=5.4 Hz,H-4′),4.59(1H,s,H-5′),5.17(1H,m,H-6′a),5.09(1H,m,H-6′b)。13C-NMR(125 MHz,DMSO)δ:160.5(C-2),113.3(C-3),146.0(C-4),109.69(C-5),144.25(C-6),149.9(C-7),103.0(C-8),148.9(C-9),112.2(C-10),99.6(C-1′),73.1(C-2′),77.1(C-3′),69.6(C-4′),76.8(C-5′),60.7(C-6′),56.1(—OCH3)。以上数据与文献[8]报道的一致，故鉴定化合物1为东莨菪苷(scopolin)。

化合物2：淡黄色针晶，mp 203～204 ℃，溶于三氯甲烷、二氯甲烷和甲醇。1H-NMR(500 MHz,DMSO)δ:6.21(1H,d,J=9.0 Hz,H-3),7.90(1H,m,H-4),7.21(1H,s,H-5),6.76(1H,s,H-8),3.36(3H,s,OCH3)。13C-NMR(125 MHz,DMSO)δ:160.6(C-2),111.3(C-3),144.8(C-4),109.5(C-5),145.3(C-6),150.9(C-7),102.6(C-8),149.1(C-9),112.8(C-10),55.7(OCH3)。以上数据与文献[9]报道的一致，故鉴定化合物2为莨菪亭(scopoletin)。

化合物3：白色无定型粉末，mp 232～233 ℃，溶于甲醇、二氯甲烷。酪胺单元：1H-NMR(500 MHz,DMSO)δ:3.33(2H,m,H-1),2.62(2H,t,J=7.4 Hz,H-2),7.36(2H,d,J=8.6 Hz,H-2′,6′),6.77(2H,d,J=8.6 Hz,H-3′,5′)。13C-NMR(125 MHz,DMSO)δ:40.7(C-1),34.5(C-2),129.6(C-1′),129.5(C-2′,6′),115.8(C-3′,5′),155.6(C-4′)；香豆酰单元：1H-NMR(500 MHz,DMSO)δ:6.37(1H,d,J=15.7 Hz,H-2),7.29(1H,d,J=15.7 Hz,H-3),7.02(2H,m,H-2′,6′),6.63(2H,m,H-3′,5′),8.00(1H,s,—NH)。13C-NMR(125 MHz,DMSO)δ:165.3(C-2),138.6(C-3),125.9(C-1′),129.6(C-2′,6′),115.1(C-3′,5′),158.8(C-4′)。以上数据与文献[10]报道的一致，故鉴定化合物3为N-p-香豆酰酪胺(N-p-ciscoumaroy-tyramine)。

化合物4：白色针状结晶，mp 223～225 ℃，溶于甲醇、二氯甲烷。1H-NMR(500 MHz,DMSO)δ:6.18(1H,d,J=9.4 Hz,H-3),7.91(1H,d,J=9.4 Hz,H-4),7.51(1H,d,J=8.5 Hz,H-5),6.77(1H,dd,J=8.5,2.3 Hz,H-6)，6.69(1H,d,J=2.2 Hz,H-8)。13C-NMR(125 MHz,DMSO)δ:161.9(C-7),161.1(C-2),156.1(C-9),145.2(C-4),130.3(C-5),113.8(C-6),112.0(C-3),102.83(C-8),111.9(C-10)。以上数据与文献[11]报道的一致，故鉴定化合物4为伞形花内酯(umbell-iferone)。

化合物7：白色无定型粉末，mp 179～181 ℃，溶于三氯甲烷、二氯甲烷和甲醇。1H-NMR(500 MHz,DMSO)δ:7.39(1H,d,J=8.5 Hz,N-H),0.86(6H,t,J=7.0 Hz,H-16′,18),1.26(40H,m,H-11～17,3′～15′),1.93(1H,m,H-10),5.60(1H,m,H-9),5.56(1H,m,H-8),1.99(1H,m,H-7),1.99(1H,m,H-6),5.40(1H,m,H-5),5.38(1H,m,H-4),3.98(1H,m,H-3),1.41(1H,m,H-3a),3.83(1H,m,H-2),3.94(1H,dd,J=10.5,5.5 Hz,H-1a),3.52(1H,m,H-1b),1.54(1H,m,H-3′a),3.81(1H,m,H-2′),4.11(1H,d,J=7.5 Hz,H-1″),2.95(1H,m,H-2″),3.13(1H,m,H-3″),3.08(1H,m,H-4″),3.05(1H,m,H-5″),3.67(1H,m,H-6″a),3.42(1H,m,H-6″b)。13C-NMR(125 MHz,DMSO)δ:122.2(C-1a),52.8(C-2),73.4(C-3),131.1(C-4),130.8(C-5),32.1(C-6),32.0(C-7),130.0(C-8),129(C-9),.31.7(C-10),22.1～31.3(C-11～17),13.9(C-18,16′),173.8(C-1′),70.5(C-2′),35.4(C-3a′),22.1～31.3(C-3′),104.0(C-1″),73.4(C-2″),76.9(C-3″),71.0(C-4″),76.5(C-5″),61.0(C-6″)。以上数据与文献[14]报道的一致，故鉴定化合物7为大豆脑苷Ⅰ(soya-cerebrosideⅠ)。

