瘦素及瘦素受体与贲门失弛缓症的相关性分析

张哲 方毅 舒亦斌 涂金明 吴绵勇 黄小刚

食管贲门失弛缓症为食管肌肉功能障碍性疾病，其主要特征是食管缺乏蠕动，食管下括约肌高压和对吞咽动作的松弛反应障碍。主要发生在食管下段，本病是一种少见病，其发病率国外报道约0.5～1/10万，占食管疾病的2%～20%。其病因至今尚未完全明确，可能与精神因素、自身免疫、病毒感染和遗传因素导致食管肌肉层神经节变性、退化、减少或缺如等有关［1］。瘦素是肥胖基因编码的蛋白相关产物，瘦素受体是一种单跨膜的细胞受体，研究认为瘦素与消化道肿瘤关系密切，瘦素及受体在结肠癌、胃癌、食管癌多种肿瘤细胞中均有表达，贲门失弛缓症约2%～7%可发生癌变［2］。本文探讨瘦素及其受体在食管贲门失弛缓中的意义。

1 材料与方法

1.1 标本来源 选择2012年1月至2017年12月本院食管贲门失弛缓症患者22例，男6例，女16例；年龄16～68岁，平均年龄60.3岁。均有吞咽困难。内镜检查食管上段有不同程度的扩张，下段有环形收缩，取贲门处食管组织。后行X线食管钡剂造影，呈典型鸟嘴症，均经高分辨食管测压确诊。同时取健康者食管组织30例为对照组，男20例，女10例；年龄28～68岁，平均年龄54.4岁。所有标本均常规脱水，石蜡包埋，4μm连续切片。所有病例取石蜡切片一张行苏木素-伊红（HE）染色。所有入组人员均签署知情同意书，本项目经本院伦理委员会审核批准。

1.2 免疫组织化学 Leptin羊抗人多克隆抗体（SC-842）和ob-R羊抗人多克隆抗体（SC-1834）购自Santa Cruze公 司 ；Immunostain SP Kit试 剂 盒 购 自Maxim Biotech，Inc公司，SC-842与SC-1834的工作液浓度为1∶100；二胺基联苯氨（DAB）显色试剂盒购自北京中山生物技术有限公司。切片常规进行脱蜡、阻断内源性过氧化酶的活性、抗原修复和封闭，采用链霉菌抗生物素蛋白一过氧化物酶（SP法）进行免疫组织化学染色，DAB显色。

1.3 免疫组化结果判断 瘦素表达阳性为细胞质染成棕黄色颗粒。瘦素受体表达阳性为细胞膜染成棕黄色颗粒。按以下方法进行半定量分类：组织标本未染色（-）；＜25%细胞染色（+）；25%～50%细胞染色（++）；50%～75%肿胞染色（+++）；＞75%细胞染色（++++）。每片选择4个不重复的高倍视野，计算阳性表达细胞占全部细胞总数的百分率，取其均值为阳性表达率。

1.4 图像分析 采用Imge-pro plus 6.0软件对每张切片400倍数随机摄像的图像进行分析，取细胞组织中瘦素及受体染色平均积分吸光度值（IA）表示阳性物质相对含量。

1.5 统计学方法 采用SPSS17.0统计软件。计量资料以（±s）表示，组间比较采用t检验；计数资料用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 瘦素和瘦素受体在食管贲门失弛缓及正常食管组织中的表达 瘦素和瘦素受体在食管贲门失弛缓组织中表达分别为81.8%、86.4%，正常食管组织中的表达为53.3%、50.0%。两者比较差异有统计学意义。见表1、2。

表1 瘦素在正常食管及贲门失弛缓症者食管中的表达（n）

表2 瘦素受体在正常食管及贲门失弛缓症者食管中的表达

2.2 贲门失弛缓症组织中的瘦素及其受体与临床特征的关系 瘦素及受体的表达与性别、年龄差异无统计学意义。见表3。

表3 瘦素和瘦素受体表达与年龄、性别相关性［n（%）］

2.3 贲门失弛缓症与正常食管组织中瘦素及受体的IA值比较 瘦素在贲门失弛缓症及正常食管组织 中 的 平 均 IA 值 分 别 为 ：（86365.63±25684.24）、（650476.25±15256.52）； 其 受 体 在 贲 门 失 弛缓症与正常食管组织中的平均IA值分别为（89524.25±18524.25）、（68751.25±11568.25）。 瘦 素及其受体在贲门失弛缓症与正常食管组织中的平均IA值比较差异均有统计学意义。

3 讨论

国内外大量研究表明瘦素可以作为促细胞分裂剂、存活因子、代谢调节剂、血管生长因子等而对外周很多器官产生作用［3］，曾有学者发现瘦素对胃食管反流病的发生发展中起一定作用，国内相关研究［4］亦证实食管癌瘦素及其受体的表达率均高于正常的食管黏膜。瘦素及其受体与食管病变关系密切，贲门失弛缓症是食管癌的癌前病变之一，其病因尚不明确。

本资料结果显示，瘦素及其受体在22例食管贲门失弛缓标本中的表达率分别为81.8%、86.4%；在不同年龄与性别间的表达差异无统计学意义，其在正常食管组织中的表达率分别为53.3%、50.0%。瘦素及其受体在食管贲门失弛缓及正常食管组织的表达率比较均有统计学意义，推测瘦素及其受体，其在食管贲门失弛缓组织中呈现出双重高表达现象，且高于正常人食管组织，贲门失弛缓症患者因食管蠕动能力下降，食物易潴留，细菌繁殖及物理刺激，致黏膜糜烂，溃疡形成，在上皮增生修复过程中，瘦素作为一种促有丝分裂剂及非特异性的促肿瘤生长因子，促进细胞的生长和繁殖［5-6］，同时可能促进血管及细胞的异常增生，导致癌变，推测高表达的瘦素及受体可能直接参与食管贲门失弛缓症发生癌变的发展的过程。图像分析结果显示食管贲门失弛缓症患者食管组织中瘦素及其受体的平均IOD值明显高于正常食管组织（P＜0.01），提示食管贲门失弛缓症食管组织不仅有较高的瘦素及受体表达率，且表达含量高于正常食管组织。食管组织中瘦素及其受体异常表达可能会引起一系列病理生理改变，其中高含量表达的瘦素就有可能激活某些信号通路导致神经细胞的变性，最终引起食管肌间神经丛抑制性神经缺失导致其发病［7］，瘦素还可以作为有丝分裂剂和细胞生长因子促进食管平滑肌分裂增生，引起食管平滑肌肥厚，导致食管贲门失弛缓症的形成。瘦素及受体在贲门失弛缓症及食管癌中均双重高表达现象，推测瘦素及其受体在贲门失弛缓症发生发展的过程中可能起重要的作用。

综上所述，瘦素及其受体在食管贲门失弛缓组织中呈现双重高表达现象，提示其与食管失弛缓症发生及癌变关系密切。推测通过检测瘦素及其受体可以作为早期发现食管失弛缓症和监测食管失弛缓症发生癌变的一种辅助实验指标，拮抗瘦素及其受体也可能是治疗贲门失弛缓症及预防贲门失弛缓症癌变的方式之一。