化合物8：淡黄色油状，溶于甲醇、二氯甲烷、石油醚和乙酸乙酯。1H-NMR(500 MHz,DMSO)δ:2.14(1H,d,J=17.0 Hz,H-2a),2.63(1H,d,J=17.0 Hz,H-2b),5.85(1H,s,H-4),5.41(1H,s,—OH),6.96(1H,d,J=16.0 Hz,H-7),6.25(1H,d,J=16.0 Hz,H-8),2.26(1H,s,H-10),0.95(3H,s,H-11),0.91(3H,s,H-12),1.79(3H,s,H-13)。13C-NMR(125 MHz,DMSO)δ:41.4(C-1),49.5(C-2),196.9(C-3),127.0(C-4),161.8(C-5),78.0(C-6),147.5(C-7),130.1(C-8),198.5(C-9),26.7(C-10),22.7(C-11),24.3(C-12),18.7(C-13)。以上数据与文献[15]报道的一致，故鉴定化合物8为去氢催吐萝芙木醇(dehydrovomifoliol)。

化合物9：无色结晶，mp 146～148 ℃，溶于甲醇、二氯甲烷。1H-NMR(500 MHz,DMSO)δ:5.78(1H,s,H-3),1.87(d,J=14.5 Hz,H-5),1.43(dd,J=14.0,3.5 Hz,H-5),4.07(1H,m,H-6),4.99(1H,d,J=3.0 Hz,—OH),2.27(1H,d,J=13.0 Hz,H-7),1.64(1H,dd,J=13.5,4.0 Hz,H-7),1.66(3H,s,H-8),1.19(3H,s,H-9),1.37(3H,s,H-10)。13C-NMR(125 MHz,DMSO)δ:170.8(C-2),112.2(C-3),183.2(C-3a),35.4(C-4),46.4(C-5),64.9(C-6),45.1(C-7),85.7(C-7a),26.8(C-8),30.8(C-9),26.1(C-10)。以上数据与文献[16]报道的一致，故鉴定化合物9为(6R,7aR)-表地芰普内酯[(-)-epiloliolide]。

化合物10：白色无定型粉末，溶于甲醇、二氯甲烷、三氯甲烷。1H-NMR(500 MHz,DMSO)δ:7.38(1H,d,J=15.9 Hz,H-7′),7.03(1H,d,J=1.5 Hz,H-2′),6.97(1H,dd,J=8.2,1.9 Hz,H-6′),6.77(1H,d,J=8.1 Hz,H-5′),6.11(1H,d,J=15.9 Hz,H-8′),5.02(1H,d,J=4.7 Hz,H-3),3.81(1H,m,H-4),3.55(3H,s,—OCH3),3.57(1H,m,H-5),2.02～2.52(m,H-2,6)。13C-NMR(125 MHz,DMSO)δ:73.2(C-1),39.8(C-2),69.5(C-3),71.1(C-4),67.0(C-5),40.0(C-6),173.7(C-7),125.5(C-1′),116.0(C-2′),148.6(C-3′),145.7(C-4′),114.8(C-5′),121.5(C-6′),145.3(C-7′),114.0(C-8′),165.5(C-9′),51.9(—OCH3)。以上数据与文献[17]报道的一致，故鉴定化合物10为绿原酸甲酯(methylchlorogenate)。

化合物11：白色针晶，mp 136～138 ℃，溶于石油醚、乙酸乙酯、二氯甲烷，不溶于甲醇；Liebermann-Burchard反应呈阳性。与β-谷甾醇对照品共薄层，斑点颜色及Rf值与对照品一致；与β-谷甾醇对照品混合后测定其混合物的熔点，结果显示熔点不下降，故鉴定化合物11为β-谷甾醇(β-sitosterol)。

4 讨论

宽叶打碗花目前多被视为杂草，但其全草或根可药用，而且分布广泛，资源量大，有着悠久的药用历史。目前，对宽叶打碗花化学成分和药理作用的研究甚少，同属植物的相关研究也较少[2-7]。本研究对宽叶打碗花全草的脂溶性成分进行分离纯化，并根据化合物的理化性质、波谱及光谱数据进行结构鉴定，共鉴定得到11个化合物，其中化合物1、3～10为首次从该属植物中分离得到，丰富了宽叶打碗花化学组分信息库，并为宽叶打碗花的药效研究提供更多的物质基础，为其后续开发利用提供科学依据。